Name: השתלת קנה הנשימה Heterotopic ו orthotopic ב עכברים משמשים מודלים לחקר התפתחות המחלה Airway סותם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-20T18:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: חקור שתי שיטות השתלת קנה נשימה בעכברים להבנת התפתחות מחלת דרכי הנשימה הסותמת. השיטות ההטרוטופית והאורתוטופית מספקות מודלים ייחודיים לחקר סיבוכי השתלות ומנגנוני הריפוי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann (Lab Manager).

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זכר Balb / C עכברים (8-12 שבועות) נרכשים מבית מעבדות צ&#39;רלס ריבר (Sulzfeld, גרמניה). העכברים הם שוכנו בתנאים רגילים, נמאס מזון רגיל עכברים כרצונך מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Isofluran 2% משמש הרדמה. </li></ol> תורמים הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את שיער הבטן לחטא את האזור באמצעות betaisodona. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת נוף מיקרוסקופי, לבצע חתך צוואר הרחם קו האמצע מהרמה של הגרון אל עצם החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת שומן תת עורי ושרירי הרצועה כדי לקבל תצוגה ברורה של קנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנתחים את קנה הנשימה מכל הרקמות הסובבות, כמו הוושט, עצבים, עורקים, ורקמות החיבור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל קנה הנשימה (מתוך הגרון אל הסתעפות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלאש ההשתלה עם מי מלח קרים בחנות שתל ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התורם הוא מורדמים על ידי נקע בצוואר הרחם לאחר הקציר של קנה הנשימה. </li></ol> נמען: השתלת HETEROTOPIC <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את השיער בטן בהפרש גדול סביב האתר חתך ולחטא את האזור שלוש פעמים באמצעות betaisodona (בבטאדין) ואחריו אלכוהול. עיניים צריכים להיות משומנים עם מוצר משחה עיניים כדי למנוע את קרניות מהתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע laparotomy החציוני והמקום המעי לתוך כפפה, סטרילי moistured. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחים את omentum יותר בזהירות. מניחים את השתל לתוך המרכז לקבע אותו עם תפר יחיד באמצעות 8-0 (Prolene, Ethicon, גרמניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות באופן מלא את ההשתלה עם omentum יותר לתקן את השתל עם תפר אחד 8-0 (Prolene, Ethicon, גרמניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקמו מחדש את המעיים בחזרה לתוך הבטן מיושר עם מלוחים, חמימים סטרילי לפני הסגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקריב ב 2 שכבות - דופן הבטן ואת שכבת העור עם דפוס מתמשך באמצעות 7-0 Prolene עבור השריר ואת 7-0 Vicryl לעור. </li></ol> נמען: השתלת orthotopic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את השיער בטן בהפרש גדול סביב האתר חתך ולחטא את האזור שלוש פעמים באמצעות betaisodona (בבטאדין) ואחריו אלכוהול. עיניים צריכים להיות משומנים עם מוצר משחה עיניים כדי למנוע את קרניות מהתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחלקים את רצועת שרירים כדי להמחיש את מורכבות laryngotracheal כולו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לנתח את קנה הנשימה של הרקמות הסובבות, לדאוג לשמר את העצבים חוזרות בגרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחלקים את קנה הנשימה שלוש טבעות הזנב בין cricoid. חיה שומרת הנשימה הפיזיולוגי באמצעות צינורית הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא נקי קצוות קנה הנשימה של הנמען, כמו גם השתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתל הוא התערב בין הפגמים הנמען קנה הנשימה ואת חוקיים כדי לשמור על קוטביות אנטומיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש 8-0 (Prolene, Ethicon, גרמניה) anastomose את השתל מתורם עם דיסטלי (mediastinal) קנה הנשימה. ההיבט האחורי של השקה מתבצע באופן רציף ריצה. ההיבט הקדמי הושלם ולאחר מכן באמצעות תפרים קטע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל הפרשות דרכי הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השקה הפרוקסימלי הושלמה אז באותו אופן כמו אחד דיסטלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבטיח שלמות של דרכי האוויר והנשימה נאותה, ספונטנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקמו מחדש את השרירים רצועת ולסגור את הרקמה התת עורית ועל שכבת העור באמצעות 6-0 תפרים (Vicryl, Ethicon, גרמניה) עם דפוס מתמשך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש הרדמה זריקה של הנמען, ולכן החיה ישמרו הנשימה הפיזיולוגית דרך קנה הנשימה. שילוב של 75/1/0.2 מ&quot;ג / ק&quot;ג של propofol, medetomidine ו פנטניל, בהתאמה, משמש הרדמה ip בעכברים. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1: תורמים קנה הנשימה. 1A: תורמים קנה הנשימה באתרו לאחר הכנה. 1B: קנה הנשימה התורם נכרת. 1C: תורמים קנה הנשימה לאחר explantation. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2: דגם Heterotopic. 2A: השתל ממוקם במרכז של omentum יותר. 2B: שתל קבוע בשני הקצוות עם תפר אחד. 2C: שתל הוא עטוף לתוך omentum יותר קבוע עם תפר אחד. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3: דגם orthotopic. 3A: שתל הוא התערב בין הפגמים הנמען קנה הנשימה לבין הקיר האחורי הוא anastomosed באופן ריצה רציפה. 3B: הקיר הקדמי הושלם באמצעות תפר אחד. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4: היסטולוגיה. 4A: ששוחזרו קנה הנשימה להשתיל heterotopic לאחר 28 ימים + H E staining (15x). שים לב הכחדה luminal 100%. 4B: ששוחזרו קנה הנשימה להשתיל orthotopic לאחר 60 ימים של H + E מכתים (15x). מקסימלי הכחדה luminal השיגה כ 45%. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> Heterotopic השתלת קנה הנשימה דגם </td><td> Orthotopic השתלת קנה הנשימה דגם </td></tr><tr><td> יתרונות </td><td> + קל לבצע + הכחדה לומינל עם חסימה בדרכי האוויר מלא לאחר 28 ימים + אין חיבה פיזית של בעלי חיים על ידי OAD </td><td> + אוורור פיזי של השתל + והתרופות בשאיפה אפשרי + התגובות החיסוניות חזקות כגון ייצור נוגדנים IgM alloreactive + המילייה החזי פיזיולוגיים + קנה הנשימה קנה הנשימה, השקה מחקה את ההגדרה הקלינית </td></tr><tr><td> חסרונות </td><td> - אין אוורור של קנה הנשימה להשתיל - אין הערכה של פתוגנים בשאיפה אפשרי - עיכוב של פינוי mucociliary וההפרשות שמר - Microenvironment פריטוניאלית במקום המילייה החזי </td><td> - הכשרה כירורגית הכרחי - הכחדה לומינל המונה חסימה luminal. 45% לאחר 60 ימים - בעלי חיים עלולים לפתח תסמינים של OAD </td></tr></tbody></table> טבלה 1: יתרונות וחסרונות של השתלת קנה הנשימה Heterotopic ו orthotopic.

<ol><li>Adams, B., Berry, G., Huang, X., Shorthouse, R., Brazelton, T., Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppressive+therapies+for+the+prevention+and+treatment+of+obliterative+airway+disease+in+heterotopic+rat+trachea+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Immunosuppressive therapies for the prevention and treatment of obliterative airway disease in heterotopic rat trachea allografts.</a> Transplantation. 69, 2260-2266 Forthcoming.</li>
<li>Adams, B., Brazelton, T., Berry, G., Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+respiratory+epithelium+in+a+rat+model+of+obliterative+airway+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The role of respiratory epithelium in a rat model of obliterative airway disease.</a> Transplantation. 69, 661-665 Forthcoming.</li>
<li>Deuse, T., Schrepfer, S., Reichenspurner, H., Hoyt, G., Fischbein, M., Robbins, R., Pelletier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+experimental+heterotopic+and+orthotopic+tracheal+transplantations+%26%23x2013%3B+when+to+use+which+model%3B+Transplant+Immunology+17%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Techniques for experimental heterotopic and orthotopic tracheal transplantations &#x2013; when to use which model; Transplant Immunology 17.</a> , 255-261 (2007).</li>
<li>Hele, D., Yacoub, M., Belvisi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heterotopic+tracheal+allograft+as+an+animal+model+of+obliterative+bronchiolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Research%22%5BJournal%5D)">The heterotopic tracheal allograft as an animal model of obliterative bronchiolitis.</a> Respiratory Research. 2, 169-183 Forthcoming.</li>
<li>Hertz, M., Jessurun, J., King, M., Savic, S., Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproduction+of+the+obliterative+bronchiolitis+lesion+after+heterotopic+transplantation+of+mouse+airways%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Reproduction of the obliterative bronchiolitis lesion after heterotopic transplantation of mouse airways.</a> American Journal of Pathology. 142, (1993).</li>
<li>McDyer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+murine+obliterative+bronchiolitis+in+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+American+Thoracic+Society%22%5BJournal%5D)">Human and murine obliterative bronchiolitis in transplant.</a> Proceedings of the American Thoracic Society. 4, 37-43 Forthcoming.</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Hoyt, G., Sheikh, A., Hoffmann, J., Reichenspurner, H., Robbins, R., Pelletier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+orthotopic+tracheal+transplantation%3A+the+stanford+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Experimental orthotopic tracheal transplantation: the stanford technique.</a> Microsurgery. 27, 187-189 (2007).</li>
</ol>

סוניה Schrepfer קיבל מענק מחקר של דויטשה Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/3-1).] כל החיות קיבלו טיפול אנושי מתיישב עם עקרונות של טיפול בבעלי חיים מעבדה, ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי האגודה הלאומית למחקר רפואי המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שפורסם על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (National Institutes of Health פרסום 85-23, מתוקנת 1985). כל החיות התקבלו צ&#39;ארלס ריבר מעבדות (Sulzfeld, גרמניה) נשמרו על מרכזים בעלי חיים של החולים האוניברסיטאי בהמבורג Eppendorf. החיות קיבלו תקן ושולחת כרצונך מים המודעה.

עכברים זמינים transgeneic שונים מודל בנוקאאוט, ומתאים אפוא ללמוד מכניסטית שאלות הקשורות OAD (4). שני הדגמים של השתלת קנה הנשימה המוצג בסרטון זה יכול לשמש כמודל אמין לחקר התפתחות OAD. עם זאת, מודל זה מדגים את יתרונות ומגבלות. השתלת קנה הנשימה heterotopic קל לביצוע ואינה דורשת הכשרה מיוחדת כירורגית (3, 5). לאחר השתלת heterotopic, מחיקה luminal תתרחש חסימה בדרכי הנשימה מהר להשלים מופיע...

השתלת קנה הנשימה heterotopic ו orthotopic ב עכברים משמשים מודלים לחקר התפתחות המחלה airway סותם

Heterotopic and Orthotopic Tracheal Transplantation in Mice used as Models to Study the Development of  Obliterative Airway Disease

סותם דרכי הנשימה מחלות (OAD) היא הסיבוך העיקרי לאחר השתלות ריאות שמגבילה ההישרדות לטווח ארוך (1-7). כדי לחקור את פתופיזיולוגיה, טיפול ומניעה של מודלים שונים של בעלי חיים OAD השתלת קנה הנשימה במכרסמים פותחו (1-7). כאן, אנו משתמשים בשני דגמים הוקמה של השתלת קנה הנשימה, את המודל heterotopic ו orthotopic ולהפגין יתרונות ומגבלות. עבור המודל heterotopic, התורם הוא עטוף לתוך קנה הנשימה omentum גדולה יותר של הנמען, ואילו התורם קנה הנשימה הוא anastomosed ידי השקה end-to-end במודל orthotopic. בשני המודלים, התפתחות נגעים סותם היסטולוגית דומה OAD קליניים הוכח (1-7). וידאו זה מראה כיצד לבצע את שניהם, heterotopic כמו גם את הטכניקה orthotopic השתלת קנה הנשימה אצל עכברים, ומשווה את מהלך הזמן של התפתחות OAD בשני מודלים באמצעות היסטולוגיה.

וידאו זה מציג ומשווה שני דגמים ניסיוניים ללמוד על התפתחות המחלה בדרכי הנשימה סותם (OAD) בעכברים, במודל heterotopic ו orthotopic השתלת קנה הנשימה.

השתלת קנה הנשימה Heterotopic ו orthotopic ב עכברים משמשים מודלים לחקר התפתחות המחלה Airway סותם

מחלה חסימתית של דרכי הנשימה (OAD) היא הסיבוך העיקרי לאחר השתלות ריאה המגביל את ההישרדות לטווח ארוך (1-7).
כדי לחקור את ה...

השתלות קשקש (trachea) הן ההטרוטופיות והאורתוטופיות rozpeae בהוצאת הקשקש של התורם עבור ההשתלה ההטרוטופית. נבצע חתך בבטן של המקבל ונניח את המעיים על כפפה. עבור ההשתלה האורתוטופית, נמקם את הקשקש של התורם במרכז ה-greater omentum ונקבע אותו באמצעות שתי תפרים.לאחר ביצוע חתך צווארי ברסיפיינט, קנה הנשימה משוחרר מהרקמות שסביבו ונחתך. לאחר מכן, קנה הנשימה של התורם מוחדר בין שני הקצוות של קנה הנשימה של הרסיפיינט, ושני חלקי קנה הנשימה נתפרים זה לזה. היי, אני סוניה רפא.אני פרופסור לאימונולוגיה וכירורגיה לבבית במחלקה לכירורגיה קרדיווסקולרית במרכז הלב האוניברסיטאי בהמבורג. המעבדה שלי מתמקדת באימונולוגיה של השתלות ובאימונוביולוגיה של תאי גזע. היום נציג בפניכם את נושא ה-Moon Auto ואת מודל ההשתלה של ה-twig כאן.שלום, אני ממעבדת TSI. אנו משתמשים במודלים של עכברים להשתלת קנה נשימה הומוטופית והטרוטופית כדי לחקור את המנגנונים העומדים מאחורי התפתחותן של מחלות דרכי נשימה חסימתיות. אני קרי וואן, סטודנטית באוניברסיטת סטנפורד ועמיתת קיץ במעבדת TSI של ד"ר דרייר.כעת נתחיל בתהליך. לפני תחילת הפרוצדורה, גלחו את שיער הצוואר וחטאו את האזור באמצעות beta isod. ודאו שהעכבר התורם נמצא תחת הרדמה מלאה על ידי בדיקה של היעדר רפלקס צביטה באצבעות.תחת ראייה מיקרוסקופית, בצע חתך צווארי בקו האמצע מגובה הלרינקס ועד לסטרנום. הסר

heterotopic-orthotopic-tracheal-transplantation-mice-used-as-models

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Bronchiolitis סותם היא הפגיעה המפתח להישרדות ארוכת טווח של השתלת ריאה וחוסר מודל קליני חזק מונע בחינת immunopathogenesis bronchiolitis סותם. שלא כמו אחרים השתלות איברים מוצקים, vascularized העכבר השתלת ריאות יש רק לאחרונה פותחו. כאן אנו מציגים מודל שפותח באופן עצמאי שלנו bronchiolitis סותם לאחר ההשתלה Murine אחת הריאות orthotopic.

פיתוח Bronchiolitis סותם במודל Murine של השתלת ריאות Orthotopic

אנחנו פיתחנו שיטה פשוטה, אמינה, וזולה יחסית לאינטובציה endotracheal בעכברים באמצעות laryngoscopy הישיר באמצעות אוטוסקופ עם ספקולום 2.0 מ"מ. טכניקה זו היא atraumatic ויכולה לשמש למדידות חוזרות בניסויים כרוניים. אנחנו מוצאים את זה מעולה להנשמה או בעבר דיווח טכניקות נזקקה לניתוח.

Endotracheal אינטובציה בעכברים<em&gt; דרך</em&gt; ישיר laryngoscopy באמצעות אוטוסקופ

השימוש במודל המחקה את המצב של מחלות ריאה בבני האדם הוא קריטי ללימוד הפתופיזיולוגיה ו / או אטיולוגיה של מחלה מסוימת ולפתח התערבות טיפולית. הנה שיטת אינטובציה intratracheal לא פולשנית שיכול ישירות לספק חומרים אקסוגניים לריאות עכבר מוצגת.

פולשנית Intratracheal אינטובציה ללמוד פתולוגיה והפיזיולוגיה של עכבר ריאות

כדי לחקור השתלה משולבת של איברים מוצקים וכלי דם, אנו מתארים מודל חדש של השתלת דופן חזה הטרוטופית, בלוטת התימוס ולב בעכברים באמצעות טכניקת שרוול צוואר הרחם ללא תפרים.

Microsurgical דגם חדשני לHeterotopic, כמקשה אחת בחזה קיר, קורנית, ולב השתלה בעכברים

מאמר זה מציג שיטה מהירה ופשוטה לניהול בליאומיצין ישירות לתוך קנה הנשימה העכבר באמצעות אינטובציה. יתרונות עיקריים של שיטה זו הם כי הוא מאוד לשחזור, קל לשלוט, ואינו דורשים ציוד מיוחד או פעמי החלמה ממושכות.

שיטה משופרת עבור אינטובציה מהירה של קנה הנשימה של עכברים

היצרות השתל מהווה מכשול קריטי החלפת רקמות מהונדסים דרכי הנשימה. כדי לחקור את המנגנונים התאיים המשמשים כבסיס היצרות, אנו מנצלים את מודל מאתר של החלפת רקמות מהונדסים והכו אותי עם תאי תאי מח עצם הזריעה (מוניטור-MNC). כאן, אנו מפרטים פרוטוקול שלנו, כולל ייצור לגרדום, מוניטור-MNC בידוד, שתל זריעה השרשה.

Seeding, השרשת biosynthetic הוחלף נגזר רקמות מהונדסים בקנה הנשימה השתלה במודל של עכברים

מודלים שונים של בעלי חיים של שבר דיאפרגמטי מולד וחסימת קנה הנשימה העוברי מציגים יתרונות וחסרונות לגבי סוגיות אתיות, עלות, קושי כירורגי, גודל, שיעורי הישרדות וזמינות של כלים גנטיים. מודל זה מספק כלי חדש כדי ללמוד את ההשפעה של חסימת קנה הנשימה והלחץ המואצני המוגבר על התפתחות הריאות.

מודל חסימת קנה הנשימה העוברי הטרנס-רחמי בעכברים

מטרתו של כתב יד זה היא לתאר את הצעדים המיקרו-כירורגיים הנדרשים לביצוע השתלת גרון הטרוטופית בעכברים. היתרונות של מודל עכבר זה בהשוואה למודלים אחרים של בעלי חיים של השתלת גרון הם עלות-תועלת שלו ואת הזמינות של בדיקות אימונולוגיות ונתונים.

מודל עכבר הטרוטופי לחקר השתלת גרון

מודל השתלת קנה הנשימה התוך-ריאתי (IPTT) הוא בעל ערך לחקר מחלת דרכי הנשימה לאחר השתלת ריאות. הוא מציע תובנות לגבי התנהגות אימונולוגית ואנגיוגנית ספציפית לריאות במחיקת דרכי הנשימה לאחר השתלה עם יכולת שחזור גבוהה. כאן, אנו מתארים את הליך IPTT ואת התוצאות הצפויות שלו.

השתלת קנה נשימה תוך ריאתי: מודל לחקר מחלת דרכי הנשימה לאחר השתלת ריאות

בדיקת רגישות חזותית לטאות באמצעות פרדיגמה התניה אופרנטית המעסיקה וידאו השמעה אקראית של נקודה kinematograms ו ממוחשבת חסרי חוליות.

בדיקת רגישות חזותית על מהירות ועל כיוון התנועה של לטאות

חקור שתי שיטות השתלת קנה נשימה בעכברים להבנת התפתחות מחלת דרכי הנשימה הסותמת. השיטות ההטרוטופית והאורתוטופית מספקות מודלים ייחודיים לחקר סיבוכי השתלות ומנגנוני הריפוי.

השתלת קנה הנשימה Heterotopic ו orthotopic ב עכברים משמשים מודלים לחקר התפתחות המחלה Airway סותם

גלה סרטונים נוספים