קוליטיס דוגמנות Murine באמצעות נתרן dextran סולפט (DSS)

עכברים מקבלים 3% DSS בחשק המיני למשך ארבעה ימים. בעוד שמשקל ונוכחות של שלשולים ודם צואה נרשמים מדי יום, TSS מוחלף במי חיטוי לאחר היום הרביעי. לאחר שלושה ימים על המים, עכברים מורדמים ומסירים את המעי הגס שלהם.

המעי הגס נמדד ונשקל. לאחר מכן נוצרים המעי הגס ללחמניות שוויצריות או נקניקיות ונבדקים במיקרוסקופ. מאמר וידאו זה ידגים את הקציר והעיבוד של המעי הגס במודל מורן של קוליטיס.

הליך זה משמש לחקר קוליטיס במעבדתו של ד"ר כריסטופר וויליאמס מהמחלקה לביולוגיה של הסרטן באוניברסיטת ונדרבילט לפני תחילת הטיפול בנתרן דקסטרין סולפט. משקולות בסיס מתקבלות במהלך הניסוי. המשקלים היומיים נלקחים לאחר שקילת העכברים, יוצרים משקל של 3% לנפח, תמיסת מלח נתרן דקסטרין סולפט או DSS במים.

ה-DSS חייב להיות בעל משקל מולקולרי נמוך כדי שמודל זה יהיה יעיל, לייצר מספיק תמיסת DSS כדי למלא בקבוק מים לכל כלוב עכברים ולסנן את התמיסה עם מסנן אצטט תאית של 0.45 מיקרומטר. החלף את בקבוק מי השתייה בכלוב העכבר בבקבוק המכיל תמיסת DSS 3%. אם המוסד שלך משתמש במערכת השקיה אוטומטית, הצב טיפים להחרגה על פיות השקיה כדי להבטיח שלעכברים אין גישה לשום מקור מים אחר.

לאחר ארבעה ימים, העכברים נשקלים שוב כדי לכמת את ההשלכות המערכתיות של קוליטיס. ירידה במשקל שכיחה עם פציעה חמורה, עם זאת, ייתכן שלא תהיה ניכרת במשך מספר ימים נוספים באותו יום. ביום הרביעי, החלף את תמיסת ה-DSS במים למשך שלושה ימים נוספים כדי לאפשר התאוששות מסוימת של אפיתל המעי הגס.

שלושה ימים לאחר מכן, היום השביעי, העכברים נשקלים שוב. לאחר מכן ניתן לקצור את המעי הגס מהעכברים שעברו המתת חסד, כפי שמוצג בסעיף הבא. כדי לקצור את המעי הגס, חשוף את הצד הגחוני של העכבר שעבר המתת חסד כדי להבטיח גישה ללא הפרעה לבטן.

הרטיבו את הבטן לחלוטין עם אתנול 70%. אחוז בקו האמצע של הבטן בעזרת מלקחיים של רקמות והרם. ובכך אוהל העור באמצעות מספריים עדינות.

חתכו את הבטן כדי לחשוף את תוכן הבטן. הרחב את החתך עד לקצה תהליך ה- xiphoid בקו האמצע, ולאחר מכן האריך לאורך ההיבט התחתון של שולי החוף באופן דו-צדדי. זהה את המעי הדק, הצקום והמעי הגס.

לנתח בזהירות את החתך להקניט את המעי הגס מהמזנטריה שמסביב. לאחר מכן, יש לחצות את המעי הגס ולהעמיק את האגן כדי להשתחרר. המעי הגס הדיסטלי מפי הטבעת.

יש להקפיד שלא ייחתכו עורקים או ורידים. כמו כן, שימו לב שהמעי הגס יכול להיקרע בקלות. אז הסר בעדינות את המעי הגס מהמזנטריה.

יש לחצות את המעי הגס בשולי ההמשך של Colona כדי לשחרר את המעי הגס הפרוקסימלי. הסר את המעי הגס וסה"כ באמצעות מחט הזנה בגודל 20 ומזרק 10 מיליליטר ושטוף את המעי הגס עם PBS קר כקרח עד שה-EIT נקי לחלוטין מצואה. חשוב לשמור על הכיוון הנכון של המעי הגס על ידי שמירה על הקצה הדיסטלי של המעי הגס הקרוב אליך.

התחל במדידת אורך המעי הגס באמצעות קליפר דיגיטלי. אורך המעי הגס הוא אינדיקטור נוסף לחומרת הפציעה. קוליטיס מגבירה בצקת ומקצרת את אורך המעי הגס הכללי.

בשלב זה, ניתן לעבד את המעי הגס שנקטף כנקניקיות לניתוח מקרוסקופי או להפוך אותו לגליל שוויצרי לניתוח היסטולוגי של קוליטיס חריפה. נדגים את הטכניקות הללו בסעיפים הבאים לעיבוד המעי הגס כנקניק לניתוח מקרוסקופי של המעי הגס כולו, חשוב לשמור על הכיוון הנכון של המעי הגס. לכן, שמור על הקצה הדיסטלי של המעי הגס הקרוב אליך.

חותכים שתי חתיכות של תפר שאינו נספג, האחת באורך של כסנטימטר אחד והשנייה באורך של שני סנטימטרים. השתמש בחתיכת התפר בגודל שני אינץ' כדי לקשור את הקצה הדיסטלי של המעי הגס קרוב ככל האפשר לשוליים תוך שמירה על אטימה טובה. לאחר מכן הנח מחט הזנה בגודל 20 המכילה חמישה מיליליטר של פוספט פורמלין 10% חוצץ לקצה הפרוקסימלי של המעי הגס.

קושרים באופן רופף את פיסת התפר הנותרת מיד קרוב לנורה של מחט ההזנה. כעת אחוז את המעי הגס בחוזקה בנורה של מחט ההזנה והחדיר כמות מספקת של פורמלין כדי להבטיח שהמעי הגס מורחב. הדק את הקשר בתפר כשאתה מושך את מחט ההזנה, ובכך משאיר את המעי הגס המורחב המוחדר.

כנקניק, מלאו צינור חרוטי של 15 מיליליטר ב-10% חוצץ, רשמי ופוספט, ותייגו את הצינור. מניחים את המעי הגס בצינור ומתקנים למשך 24 שעות. לאחר 24 שעות, שפכו את הפורמין למיכל פסולת מתאים והחליפו אותו באתנול 70% למשך 24 שעות נוספות.

ניתן לאחסן את המעי הגס ב-70% אתנול ללא הגבלת זמן בטמפרטורת החדר. כאשר אתה מוכן לנתח את המעי הגס, הסר אותו מהצינור החרוטי. חותכים את המיתרים מכל קצה בעזרת אזמל ונזהרים לא לפגוע במעי הגס.

זכור כי בקצה הדיסטלי יש את פיסת החוט הארוכה ביותר. חותכים את המעי הגס לאורך מהקצה הדיסטלי לפרוקסימלי כך שייווצר יריעה ארוכה. כעת ניתן לראות את המעי הגס תחת מיקרוסקופ מנתח.

חותכים את המעי הגס לאורך ומניחים את המעי הגס כסדין שטוח. גלגול המעי הגס דורש שני זוגות מלקחיים וטכניקה בשתי ידיים. אחזו בשני הקצוות הצדדיים של שולי המעי הגס הדיסטלי בעזרת מלקחיים המשיכו לגלגל את המעי הגס ברצף על ידי סיבוב ושחרור המלקחיים הממשיכים לשוליים הפרוקסימליים, ובכך יוצרים ספירלה עם ממד שלישי או גלגול שוויצרי.

אם הנקודתיים נצמדים לנייר הוואטמן, הרטיבו את הנייר והמעי הגס בכמות קטנה של PBS כדי לשמור על הטופס. אחוז בגליל בחוזקה בעזרת מלקחיים וחצה בעזרת מחט בגודל 27 וחצי. אבטח את הגליל על ידי כיפוף המחט כשהיא יוצאת מהגליל.

כעת, הניחו את הגליל בקלטת טישו מסומנת והניחו את הקסטה בצנצנת של פוספט פורמלין 10%. השאירו אותו בטמפרטורת החדר למשך 24 שעות כדי לתקן את הרקמה. לאחר 24 שעות, שפכו את הפורמלין והחליפו באתנול 70% למשך עד ארבע שעות נוספות.

ניתן לאחסן את המעי הגס ב-70% אתנול ללא הגבלת זמן בטמפרטורת החדר. מודל זה מאפשר לחוקר להשיג, לתקן ולנתח את המעי הגס, ובכך מאפשר ניתוח חומרת הקוליטיס. לניתוח מקרוסקופי של המעי הגס כולו, ניתן לעבד את המעי הגס כנקניק המוחדר בפורמלין ולהרחיב אותו לחלוטין.

הנקניקיה הפתוחה צריכה לשכב שטוחה. אם שיטת הנקניקיות בוצעה כהלכה, המעי הגס הקבוע יורחב וניתן יהיה לתפעל בקלות את כל משטח הרירית ולצפות בו במיקרוסקופ הניתוח. לצורך ניתוח היסטולוגי, ניתן לעבד את המעי הגס כגליל שוויצרי.

הגליל מאובטח בעזרת מחט ומונח בקלטת טישו לקיבוע. כאשר הגליל נחתך ומורכב, הוא אמור ליצור פרוסה מייצגת של המעי הגס כולו אם מגלגלים אותו כראוי, ניתן להכתים חלקים מהגליל השוויצרי בהמטין ו-ASIN על מנת לקבוע את מידת הפגיעה במעי הגס. לזכור את הקצה הדיסטלי של המעי הגס נמצא במרכז הגליל בשקופית.

בדוגמה זו, דלקת ונזק לקריפטה ניכרים במעי הגס שטופל ב-DSS בהשוואה לבקרה שטופלה במים. זה עתה הראינו לכם כיצד לקצור ולעבד מעי גס ממודל עכברי של קוליטיס חריפה. בעת ביצוע הליך זה, חשוב שתהיו מאורגנים היטב לפני ההקרבה.

לעכברים, למשל, יש את כל הצינורות והקלטות המסומנים עבור כל עכבר ואת כל הכלים והריאגנטים הזמינים. בנוסף, שמור על רישומים מפורטים של משקל העכבר ואורך המעי הגס. לבסוף, ודא שהקצבת מספיק זמן לעיבוד.

זה בדרך כלל לוקח 15 דקות לעכבר לטירון ושש עד שמונה דקות למישהו מנוסה יותר בטכניקה זו.