Name: Murine נוהל השתלת כליה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-10T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: למדו את נוהל השתלת הכליה בעכברים, כולל קצירת איבר התורם, השתלה לנמען ומעקב אחר רמות הקריאטינין לאבחון תפקוד השתל. שיטה זו מאפשרת חקר אירועים אימונולוגיים ודחיית שתלים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

מחקרים אלה היו נתמך בחלקו על ידי מימון על ידי NIH R01 AI36532 אל השדים. ברצוננו להודות תמיכה מצטיינים השתלת הפתולוגיה מסופק על ידי ד&quot;ר טיבור Nadasdy, ועל הדרכה הנולד יסולא בפז ו המסופקים על ידי המנוח ד&quot;ר צ&#39;רלס ג&#39;Orosz בייזום זה מאמץ המחקר.

תורמים איברים קציר (2): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי התורם באמצעות IP 65mg/kg pentobarbital; הרדמה מתוחזק על ידי Isoflurane (2-3%). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך קו האמצע מעצם החזה אל חיק להיכנס לבטן התורם ולחשוף את הכליה השמאלית ידי הזזת המעי רוחבית לצד ימין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את הכליה השמאלית ידי ligating וחלוקת כלי יותרת הכליה ועל האשכים עם תפר 8-0 משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגייס את אבי העורקים מעל צומת עם העורק עורק הכליה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגייס את נחות הווריד הנבוב (IVC) מעל ומתחת לצומת עם העורק עורק הכליה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולקשור אבי העורקים מתחת העורק עורק הכליה עם תפר 8-0 משי כדי למזער את הדימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנתחים את השופכן השמאלי hilum מן הכליה אל שלפוחית ​​השתן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את צומת ureterovesical באמצעות הכחשה caudad על הכיפה שלפוחית ​​השתן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> והבלו תיקון קטן, אליפטי של שלפוחית ​​המכילה את צומת ureterovesical שמאל, המשמש לשיקום השתן באמצעות השקה שלפוחית ​​השתן אל שלפוחית ​​השתן. השופכן הימני אינו כלול עם שלפוחית ​​השתן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולקשור IVC להלן העורק עורק הכליה עם תפר 8-0 משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולקשור אבי העורקים מעל עורק וריד כליות, ולאט לאט perfuse השתל באתרו עם קור 0.2-0.4ml, heparinized פתרון לקטט רינגר דרך האאורטה infrarenal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולקשור IVC מעל עורק וריד כליות עם תפר 8-0 משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transect את הווריד כליות בצומת שלה עם IVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחלקים את אבי העורקים בעקיפין, כ 2 מ&quot;מ מתחת העורק הכלייתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכליות ואת אספקת הדם שלה עם השופכן מצורף התיקון שלפוחית ​​השתן כמקשה אחת. חנות בפתרון לקטט רינגר על הקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר על ידי התורם נקע בצוואר הרחם בהרדמה. </li></ol> נמען השתלה (2): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את הנמען עם IP מ&quot;ג / ק&quot;ג 65 pentobarbital ולשמור על ההרדמה על ידי Isoflurane (2-3%). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך קו האמצע, לכסות את המעי עם גזה רטוב ובזהירות לסגת אותו בצד שמאל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולקשור השופכן הימני, עורק וריד כליות, ולהסיר את הכליה הימנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לבודד צולבות מהדק אבי העורקים infrarenal ו-IVC עם שני 4 מ&quot;מ מהדק microvasular לאחר ligating הענפים המותני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים תפר 10-0 ניילון דרך עובי מלא של אבי העורקים ואת לסגת לעשות aortaotomy אליפטי על ידי חתך בודד (כחמישית בקוטר של כלי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך venotomy האורך ידי פירסינג IVC עם מחט 30 מד ולהרחיב כראוי באמצעות microscissors. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשקות גם את אבי העורקים ו-IVC עם מלוחים heparinized כדי לנקות דם intraluminal או קרישי דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כליה מתורם מן הקרח ולמקם אותו תוך בטן ב באגף הימני של העכבר. כליה התורם נשמרת לחות עם כרית ספוג מלוחים קר גזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים שתי התפרים להישאר בפסגת הפרוקסימלית ומ דיסטלי של aortaotomy הנמענים עם השרוול התורמים אבי העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן השקה מקצה השרוול בצד בין התורם אבי העורקים ואת הקיר הקדמי של aortaotomy הנמענים, באמצעות 2 ~ 3 רצוף 10-0 התפרים ניילון בחלקה החיצוני של האאורטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סובבו את כליה מתורם השתל אל האגף השמאלי של הנמען. לחזור על התהליך הקודם בין השרוול התורם אבי העורקים ואת הקיר האחורי של aortaotomy הנמענים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע השקה end-to-הצד בין הווריד תורם הכליה לבין הקיר האחורי של מקבלי IVC, באמצעות 4-5 רצוף 10-0 התפרים ניילון בפנים של IVC. ואז הקיר הקדמי של הווריד IVC ותורמים כליות סגורים עם 4 ~ 5 תפרים רציפה מחוץ IVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השקה של וריד וגם עורק חייב להסתיים בתוך 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את השתל עם קר מלוחים מספר פעמים במהלך השקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחלקים את הכיפה של שלפוחית ​​השתן הנמען לעצור את הדימום עם כויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך קטן על הכיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים שתי התפרים נשארים של ניילון 10-0 כדי anastomize התיקון תורמים שלפוחית ​​השתן קטן עם כיפה הנמענים שלפוחית ​​השתן. כל צד של השקה היא sutured עם 8 ~ 10 תפרים רציפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הבטן בשתי שכבות עם תפר מתמשך 4-0 סטרילי סינתטיים, vicryl נספגים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן עכברים הנמען מלוחים חמים 0.4ml במהלך הניתוח לסירוגין על ידי הזרקה IV. </li></ol> לאחר הניתוח טיפול של נמען <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר סגירת הבטן, זריקה תוך שרירית בודדת של פניצילין (500U/10g) מנוהלת (2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנוסף, מקבלי לקבל 0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג לתוך שריר עצירות על 0 יום 1 יום לאחר ניתוח לכאב. בעקבות ניתוח, השתלת לקבל מים המכילים sulfatrim (100mg/kg) עד הניסוי היא terminated. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במשך 24 שעות לאחר הניתוח הראשון עכברים נשמרים בטמפרטורה מבוקרת חממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים בדרך כלל להתאושש מן ההרדמה תוך שעה 1 של המבצע ומקבלים מזון רגיל כרצונך מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התפרים יוסרו עור 2 שבועות לאחר הניתוח. </li></ol> נמען Nephrectomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים 4 הנמען ~ 7 ימים שלאחר השתלת כליה עם 65 מ&quot;ג / ק&quot;ג IP pentobarbital; הרדמה מתוחזק על ידי Isoflurane (2-3%). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את הבטן דרך חתך קו האמצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסים את המעיים עם גזה מלוחים ספוג ובזהירות לסגת אותו לצד ימין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכליה השמאלית לאחר ligating השופכן השמאלי, כליות וריד בעורק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הבטן בשתי שכבות עם תפר רציף סינתטי 4-0 vicryl נספגים. </li></ol> שלמות וקראטינין מדידות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשבוע איסוף דם סמ&quot;ק דו שבועי של פחות מ 0.2 מבוצעת ללא הרדמה או submandibularly או רטרו orbitally בהרדמה Isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמותי כל קריאטינין בדם נקבעים באמצעות Analyzer אני-Stat Portable קלינית (Heska קורפ, בפורט קולינס, CO). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יחידות קונבנציונלי (mg / dl) מומרים יחידות SI של mmol / L על ידי הכפלת יחידות קונבנציונלי על ידי 88.4. </li></ol>

<ol><li>Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplants+in+mice.+An+analysis+of+the+immune+status+of+mice+bearing+long-term%2C+H-2+incompatible+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22JExpMed%22%5BJournal%5D)">Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants.</a> JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).</li>
<li>Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li>
</ol>

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי אוניברסיטת מדינת אוהיו IACUC.

ביצענו כ 1200 מקרים של השתלת הכליה בעכברים עם שיעור הצלחה טכנית של 90%&gt;. לעומת השתלת לב, את שיעור ההצלחה של השתלת כליה הוא נמוך בדרך כלל. עם זאת, במעבדה שלנו שמרה על שיעור הצלחה גבוה (&gt; 90%) של השתלת כליה. נקודות המפתח להצלחה הן כדי להפחית פציעות reperfusion לכליה הן התורמות ומקבלי, ולמזער את הדימום פקקת בכל הליך שלאחר הניתוח. הגורמים הבאים עשויים להיות החשובים ביותר: (א) להפחית דימום הנמען במהלך הניתוח ככל האפשר באמצעות ניתוח זהיר ועדין, (ב) לצמצם פעמים איסכמי ו צולבות מתהד...

<table><tbody><tr><td>i-STAT</td><td>אחר</td><td>HESKA</td><td>Cat 5101</td><td></td></tr><tr><td>מחסית i-STAT</td><td>אחר</td><td>HESKA</td><td>CAT 5110-CREA</td><td></td></tr><tr><td>Sulfatrim</td><td>אחר</td><td>Actavis</td><td>R02109</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>אחר</td><td>NOVAPLUS</td><td>CA-0474</td><td></td></tr><tr><td>חוט תפירה 10-0</td><td>כירורגיה</td><td>Sharpoint</td><td>AK0100</td><td></td></tr></tbody></table>

murine נוהל השתלת כליה

Murine Renal Transplantation Procedure

השתלת הכליה בעכברים orthotopic היא הליך מאתגר מבחינה טכנית. למרות השתלת כליה הראשון עכברים בוצעו על ידי ראסל ואח&#39; מעל 30 שנה (1) ומעודן ידי ז&#39;אנג ואח&#39; שנים מאוחר יותר (2), כמה אנשים בעולם שולטים על הליך זה. במעבדה שלנו אנחנו ביצעו בהצלחה 1200 השתלות כליה orthotopic עם שיעור&gt; הישרדות 90%. נקודות המפתח להצלחה כוללים שליטה קפדנית של דימום פציעה, reperfusion ופקקת, הן במהלך ההליך שלאחר ההשתלה, ושימוש 10-0 במקום 11-0 תפר עבור anastomoses. לאחר הניתוח וטיפול של הנמען חשוב מאוד השתלת הצלחה והערכה. כל מקבלי השתלת כליה לקבל אנטיביוטיקה בצורה של הזרקה של פניצילין מיד לאחר השתלת ו sulfatrim במי השתייה הרף. לבריאות בעלי חיים בסך מוערך מדי יום שלם קריאטינין מנתח הדם מבוצעות באופן שגרתי עם מכשיר I-STAT ניידים להערכת תפקוד השתל.

השתלת כליה בעכברים היא הליך מאתגר מבחינה טכנית זה דורש טיפול זהיר שלאחר הניתוח והטיפול להצלחה.

Murine נוהל השתלת כליה

השתלה אורתוטופית של כליה בעכברים היא הליך מאתגר מבחינה טכנית. למרות שהשתלות הכליות הראשונות בעכברים בוצעו על ידי Russell...

הליך השתלת כליה בעכבר מתחיל בהוצאת איבר מהתורם, שבה הכליה השמאלית מוסרת מהעכבר התורם ונשמרת על קרח. הכליה הימנית מוסרת מהעכבר המקבל כדי לפנות מקום לכלית התורם. לאחר מכן, כלית התורם מוצאת מהקרח ומושתלה אל העכבר המקבל.העכבר נשאר להחלים במשך ארבעה ימים לפני הסרת הכליה המקורית שנותרה. לאחר שבעה ימים, רמות הקריאטינין מנוטרות באמצעות אנלייזר קליני נייד מסוג I STAT כדי להעריך את תפקוד הש transplanted. שלום, אני שרה היימר מהמעבדה של ד"ר גרג האדלי ומחלקת כירורגיית השתלה באוניברסיטת אוהיו סטייט.היום נדגים לכם פרוצדורה להשתלת כליה בעכבר. ניתוח השתלת הכליה שתראו היום יבוצע על ידי המומחה הנוירוכירורג של המעבדה שלנו, Jing Wing. אנא השתמשו בפרוצדורה זו במעבדה שלנו כדי לחקור את האירועים האימונולוגיים של דחיית הש transplanted, כמו גם אסטרטגיות למניעת התרחשות דחייה.בואו נתחיל. כדי להתחיל את קצירת איבר התורם, יש לבצע צביטה של בהונות הרגליים כדי לוודא שהחיה נמצאת תחת הרדמה מלאה. תוך עבודה בשטח סטרילי ובשימוש במכשירים שעברו סטריליזציה, בצעו חתך בקו האמצע בעכבר המורדם, מהסטרנום (עצם החזה) ועד לפוביס (עצם החיק), וחשפו את הכליה השמאלית על ידי הזזת המעי לצד ימין כדי לבצע פרפוזיה של כלית התורם. קשרו תפרי משי TY 4-0 מסביב לאאורטה ולוריד החלול התחתון, מתחת ומעל לעורק ולוריד הרנליים.ביצוע פרפוזיה איטית in situ

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בידול בימוי של hESCs לתוך תאים ספציפיים יצרה עניין רב ברפואה רגנרטיבית. אנו מספקים תמציתי, צעד אחר צעד פרוטוקול...

הגורל מיפוי בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי גיבוש תפלצת

השתלה של איים מבודדים הוצע להיות טיפול פוטנציאלי עבור סוכרת מסוג 1. כאן אנו מתארים שיטה לבודד איים מהעכבר pancreata ואת השתלת אותם למרחב subcapsular של הכליה.

שיטה בידוד איילט Murine והשתלות כליה Subcapsular

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לחקר האימונולוגיה של דחייה. המודל הכירורגי הציג דוחות על זמן ניתוח קצר וטכניקה תמציתית. בהתאם לשילוב הזן של התורם-מקבל, הכליה המושתלת עלולה לפתח דחייה תאית חריפה או נזק כרוני לאלוגרפט, המוגדר על ידי פיברוזיס אינטרסטיציאלי וניוון צינור.

השתלת כליה עכבר: מודלים של דחיית השתל

דוח זה מספק תיאור מפורט של השתלת תימי עכברים מעכברים בגילאים שונים מתחת לקפסולת הכליה של מושתלי עכברים חסרי חיסון. מטרת גישה זו היא למדל התפתחות תאי T ואירועי ברירה תימית in vivo.

בידוד והשתלה של שתלי הרתי Murine בני שונים.

מטרת כתב היד הזה היא לתאר את השלבים הנדרשים לביצוע השתלת כליה בעכבר, תוך שימת לב מיוחדת לפרטי האנסטומוזיס העורקי.

טכניקת השתלת כליה בעכברים

אנו מספקים שיטה פשוטה ויעילה להשתלה 2 '-deoxyguanosine שטופלו E 29.7 בלוטת התימוס לתוך כמוסת הכליה של עכבר ערום. שיטה זו צריכה להיות מחקר של תפקוד שני תאים אפיתל הרתי והתבגרות תאים T.

הכליות Subcapsular ההשתלה של 2 '-Deoxyguanosine-התייחסו מורין מורנה בתימוס בעכברים ערומים

פרוטוקול זה מציג טכניקה כירורגית חדשה של השתלת כליה של עכברים המתמקדת באסטרטגיית אנסטומוזיס עורקית שונה. כמו כן מוצגת טכניקת תפר כלי דם הכוללת שיטת אנסטומוזה פשוטה ובטוחה יותר של השופכן-שלפוחית השתן. שינויים אלה מקצרים את זמן הניתוח ומשפרים את שיעור ההצלחה של הליך השתלת הכליה של העכבר.

טכניקה כירורגית מותאמת להשתלת כליה בעכברים

מודל השתלת הכליה האורתטופית של חולדה תורם לחקר המנגנון של דחיית כליות. המודל הנוכחי מגביר את הישרדותם של המושתלים ללא הפרעה לאספקת הדם ולרפלוקס ורידי של פלג הגוף התחתון באמצעות אנסטומוזיס מקצה לקצה של השתלת כליות ושיטת "מנהרה" מקצה לקצה של אנסטומוזיס בשלפוחית השתן של השופכן.

מודל השתלת כליה אורתוטופית של חולדה לדחיית כליאה

פרוטוקול זה מתאר הליך הישרדות לכריתת לימפאדנקטומיה כלייתית דו-צדדית של עכברים בטוחה ונסבלת היטב.

כריתת לימפהדנקטומיה דו-צדדית של עכברים

הלב heterotopic העכבר מודל השתלת הוכח על ידי חוקרים רבים להיות שיטה חשובה לחקר המנגנונים של דחייה התגובה החיסונית. עם זאת, טכניקות מעורבות עדיין מאתגרת. על ידי שינוי שיטות סטנדרטיות יש לנו הצלחה עם יותר מ 1000 השתלות.

השתלת הלב Heterotopic ב עכברים

למדו את נוהל השתלת הכליה בעכברים, כולל קצירת איבר התורם, השתלה לנמען ומעקב אחר רמות הקריאטינין לאבחון תפקוד השתל. שיטה זו מאפשרת חקר אירועים אימונולוגיים ודחיית שתלים.

Murine נוהל השתלת כליה

גלה סרטונים נוספים