העברת גרעין לתוך ביציות עכבר

אנו מבצעים העברה גרעינית (NU Nuclear transfer) מכיוון שהקבוצה שלנו מתעניינת בתכנות מחדש. זהו תהליך מרתק שבו גרעין מובחן יכול לעבור תכנות מחדש למצב עוברי. אלו הם הריאגנטים case SUM ו-HCCV, וזהו hyaluronidase.

ראשית, אני מכין צלחת שתועבר לאינקובטורים כדי להשוות את רמת ה-CO2. אלו הן טיפות, מספר טיפות עבור Turing המכוסות בשמן מינרלי. כך הם מכיילים את אטמוספירת ה-CO2.

כעת הכינו טיפה של HCZB. טיפה זו תשמש לשטיפה. היא מונחת על ה-days ומכוסה שוב בשמן מינרלי זה.

הגובה הזה יורד עם היאלורונידאז. החלק הזה כאן הוא פשוט טיפות HCCP. אלו משמשות לשטיפה.

זהו שלב להסרת תאי ulu מצד ה-O. שלב זה מחומם כך שהוא יתחמם עד שאחזור ואקח את דגימות השמן מהעכברים ואכסה הכל בשמן מינרליים. אלו הן טיפות PVP לניקוי המחט ולביצוע העברה של התאים לתוכה, וזהו HCCB בתוספת Cyla B. וכאן אבצע את המניפולציות.

בסדר, זהו צבע המחט. מה שאני עושה כעת הוא שולף מחט. מצוין, כעת יש לי מחט טובה מאוד, דקה מאוד.

וכעת זהו מיקרו-forge. עליי לחתוך את המחט במיקום מסוים כדי לקבל פיפטת החזקה בגודל הנכון. אני מחמם את כדור הזכוכית, יורד עם המחט עד שהיא נמסת לתוכו, וכעת היא נשברת.

אני דוחף את זה הצידה. אתם רואים שהמחט השבורה היא מושלמת. כעת אני יורד לכאן ומעלה את החום.

כעת כדור הזכוכית יהפוך לאדום והוא יימס; דחפו את כדור הזכוכית וזה ייצור קימור. זה מספיק. אני מסיר אותו.

כפי שניתן לראות, כעת אני מחדיר את המחט. רק לפני רגע הכנסנו את פיפט ההחזקה לתוך הראש הזה. כעת החזירו אותו למיקרוסקופ.

מיקרופיפט, קפילרית טעונה בכספית. טענתי אותה לתוך התפסים הללו. טעינת הקפילרית כאן בכספית.

זה נכנס פנימה. מקמי את המחט כאן בראש זה. הברגי חזק, ומשכי אותה לאחור.

סיבוב עם כיוון השעון כאן ידחוף את הכספית לכאן, לקדמה, כדי שתוכלו לראות אותה. וכעת נכניס את הקצה אל השמן. רואים? כעת אני מזיז את המחט כלפי מטה כדי להשיג את הראות.

הוציאו מספר טיפות של כספית ושאבו מעט QVP. זה בסדר. ולאחר מכן הניעו זאת למעלה שוב.

אני ניגש ל-HCCB ויורד למטה לתוך החור. הראש, אני הולך ל-P, שהיא פיפטת העכבר. אני צריך להכין קפילרה כדי להחדיר אותה לכאן. תודה. כבר מוכן. טוב.

אז הכינו כמה נימיים. אוקיי. ובתוך הצינור. אני ליי.

הגעתי משוויץ והתחלתי את העבודה הזו לפני שנה; הגעתי למעבדתו של K והתחלתי ללמוד העברה גרעינית. זהו באמת מקום נהדר, וזה נהדר לעבוד כאן. וכמובן, מדובר בניסוי מורכב מאוד ובעיות רבות עשויות להיווצר במהלך ביצועו.

לכן, בתחילת העבודה, אתם עשויים להיתקל בבעיות כגון ליזה של תאים רבים במהלך הגרעון או בזמן ההעברה. או שתגלו כי למרות שההעברה הצליחה, התאים אינם מתפתחים. תמיד עשויות להיות לכך סיבות רבות.

לב לומר, ניתן להתחיל ממערכת התרבית של כל האתרים. תמיד נדרשות בקרות כלשהן, כמו חלקים מהבקרה הגנטית או ביצי מופרית לבדיקת מערכת התרבית והאינקובטורים. לאחר מכן, יש לשפר גם את המיומנויות בעבודה עם המיקרוסקופ.

לכן, נדרש תרגול רב עד שתוכל לבצע באופן עקבי הזרקה לצד ואז העברה חזרה. זהו פשוט עניין של תרגול, וזה ייקח מספר שבועות או חודשים עד שתשתלט על הפעולה. ומעבר לכך, הדבר מוכן לניסויים ממושכים.

לכן מומלץ להקצות לכך יום שלם. דבר מאתגר נוסף בתחילת התהליך הוא הפיפטור. חשוב להימנע מיצירת בועות, לשלוט בתהליך היטב ולא לאבד את המעקב, ובמיוחד להיזהר לא לפגוע במושבה (clone), כיוון שהשכבה החיצונית, ה-zona lucida, פתוחה; למעשה, בעת הפיפטור ייתכן שתפגעו במושבה והיא תדלוף החוצה מה-zona lucida.

לכן יש להיזהר שלא יהיה שמן בצינור הפיה. אין לשאוב יותר מדי ואין לנשוף יותר מדי, אך מיומנות זו נרכשת בקלות יחסית.