טראנסגנטי (TG) מודלים העכבר לספירה לספק הזדמנות מצוינת לחקור כיצד ומדוע רמות Aβ או טאו בשינוי CSF התקדמות המחלה בחולים אנושיים. כאן, אנו מדגימים מעודן צ'יסטרנה magna טכניקה לנקב הדגימה CSF סדרתי של העכבר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
טכניקה אוסף טורי של הנוזל השדרתי מן צ'יסטרנה מגנה על עכבר
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחלת אלצהיימר (AD) היא מחלה ניוונית מתקדמת מאופיינת על ידי פתולוגית בתצהיר של תאי β עמילואיד פפטיד (Aβ) והצטברות intraneuronal של חלבון טאו hyperphosphorylated. בגלל נוזל המוח והשדרה (CSF) נמצא בקשר ישיר עם המרחב תאי המוח, הוא מספק השתקפות של שינויים ביוכימיים במוח בתגובה תהליכים פתולוגיים. CSF מחולים לספירה מראה ירידה בצורת חומצה אמינית 42 של Aβ (Aβ42), ועלייה טאו טאו סך hyperphosphorylated, אם כי המנגנונים האחראים שינויים אלה עדיין אינם מובנים במלואם. טראנסגנטי (TG) מודלים העכבר לספירה לספק הזדמנות מצוינת לחקור כיצד ומדוע רמות Aβ או טאו בשינוי CSF עם התקדמות המחלה. כאן, אנו מדגימים מעודן צ'יסטרנה magna טכניקה לנקב הדגימה CSF מן העכבר. טכניקה זו מאפשרת דגימה עדין מאוד סדרתי דגימות CSF להיות המתקבל עכבר באותו חודש 2-3 במרווחים אשר מאוד מצמצם את ההשפעה של השתנות מבלבלים בין העכבר ברמות Aβ או טאו, כך שניתן לזהות שינויים עדינים לאורך זמן. בשילוב עם Aβ ו טאו ELISA, טכניקה זו יהיה שימושי עבור מחקרים שנועדו לבחון את היחס בין רמות של CSF Aβ42 ו טאו, חילוף החומרים שלהם במוח במודלים של העכבר לספירה. מחקרים בעכברים Tg יכול לספק אימות חשוב לגבי הפוטנציאל של Aβ CSF או רמות טאו לשמש סמנים ביולוגיים על התקדמות המחלה ניטור, כדי לפקח על ההשפעה של התערבויות טיפוליות. כמו עכברים אפשר להקריב את המוח ניתן לבחון שינויים ביוכימיים או היסטולוגית, המנגנונים שבבסיס השינויים CSF ניתן להעריך טוב יותר. נתונים אלה צפויים להיות אינפורמטיבי לפרשנות של שינויים CSF האדם לספירה.
פרוטוקול
משיכת צינור זכוכית נימי
- צינור זכוכית נימי היא לרכוש את המכשיר סאטר Inc (בורוסיליקט זכוכית, B100-75-10).
- משוך את צינורות נימי על סאטר P-87 Flaming micropipette חולץ, עם מדד חום להגדיר 300 ומדד הלחץ נקבע על 330.
- חתוך את קצה צינור זכוכית נימי במספריים, כך קצה קוני בעל קוטר פנימי של כ - 0.5 מ"מ.
צ'יסטרנה magna לנקב טכניקה CSF
דגי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
אנו תיאר פרוטוקול אמין הדגימה הסידורי של CSF מעכברים ללא זיהום פלזמה לזיהוי.
1. ההליך כולו אורך בדרך כלל 10 דקות לכל עכבר (כולל הרדמה). נפח CSF שהושגו תלויה זנים העכבר. בעכברים PS / APP Tg כפול אנו used2, הנפח הממוצע הוא כ - 5 μl (3-7 μl), ואילו (JNPL3) עכברים P301L 3 נותן תשואה של כ - 10 μl μl-15. עבור דגימה סדרתי, לכל היותר 7-8 μl יכול להילקח בבטחה כל פעם בהפרש של 2-3 חודשים.
2. במהלך הניתוח, חשוב למקם את.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
העבודה שלנו היא נתמכת על ידי NIH מענקים NS048447 ו AG017216to KD. לי ליו רוצה להודות לד"ר הייקי Tanila (מאוניברסיטת קופיו, Kuopio, פינלנד) על הפיקוח שלו ואת התמיכה במהלך הפיתוח של הפרוטוקול המקורי.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מקורות
- Liu, L., et al. Longitudinal observation on CSF Abeta42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice. Neurobiol Dis. 17, 516- (2004).
- Holcomb, L., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
