Name: הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster Hemocyte נדידות עובריים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-12T18:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: למדו שיטת הדמיה חיה של נדידת המוקרופאגים העובריים ב-Drosophila melanogaster. הפרוטוקול כולל הכנת עוברים, סימון פלואורסצנטי וצילום מיקרוסקופי לחקר תנועת תאי דם במערכת החיסון.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פרוטוקול זה פותח דרך העבודה שלנו בתוך בשיתוף עם מעבדות של פול מרטין ואנטוניו חסינטו. אנו מודים מרכז במלאי Bloomington עבור שירות מעולה שלה ושל הקהילה תסיסנית להמשך לשתף קווי לעוף. BS ממומנת כרגע על ידי מענק לפרויקט BBSRC. WW ממומנת על ידי מלגה האמון Wellcome פיתוח קריירה.

<ol><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
<li>Bruckner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PDGF%2FVEGF+receptor+controls+blood+cell+survival+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">The PDGF/VEGF receptor controls blood cell survival in Drosophila.</a> Dev Cell. 7, 73-84 (2004).</li>
<li>Dutta, D., Bloor, J. W., Ruiz-Gomez, M., VijayRaghavan, K., Kiehart, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+morphogenetic+movements+in+Drosophila+using+Gal4-UAS-driven+expression+of+GFP+fused+to+the+actin-binding+domain+of+moesin%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of morphogenetic movements in Drosophila using Gal4-UAS-driven expression of GFP fused to the actin-binding domain of moesin.</a> Genesis. 34, 146-151 (2002).</li>
<li>Stramer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+wound+inflammation+in+Drosophila+embryos+reveals+key+roles+for+small+GTPases+during+in+vivo+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Live imaging of wound inflammation in Drosophila embryos reveals key roles for small GTPases during in vivo cell migration.</a> J Cell Biol. 168, 567-573 (2005).</li>
<li>Wood, W., Jacinto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+embryonic+haemocytes%3A+masters+of+multitasking%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster embryonic haemocytes: masters of multitasking.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 8, 542-551 (2007).</li>
<li>Halfon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+fluorescent+protein+reporters+for+use+with+the+Drosophila+Gal4+expression+system+and+for+vital+detection+of+balancer+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">New fluorescent protein reporters for use with the Drosophila Gal4 expression system and for vital detection of balancer chromosomes.</a> Genesis. 34, 135-138 (2002).</li>
<li>Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. Drosophila protocols. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. NY. (2000).</li>
<li>Tepass, U., Fessler, L. I., Aziz, A., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+origin+of+hemocytes+and+their+relationship+to+cell+death+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Embryonic origin of hemocytes and their relationship to cell death in Drosophila.</a> Development. 120, 1829-1837 (1994).</li>
<li>Millard, T. H., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+analysis+of+filopodial+interactions+during+the+zippering+phase+of+Drosophila+dorsal+closure%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Dynamic analysis of filopodial interactions during the zippering phase of Drosophila dorsal closure.</a> Development. 135, 621-626 (2008).</li>
<li>Doerflinger, H., Benton, R., Shulman, J. M., St Johnston, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+PAR-1+in+regulating+the+polarised+microtubule+cytoskeleton+in+the+Drosophila+follicular+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The role of PAR-1 in regulating the polarised microtubule cytoskeleton in the Drosophila follicular epithelium.</a> Development. 130, 3965-3975 (2003).</li>
<li>Olofsson, B., Page, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Condensation+of+the+central+nervous+system+in+embryonic+Drosophila+is+inhibited+by+blocking+hemocyte+migration+or+neural+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Condensation of the central nervous system in embryonic Drosophila is inhibited by blocking hemocyte migration or neural activity.</a> Dev Biol. 279, 233-243 (2005).</li>
<li>Paladi, M., Tepass, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+Rho+GTPases+in+embryonic+blood+cell+migration+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Function of Rho GTPases in embryonic blood cell migration in Drosophila.</a> J Cell Sci. 117, 6313-6326 (2004).</li>
<li>Vlisidou, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+embryos+as+model+systems+for+monitoring+bacterial+infection+in+real+time%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Drosophila embryos as model systems for monitoring bacterial infection in real time.</a> PLoS Pathog. 5, e1000518-e1000518 (2009).</li>
<li>Jacinto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+actin-based+epithelial+adhesion+and+cell+matching+during+Drosophila+dorsal+closure%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Dynamic actin-based epithelial adhesion and cell matching during Drosophila dorsal closure.</a> Curr Biol. 10, 1420-1426 (2000).</li>
<li>Wood, W., Jacinto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+cell+movement+during+dorsal+closure+in+Drosophila+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Imaging cell movement during dorsal closure in Drosophila embryos.</a> Methods Mol Biol. 294, 203-210 (2005).</li>
<li>Kunwar, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tre1+GPCR+initiates+germ+cell+transepithelial+migration+by+regulating+Drosophila+melanogaster+E-cadherin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Tre1 GPCR initiates germ cell transepithelial migration by regulating Drosophila melanogaster E-cadherin.</a> J Cell Biol. 183, 157-168 (2008).</li>
</ol>

האלמנטים החשובים ביותר של הליך זה הם מבחר של עוברים בריאים עם hemocytes שכותרתו ברורה לעלות אותם בזהירות מבלי לפגוע בהם. פעם הם עוברים בשמן halocarbon הם עמידים בפני התייבשות רכוב פעם ניתן הדמיה במשך כמה שעות. בידיים שלנו אנחנו hemocytes תמונה במשך שלוש שעות, עם התייבשות זניח של העובר או ברור צילום נזק, לקיחת Z-ערימה של תמונות כל שלוש דקות על מיקרוסקופ Zeiss LSM510 confocal שלנו עם מטרה 40X יכול. מאז hemocytes הם דינמיים מאוד יש תחלופה בין רזולוציה במרחב ובזמן, עשויים: אם תמונה בר...

<table><tbody><tr><td>מסננת תאים</td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td><td>נקבושים של 70&amp;#x03BC;m</td></tr><tr><td>שמן Halcarbon 700</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8898</td><td></td></tr><tr><td>צלחת Lumox/Petriperm</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>96077305</td><td></td></tr></tbody></table>

הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster hemocyte נדידות עובריים

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

תא מחקרים רבים כתובת הגירה באמצעות<em&gt; במבחנה</emשיטות&gt;, ואילו הסביבה רלוונטי מבחינה פיזיולוגית הוא זה של האורגניזם עצמו. כאן אנו מציגים פרוטוקול של הרכבה<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; עוברים הדמיה לחיות הבאות של hemocytes שכותרתו fluorescently, מקרופאגים עובריים של האורגניזם הזה. שימוש במערכת Gal4-כטב&quot;מ<sup&gt; 1</sup&gt; אנחנו נוסעים הביטוי של מגוון, סמנים מקודדים גנטית מתויג fluorescently ב hemocytes לעקוב פיזור ההתפתחות שלהם לאורך העובר. בעקבות אוסף של עוברים בשלב הרצויה של פיתוח, סיסית החיצוני היא להסיר את העוברים הם רכובים אז בשמן halocarbon בין הידרופובי, גז קרום חדיר ו coverslip זכוכית הדמיה לחיות. בנוסף פרמטרים נודדות ברוטו כגון מהירות כיווניות, הדמיה ברזולוציה גבוהה יותר בשילוב עם השימוש כתבים הניאון של ה-F-אקטין microtubules יכולים לספק מידע מפורט יותר לגבי הדינמיקה של רכיבים אלה cytoskeletal.

Hemocytes תסיסנית לפזר מעל מכלול של העובר המתפתח. פרוטוקול זה מדגים כיצד הר התמונה באמצעות העברות אלה עוברים עם hemocytes שכותרתו fluorescently.

הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster Hemocyte נדידות עובריים

מחקרים רבים עוסקים בנדידת תאים באמצעות שיטות in vitro, בעוד שהסביבה הרלוונטית מבחינה פיזיולוגית היא זו של האורגניזם עצמו. כאן אנו...

סרטון זה מדגים פרוצדורה להרכבת עוברים של דרוזופילה לצורך הדמיה של המוציטים (hemocytes), המקרופגים העובריים שלהם. הזבובים מטביעים עוברים על פלטות אגר של מיץ תפוחים בתוך כלוב הטבעה במהלך הלילה.ביום למחרת מוציאים את פלטת ה-agri ושוטפים את העוברים מהפלטה למסננת תאים, ולאחר מכן מבצעים שטיפות נוספות להסרת שיירי רקמה. את מסננת התאים המכילה את העוברים טובלים בתמיסת הלבנה כדי לצפות את העוברים. לאחר שטיפת תמיסת ההלבנה, מעבירים את העוברים לטיפת מים.לאחר מכן שואבים את טיפת המים ומכסים את העוברים בשמן הלו-קרבון. עוברים בשלב התפתחותי מתאים עם ציטופיקטורים (he cytes) נראים מועברים לממברנת פטרי בין שתי זכוכית כיסוי מקובעות ומסודרים בזהירות בשמן. לאחר מכן מניחים זכוכית כיסוי שלישית מעל העוברים ומדביקים אותה במקומה באמצעות לכה לציפורניים.ניתן כעת לדמות את הניידות של ההמוציטים בתוך העובר דרך לבידת הכיסוי העליונה תחת מיקרוסקופ. שלום, אני ג'ניפר זאד מהמעבדה של בריאן סטרם בחטיבת המגורים של ביולוגיה מולקולרית וביופיזיקה בקינגס קולג' לונדון. ואני איאן אוונס ממעבדת ווד במחלקה לביולוגיה וביוכימיה באוניברסיטת באת'.היום נדגים לכם פרוצדורה להרכבת Josephs bryo לצורך דימוי חי של ה-hemo site, המקרופאגים העובריים של אורגניזם זה. אנו משתמשים בפרוצדורה זו כדי לחקור את ההתפזרות ההתפתחותית ואת התגובה לרוח של תאי חיסון חשובים אלו, ואת המכשור של השלד התאי שבו הם משתמשים כדי לבצע תהליכים אלו. אז בואו נתחיל.התחל את הפרוצדורה על ידי השגת קווי TROs OAL מתאימים המכילים מניעי gal four ספציפיים להמוציטים (hemocytes) ודיווחים פלואורסצנטיים מקודדים גנטית תחת בקרת UAS. כאן, נעשה שימוש ב-serpent gal four כדי להניע ביטוי של סמן גרעיני אדום פלואורסצנטי מ-UAS Red Stinger. לדיון בטווח מניעי ה-GAL four והקונסטרוקטים של ה-UAS המומלצים, עיין בפרוטוקול הכתוב המצורף. הנח 20 זבובים מסוג drosophila מכל מין בכלוב הטלה.כלוב ההטלה מורכב מלוח חקלאי עם 55 מיליליטר מיץ תפוחים המותאם לתחתית של צינור פלסטיק, כאשר קצהו השני מכוסה בגזה כדי לאפשר זרימת אוויר. לחלופין, ניתן להשתמש בכוס פלסטיק פשוטה עם חורים. לאחר ניקוב הבסיס, יש לאפשר לזבובים להסתגל לכלוב ההטלה למשך יומיים לפחות; לאחר שהזבובים הסתגלו, יש להחליף ללוח מיץ תפוחים חדש שחומם מראש ולאפשר לזבובים להטיל ביצים במהלך הלילה בטמפרטורה של 25 °C.למידע בנוגע לאיסוף עוברים בשלבים מוגדרים יותר, אנא עיינו בפרוטוקול הכתוב המצורף. לאחר שהזבובים עברו דגירה למשך הזמן המתאים להטלה, השתמשו בבקבוק שטיפה כדי להתיז כ-three milliliters של מים על הצלחת. לאחר מכן, באמצעות מכחול בעל קצה רך, השחררו את העוברים ממיץ התפוחים; ניתן לראות בקלות את העוברים שהשתחררו בעין בלתי מזוינת כאשר מחזיקים מסננת תאים מעל כוס כימית.שפכו את המים מתוך ה-apple juice aate אל מסננת התאים כדי לאסוף את העוברים. לאחר מכן, הוסיפו מים נוספים ל-apple juice aate. חזרו על תהליך הסינון עד לאיסוף מספר העוברים הרצוי.כעת, בעזרת בקבוק שטיפה, שטפו את העוברים במסננת התאים באמצעות כ-10 milliliters של מים. לאחר שטיפת העוברים, הניחו את מסננת התאים במכסה של ה-Aerate עם מיץ תפוחים. הוסיפו תמיסת הלבנה רכזית בכמות המספיקה להשלימה את העוברים במסננת התאים כדי לצפות אותם.העבירו את מסנן התאים ואת מכסה פטרי למיקרוסקופ דיסקציה כדי לעקוב אחר דה-כוריונציה (decoration) של העוברים. תחת תאורת שדה בהיר (brightfield), הדה-כוריונציה נחשבת לשלמה כאשר התהליים הגביים התמוססו, דבר שאמור להתרחש תוך שתי דקות. לאחר השלמת הדה-כוריונציה, הוציאו את מסנן התאים המכיל את העוברים מהאקונומיקה, שוב תוך החזקת המסנן מעל כוס כימית.השתמשו בבקבוק שטיפה כדי לשטוף בעדינות אך ביסודיות את שאריות האקונומיקה. הניחו נייר סופג למעבדה בצבע כחול בחלקו התחתון של מסננת התאים כדי לספוג את שאריות המים. אם הצבע הכחול משתנה ללבן או ורוד, הדבר מעיד על נוכחות של שאריות אקונומיקה; המשיכו בשטיפה כדי להבטיח שכל עקבות האקונומיקה הוסרו לפני המעבר לשלב הבא.הסרת עודפי מים ממסנן התאים מקלה על איסוף העוברים באמצעות מכחול בשלב הבא. לאחר שכל האקונומיקה הוסרה מהעוברים, הניחו טיפת מים על מכסה של צלחת פטרי בעזרת מכחול עדין. אספו את כל העוברים המצופים מהמסנן והשעיו אותם מחדש בתוך הטיפה.לאחר מכן, השתמשו בנייר ניגוב כימי (chem wipe) על החלק החיצוני של מסנני התאים כדי לייבש את העובריים. לאחר ייבוש העובריים, הוסיפו טיפה של שמן halo carbon, 700 כדי לכסות את כל העובריים. לאחר מכן, הניחו טיפת שמן קטנה שנייה בסמוך לטיפה המכילה את העובריים.בחנו את העוברים תחת מיקרוסקופ דיסקציה פלואורסצנטי. זהו עוברים בשלבי התפתחות מתאימים ובעלי הגנוטיפ הרצוי, על מנת לדמות את הנדידה הלטרלית של ה-he cytes בקו האמצע הוונטרלי.בחרו עוברים בשלבים 13 עד 14. בדוגמה זו, ההמוציטים מזוהים על ידי הגרעינים הפלואורסצנטיים ונראים בראש, לאורך חבל העצבים הוונטרלי ובכלי הדורסלי המתפתח. כדי לדגמן את ניידות ההמוציטים לאחר שהתפזרו על פני העובר, בחרו עוברים בשלב 15. בשלב זה, ההמוציטים כבר יתפזרו על פני העובר כולו.עם זאת, לאחר נדידה לטרלית מקו האמצע, צריכים להיראות שלושה קווים מקבילים של hemos בצדו הגבני של העובר. לאחר בחירת העוברים, השתמשו בפינצטה מעוקלת של שען (מספר 5) כדי לאסוף את העוברים שנבחרו, תוך הקפדה לא לנקב את ממברנות הבקבוקון.לאחר מכן, העבירו את העוברים לטיפת השמן השנייה בחלק התחתון של צלחת פטרי perm lumax במידה של 50 מילימטרים. הניחו שתי טיפות קטנות של שמן Halo Caron oil 700 במרחק של כסנטימטר אחת מהשנייה. הניחו זכוכית כיסוי על כל טיפה תחת תאורת שדה בהיר (brightfield) במיקרוסקופ דיסקציה.העבירו בזהירות עד 15 עוברים באמצעות פינצטה קמורה. סדרו את העוברים כאשר הצד הבטני פונה כלפי מעלה ומקבילה לקצה של זכוכית כיסוי. לאחר סידור העוברים, טפטפו טיפה קטנה של שמן על זכוכית כיסוי נוספת ואפשרו לה להתפשט כדי ליצור שכבה הומוגנית בין שתי זכוכיות הכיסוי.לאחר שהשמן התפשט, פעולה זו עשויה להימשך מספר דקות. ודאו שהעובריים עדיין נמצאים במצב ונטראלי (בצד הגחוני). הפכו אותם שוב לצד כך שהצד האחורי פונה כלפי מעלה אם העובריים התגלגלו מעט.מקמו אותם שוב באמצעות הפינצטה. לבסוף, בעזרת פינצטה מספר שלוש, הניחו זכוכית כיסוי שלישית מעל העוברים.חיבור בין שתי זכוכיות הכיסייה שהודבקו קודם לכן. הדבקת זכוכית כיסייה זו למכסה. תמיכה בזכוכית הכיסייה באמצעות לק ציפורניים.העוברים מוכנים כעת לדימות. עובר SRP gal four UAS Red Stinger זה הועמד כאשר הצד הגחוני פונה כלפי מעלה, ותמונות time-lapse נרכשו באמצעות מיקרוסקופ דיסקציה פלואורסצנטי מסוג Leica M 2 0 5. תאי ה-hemo-cytes מוצגים באמצעות הגרעינים המסומנים שלהם בצבע אדום.הסרטון מתחיל בשלבי התפתחות 12 עד 13, כאשר ה-he cytes עוזבים את הראש ונודדים במורד קו האמצע הוונטרלי. לאחר כשעה, ה-he cytes מתחילים לנדוד מקו האמצע כדי להתפזר לעמדות לטראליות לאורך הפני השטח הוונטרליים. למשך שאר תקופת ההתפתחות.ההמוציטים פעילים מאוד ונדדים ברחבי העוברי. עלינו להראות לכם כיצד לנטר את העובר של זבוב הפירות כדי לעקוב אחר תנועת ההמוציטים בשידור חי in vivo. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לטיפל בעוברים בזהירות, במיוחד על תבנית הפטרי, כדי למנוע נזק. ברגע שהעוברים נמצאים בשמן, הם עמידים יחסית להתייבשות, אך יש להקפיד שלא להלבין את העוברים למשך זמן רב מדי בעת הסרת הקוריון.לבסוף, על ידי הרכבה של מספר עוברים, תגדילו את הסיכויים לקבל עובר באוריינטציה המושלמת עבור דימיון חי. זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסויים שלכם.

live-imaging-of-drosophila-melanogaster-embryonic-hemocyte-migrations

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן אנו מתארים פרוטוקול לבחון את ההגירה של ותאי גלייה לתוך העין תסיסנית מתפתחות באמצעות ניתוח מיקרוסקופי לחיות יחד עם התאים GFP גליה מתויג.

הדמיה חיה של נדידת תאים גליה את הדיסק העין דמותי תסיסנית

מקור: הירויאסו, א., ואחרים. חילוץ המוציטים מזחלי דרוזופילה מלנגסטר לצורך זיהום וניתוח מיקרוביאלי. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים הדמיה קונפוקלית ברזולוציה גבוהה של המוציטים Drosophila melanogaster שנדבקו ב-Coxiella burnetii כדי להמחיש את מיקום הפתוגן בתלת-ממד, ומאפשר ניתוח מפורט של דינמיקת זיהום תוך-תאית ואינטראקציות בין מארח לפתוגן.

הדמיה קונפוקלית ברזולוציה גבוהה של המוציטים נגועים בפתוגנים של דרוזופילה

מקור: Hellerman, M. B., et al. Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye. J. Vis. Exp. (2015)הסרטון מדגים טכניקת הדמיה חיה לחקר דפוסי עיניים בגולם Drosophila melanogaster. סמנים מתויגים בחלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) מאפשרים הדמיה של ארגון התאים והתמיינות במהלך היווצרות מבנה העין המתפתח.

הדמיה חיה של עין הגולם של דרוזופילה באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית

כאן אנו מתארים שיטה יעילה ללימוד דינמיקה של פינוי תאים...

חי הדמיה של חיסול תאים אפופטוטיים במהלך<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עובר

מסמך זה מדגים את השימוש במיקרוסקופ confocal סריקה מהירה לתמונת התנהגות תא ישירות דרך הגולם. מאת עוזב את המקרה גלמי שלם, שיטה זו מאפשרת תצפית ומדידה של תהליכים בתא דינמיים בשלב של פיתוח דרוזופילה שקשה ללמוד באופן ישיר.

הדמיה באמצעות המקרה גלמי של<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

פרוטוקול זה מציג שיטה יעילה להדמיה של נוירואפיתל עין גולם חי של דרוזופילה. שיטה זו מפצה על תנועת רקמות וטופולוגיה לא אחידה, משפרת את ההדמיה של גבולות התא באמצעות שימוש בחלבוני צומת מרובים המתויגים ב-GFP, ומשתמשת במתקן הדמיה המורכב בקלות.

Live-הדמיה של דרוזופילה גלמי עין

תאי דם דרוזופילה, או המוציטים, עוברים בין אתרי מגורים למחזור הדם.  בזחל, המוציטים תושבים (יושבים) מתמקמים במיקרו-סביבות אינדוקטיביות, הכיסים ההמטופויאטיים, בעוד המוציטים במחזור נעים בחופשיות בהמולימפה. מטרת פרוטוקול זה היא בידוד וכימות סטנדרטיים של שתי אוכלוסיות ההמוציטים הללו, הנבדלות מבחינה התנהגותית אך משתנות זו בזו.

אוכלוסיות תאי דם Assaying של<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; זחל

שיטה זו מדגימה כיצד להמחיש הפתוגן הפלישה לתוך תאים חרקים עם דגמים תלת ממדיים (3D). Hemocytes של הזחלים דרוזופילה נדבקו בנגיף פתוגנים נגיפי או חיידקי, או vivo לשעבר או ויוו. Hemocytes נגוע היו לאחר מכן קבועה, צבעונית עבור הדמיה עם מיקרוסקופ קונפוקלי, עוקבות שיחזור תאי תלת-ממד.

החילוץ של Hemocytes של הזחלים דרוזופילה melanogaster זיהום מיקרוביאלי וניתוח

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור הדמיה לחיות הפצע ותיקון ההיענות דלקתיות המשויך ברזולוציה גבוהה-עתיים ויוו. שיטה זו משתמשת השלב הגולמי של פיתוח דרוזופילה כדי לאפשר לטווח ארוך הדמיה ומעקב של אוכלוסיות תאים מסוים לאורך זמן והוא תואם עם איון יעיל מציאה RNAi בתיווך גנים.

לטווח ארוך In Vivo מעקב של תאים דלקתיים הדינמיקה בתוך דרוזופילה הגלמים

מיקרוסקופיה פלואורסצנטית מבוססת יריעות אור היא הכלי בעל הערך הרב ביותר בביולוגיה התפתחותית. נושא מרכזי במחקרים השוואתיים הוא שונות הסביבה. הפרוטוקול שלנו מתאר מסגרת ניסיונית להדמיה חיה בו זמנית של דגימות מרובות, ולכן מטפל בנושא זה באופן פעיל.

הדמיה חיה בו זמנית של עוברי חרקים מרובים במיקרוסקופים פלואורסצנטיים מבוססי גיליון אור קאמרית לדוגמה

כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט לביצוע הדמיה חיה של החלוקה הא-סימטרית של תאי גזע של קו הנבט (GSCs) בנישת השחלות של דרוזופילה. אנו משתמשים בקו טרנסגני המבטא בכל מקום היתוך חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) של חלבון הספקטרוזום Par-1.

הדמיה חיה מורחבת של נישות תאי גזע נקבות Drosophila melanogaster

למדו שיטת הדמיה חיה של נדידת המוקרופאגים העובריים ב-Drosophila melanogaster. הפרוטוקול כולל הכנת עוברים, סימון פלואורסצנטי וצילום מיקרוסקופי לחקר תנועת תאי דם במערכת החיסון.

הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster Hemocyte נדידות עובריים

גלה סרטונים נוספים