Name: במבחנה גירוי בעור מבחן (SIT) באמצעות EpiDerm שחזור האדם עוריות (RHE) דגם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-13T21:00:00.000+00:00
Duration: 21 min 16 s
Description: למדו את שיטת EpiDerm SIT להערכת גירוי עור במודל עור אנושי מבחנתי. שיטה זו מחליפה ניסויים בבעלי חיים ומספקת תוצאות אמינות לזיהוי סיכונים בקוסמטיקה ובתרופות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מבקשים להודות ל ZEBET בבית BFR (גרמניה), BASF SE (גרמניה), IIVS בע&quot;מ (ארה&quot;ב), מחנה הריכוז-LSL (אוסטריה) להשתתפות במחקר בינלאומי רב מרכזי אימות של EpiDerm השתנה SIT (5 ).

<ol><li>Kandárová, H., Liebsch, M., Genschow, E., Gerner, I. ngrid, Traue, D., Slawik, B., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+EpiDerm+Test+Protocol+for+the+upcoming+ECVAM+Validation+Study+on+In+Vitro+Skin+Irritation+Tests%5BTitle%5D)+AND+%22ALTEX%22%5BJournal%5D)">Optimization of the EpiDerm Test Protocol for the upcoming ECVAM Validation Study on In Vitro Skin Irritation Tests.</a> ALTEX. 21, 107-114 (2004).</li>
<li>Kandárová, H., Liebsch, M., Gerner, I., Schmidt, E., Genschow, E., Traue, D., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EpiDerm+Skin+Irritation+Test+Protocol+-+Assessment+of+the+performance+of+the+optimized+test%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">EpiDerm Skin Irritation Test Protocol - Assessment of the performance of the optimized test.</a> ATLA. 33, 351-367 (2005).</li>
<li>Kandárová, H., Hayden, P., Klausner, M., Kubilus, J., Kearney, P., Sheasgreen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Skin+Irritation+Test%3A+Improving+the+Sensitivity+of+the+EpiDerm+Skin+Irritation+Test+Protocol.Accepted+for+publication%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">In Vitro Skin Irritation Test: Improving the Sensitivity of the EpiDerm Skin Irritation Test Protocol.Accepted for publication.</a> ATLA. , Forthcoming (2009).</li>
<li>Spielmann, H., Hoffmann, S., Liebsch, M., Botham, P., Fentem, J., Eskes, C., Roguet, R., Cotovi, J., Cole, T., Worth, A., Heylings, J., Jones, P., Robles, C., Kandárová, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ECVAM+International+Validation+Study+on+In+Vitro+Tests+for+Acute+Skin+Irritation%3A+Report+on+the+Validity+of+the+EPISKIN+and+EpiDerm+Assays+and+on+the+Skin+Integrity+Function+Test%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">The ECVAM International Validation Study on In Vitro Tests for Acute Skin Irritation: Report on the Validity of the EPISKIN and EpiDerm Assays and on the Skin Integrity Function Test.</a> ATLA. 35, 559-601 (2007).</li>
<li>Follow-up validation of the modified EpiDerm Skin Irritation Test (SIT): results of a multicentre study of twenty reference test substances. Liebsch, M., Gamer, A., Curren, R., Frank, J., Genschow, E., Tharmann, J., Remmele, M., Bauer, B., Raabe, H., Barnes, N., Hilberer, A., Wilt, N., Lornejad-Schäfer, M. R., Schäfer, C., Spiller, E., Hayden, P., Kandárová, H. 15th Congress on Alternatives to Animal Experimentation, 2008 September 19-21, Linz Austria, , (2008).</li>
<li>United Nations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Globally+Harmonized+System+of+Classification+and+Labeling+of+Chemicals+%28GHS%29%22">Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals (GHS)</a>. , Second revised edition, UN. New York and Geneva. (2007).</li>
<li>ESAC. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Statement+on+the+Scientific+Validity+of+In-Vitro+Tests+for+Skin+Irritation+Testing%22">Statement on the Scientific Validity of In-Vitro Tests for Skin Irritation Testing</a>. , ESAC. (2008).</li>
<li>Gupta, K., Rispin, A., Stitzel, K., Coecke, S., Harbell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ensuring+quality+of+in+vitro+alternative+test+methods%3A+Issues+and+answers%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ensuring quality of in vitro alternative test methods: Issues and answers.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 43, 219-224 (2005).</li>
<li>Rispin, A., Stitzel, K., Harbell, J., Klausner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ensuring+quality+of+in+vitro+alternative+test+methods%3A+Current+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ensuring quality of in vitro alternative test methods: Current practice.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 45, 97-103 (2006).</li>
</ol>

המחברים הם עובדים של תאגיד MatTek, המייצר את הריאגנטים והכלים המשמשים במאמר זה.

בסרטון הזה, אנחנו הדגימו את גירוי בעור EpiDerm הבדיקה (EpiDerm SIT) פיתחו ומאומתים עבור בדיקות עור במבחנה גירוי של כימיקלים, כולל מרכיבים קוסמטיים ותרופות. בעת ביצוע בשיטה זו, חשוב לעבוד בתנאים היגיינית להקפיד לעקוב אחר פרוטוקול תוקף, שכן סטייה בפרוטוקול עלול לגרום לתוצאות שונות. כמה שינויים של assay אפשריים, לעומת זאת, שינויים בפרוטוקול יש לדון ישירות עם המחברים. המגבלה היחידה של שיטה זו היא התערבות אפשרית של החומר למבחן עם הקצה MTT. חומר הבדיקה בצבע אחד או ישירות מפחית MTT (ובכך מחקה פעילות dehydrogenase של המיטוכונדריה הסלולר) עלולים להפריע הקצה MTT. עם זאת, אלה חומר הבדיקה הם בעיה רק ​​אם בעת הבדיקה MTT (כלומר 42 שעות לאחר החשיפה לחומר המבחן) כמות מספקת של חומר הבדיקה עדיין קיימות על (או) ברקמות. במקרה של אירוע זה סביר, הפחתת (נכון) MTT מטבוליות את התרומה על ידי חומר בדיקה או בצבע (שקר) הפחתה MTT ישירה של החומר למבחן ניתן לכמת באמצעות הליך תיאר בפרוטרוט את סדר assay תקן מבצע המסופקים על ידי MatTek קורפ

במבחנה גירוי בעור מבחן (sit) באמצעות epiderm שחזור האדם עוריות (rhe) דגם

An In Vitro Skin Irritation Test (SIT) using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal (RHE) Model

גירוי בעור EpiDerm הבדיקה (EpiDerm SIT) פותחה<sup&gt; (1,2,3)</sup&gt; ומאומתים<sup&gt; (4,5)</sup&gt; עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; גירוי בעור בדיקות של כימיקלים, כולל מרכיבים קוסמטיים ותרופות. SIT EpiDerm מנצל את 3D<em&gt; במבחנה</em&gt; אדם משוחזר אפידרמיס (RHE) EpiDerm מודל. ההליך המתואר פרוטוקול זה מאפשר אפליה בין המגרים של קטגוריה 2 GHS ולא מגרים<sup&gt; (6)</sup&gt;. הבדיקה מבוצעת במהלך תקופת זמן 4 יום, בהיקף של דגירה מראש, 60 דקות חשיפה, 42 שעות ביממה שלאחר הדגירה ואת הכדאיות assay MTT. לאחר קבלת רקמות הדגירה מראש הלילה (יום 0), רקמות נחשפים מקומי כדי לבדוק את הכימיקלים (יום 1), אשר יכול להיות נוזל, חצי מוצקים, מוצקים או שעווה. שלוש רקמות משמשים כימיים כל מבחן, כמו גם שליטה חיובית (5% aq. פתרון SDS), וכן שליטה שלילית (DPBS). חשיפה כימית נמשך 60 דקות, 35 דקות של הרקמות אשר נשמרים באינקובטור ב 37 ° C. חומרים המבחן יוסרו מכן על ידי הליך כביסה נרחבים מפני השטח רקמות. מוסיף הרקמה הם מחק והועברו בינוני טרי. לאחר תקופת דגירה 24 שעות (יום 2), המדיום הוא החליף. המדיום ניתן לשמור לניתוח נוסף של ציטוקינים או נקודות הקצה השני של עניין. לאחר חילופי בינוני, רקמות מודגרת עבור 18 שעות נוספות. בסוף 42h כולו שלאחר הדגירה (יום 3), רקמות מועברים לתוך פתרון MTT צהוב מודגרות במשך 3 שעות. מלח כתוצאה סגול כחול formazan, נוצר בעיקר על ידי מטבוליזם המיטוכונדריה, מופק עבור 2 שעות באמצעות isopropanol. צפיפות אופטית של formazan המחולץ נקבעת באמצעות ספקטרופוטומטר. כימי מוגדר כאזור מגרים אם את הכדאיות היחסית רקמות לרקמות בקרה שלילית טיפול מופחת מתחת 50%. הליך זה יכול לשמש כתחליף מלא של במבחן vivo גירוי בעור ארנב לזיהוי סיכון וסימון של כימיקלים בקנה אחד עם תקנות האיחוד האירופי<sup&gt; (7)</sup&gt;.

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את גירוי בעור EpiDerm הבדיקה (EpiDerm SIT) פיתחו ומאומתים עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; גירוי בעור בדיקות של כימיקלים, כולל מרכיבים קוסמטיים ותרופות.

במבחנה גירוי בעור מבחן (SIT) באמצעות EpiDerm שחזור האדם עוריות (RHE) דגם

בדיקת גירוי העור EpiDerm (EpiDerm SIT) פותחה (1,2,3) ותוקפה (4,5) לבדיקת גירוי עור in vitro של כימיקלים, כולל...

an-vitro-skin-irritation-test-sit-using-epiderm-reconstructed-human

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בדו"ח זה, אנו מתארים את העור תלת ממדי לשחזר מודל אשר מחקה העור האנושי באדריכלות הרכב. הפיזיולוגיה מלנוציט, התקדמות מלנומה גורל בתאי גזע עורי נחקרו באמצעות העור לשחזר מודל. המודל שימושית גם ככלי קליני להערכת תרופות.

עור תלת ממדי האדם לשחזר דגם: ככלי מחקר עור רגיל התקדמות מלנומה

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול המפורט ליצירת שחזורי עור אורגנוטיפיים תלת-ממדיים במבחנה לחקר התקדמות המלנומה. מודל עור זה מחקה הן את הארכיטקטורה והן את המורכבות הרב-תאית של איברים in vivo.

יצירת שחזורי עור מלא אורגנוטיפיים: הליך לביסוס מודל עור תלת ממדי באמצעות דגימות עור אנושיות

המטרה של פרוטוקול זה היא לבנות עור תלת מימדי בעובי מלא, הדומה לעור טבעי. עם מכשיר פציעה אוטומטי שנבנה במיוחד, ניתן ליצור פצעים מדויקים וניתנים לשחזור תחת שמירה על סטריליות.

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

פיתחנו מבחן גירוי בעיניים אשר מנצל מודל רקמת האפיתל שלושה כמו קרנית-ממדי משוחזר אנושי (RHCE). המבחן הוא מסוגל להבחין בין גירוי העיני וחומרים מאכלים (קטגוריות GHS 1 ו -2 משולבים) ואלה שאינם דורשים תיוג (GHS אין קטגוריה).

גירוי מבחן העין (EIT) לסיכוני זיהוי כימיקלים עיניים מעצבנים באמצעות אפיתל דגם רקמות כמו-קרנית משוחזר אדם (RHCE)

מטרת מאמר זה היא לספק פרוטוקול מקיף ומפורט כיצד ליצור עור אורגנוטיפי אנושי מהונדס גנטית מקרטינוציטים אפידרמליים ודרמיס אנושי נטול חיוניות.

דור של תרבויות עור Organotypic מהונדסות גנטי שימוש חסר חיוניות עור אדם

אנו מציגים פרוטוקול להשיג מטריצות תאים שמקורם עשירות בחלבונים תאים מטריקס, באמצעות crowders macromolecular (MMC). בנוסף, אנו מציגים פרוטוקול אשר משלב MMC בדור העור 3D organotypic שיתוף התרבות, אשר מקטין את זמן תרבות תוך שמירה לפדיון של מבנה.

עור 2D and 3D שיפור<em&gt; במבחנה</em&gt; מודלים שימוש להצטופפות מולקולארית

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה לטיפוח אפידרמיס אנושי תלת מימדי מחדש באופן ניתן לשחזור וחזק. בנוסף, הוא מאפיין את הקשר המבני-פונקציה של מודל מחסום האפידרמיס. התגובות הביולוגיות של האפידרמיס האנושי המחודש על גירויים proinflammatory מוצגים גם.

טיפוח אפידרמיס אנושי תלת מימדי משוחזר בקנה מידה גדול

מטרת פרוטוקול זה היא לתאר את הדור ואת הניתוח הנפחי של שווה ערך לעור אנושי וסקולרי באמצעות טכניקות נגישות ופשוטות לתרבות ארוכת טווח. ככל האפשר, הרציונל לצעדים מתואר כדי לאפשר לחוקרים את היכולת להתאים אישית בהתבסס על צרכי המחקר שלהם.

דור של שווה ערך לעור אנושי בהרכבה עצמית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת מודל עור תלת מימדי פשוט ובלתי מופרע באמצעות פלטפורמה מיקרופלואידית מיקרו-מכונות. גישת זרימה מקבילה מאפשרת תצהיר במקום של תא עורי לזרוע של תאי אפיתל על גבי, כל נשלט על ידי משאבות מזרק.

יצירת דגם תלת מימדי תלת מימדי של עור על שבב בפלטפורמה מיקרופלואידית מיקרו-מכונות

כאן, אנו מציגים הליכים זולים ופשוטים להצגת מודלים שונים של עור תלת ממדי למחקר שגרתי במעבדה לתרביות תאים. חוקרים יכולים ליצור מודלים המותאמים לצרכיהם מבלי להסתמך על מודלים זמינים מסחרית.

בניית מודלים לעור עבור יישומים רבים - החל ממונוקולטורה דו-ממדית (2D) ועד רב-תרבותיות תלת-ממדית (3D)

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את היישום של מודלים של רקמות אורגנוטיפיות לחקירת אינטראקציות מארח-פתוגן במבחנה. באופן ספציפי, מערכת המודל המתוארת משתמשת באפיתל אוראלי רב שכבתי החשוף למיקרואורגניזמים הקשורים לביופילמים (רובד שיניים) בהקשר של בריאות הפה לעומת מחלות.

מערכות מודל רקמות אורגנוטיפיות לחקירת אינטראקציות מארח-פתוגן במבחנה

למדו את שיטת EpiDerm SIT להערכת גירוי עור במודל עור אנושי מבחנתי. שיטה זו מחליפה ניסויים בבעלי חיים ומספקת תוצאות אמינות לזיהוי סיכונים בקוסמטיקה ובתרופות.

במבחנה גירוי בעור מבחן (SIT) באמצעות EpiDerm שחזור האדם עוריות (RHE) דגם

גלה סרטונים נוספים