Name: פענוח מסלולים axonal של קבוצות מוגדרות גנטית של נוירונים התחתית ציק עצבית ניצול ב אובו Electroporation (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-02T20:17:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: למד לפענח מסלולים אקסונליים של נוירונים מוגדרים גנטית בחוט השדרה העוברי של תרנגולת באמצעות אלקטרופורציה in ovo. שיטה זו מאפשרת חקר מסלולי אקסונים ופיתוח עצבי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים AK מן הקרן הלאומית למדע, משרד הבריאות, DFG (גרמנית Research Foundation).

I. electroporation ביצה טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הביצים באינקובטור להגדיר humidified ל 37-38 מעלות צלזיוס, עדיף באינקובטור עם מגשי נדנדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עובריים הם electroporated לאחר כ 66 שעות של דגירה, כשהם הגיעו המבורגר &amp; המילטון (HH) שלב 18-20. בשלב זה הראש נמצא בזווית ישרה המטען (מצב הנקרא צוואר הרחם כפף) ומערכת המכריע של חוץ עובריים כלי דם, כגון קדמית, אחורית, ורידים על ימין ועל שמאל vitelline יש לראות. זהו השלב האופטימלי עבור הביטוי משפר תלויי ספציפי 1,3,4. חשוב לפקח על הטמפרטורה והלחות של החממה, על מנת לקבל עוברים קיימא מסונכרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 66 שעות של דגירה, להסיר את הביצים מן החממה. מניחים את הביצים בצורה אופקית. חכה 5-10 דקות. העובר כרגע נמצא בקוטב העליון של הביצה. </li></ol> ההכנות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הפתרון של האנק עם סטרפטומיצין / פניצילין (P / S) (1:100 דילול). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך זכוכית נימי (בקוטר 0.5 מ&quot;מ) כדי microcapillary. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את האלקטרודות (טונגסטן) לתוך micromanipulator ולהתחבר אלקטרודות מחולל את הדופק (ECM 830). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את מחולל הדופק עם הפרמטרים הבאים: מתח 30V, מספר פולסים - 3, באורך של 50 מילישניות הדופק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פיפטה בפה, מחט מזרק קלטת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו תערובת של דנ&quot;א הרצוי (2-5μg/μl) ולהוסיף צבע ירוק מהיר. </li></ol> Windowing ו electroporation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מזרק, להסיר 5-6 מ&quot;ל של אלבומין מהביצה כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם מספריים קטנים לפתוח חלון סגלגל בצד העליון של הביצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העובר לחים עם 0.5-1ml פתרון + P / S של האנק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש פיפטה בפה, כדי לטעון את הכוס microcapillary בתערובת DNA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העובר עם הזנב כלפיך. בשלב זה, חוט השדרה של העובר נראה בבירור. לפיכך, טכניקות לא מנוגדים נדרשים. חוט השדרה הוא חתום בשני הקצוות, את הראש ואת הזנב, אבל אם microcapillary שלך הוא דק מספיק, תוכל לנקב חור קטן בצינור העצבי לחדור בזווית רדוד. Microcapillary בקוטר הנכון צריך להיות טעון בקלות עם ה-DNA, לחדור את הצינור ללא פגיעה בו ולשחרר את ה-DNA עם הנשיפה קבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק את ה-DNA בעזרת פיפטה בפה. צבע ירוק צריך להפיץ מקצה הזנב עד שלפוחית ​​של המוח המתפתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את האלקטרודות במקביל הצינור העצבי, קרוב ככל שאתה יכול, בלי לגעת הצינור עצמו ואת הדופק. בזמן הדופק, אלקטרודות חייב להיות מכוסה נוזלי ומאפשר מוליכות חשמלית. בדרך כלל, סכום של יחזקאל הוסיף על מתחננים מספיק. אם לא להוסיף טיפה אחת של לפני רק של האנק הדופק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להסיר את האלקטרודות ולאטום את החלון עם קלטת. חשוב לאטום את הביצה לגמרי כדי למנוע התייבשות של העובר במהלך תקופת הדגירה הבאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הביצים בחזרה בחממה. </li></ol> השנייה. הכנת חוט השדרה פתוח הספר ניתוק של חוט השדרה של העובר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את העובר eletroporated, ב E6, מן הביצה ומניחים בצלחת פטרי מצופים סיליקון המכיל PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים ממנו את הקרומים ולמתוח את העובר בצד הגחון שלו באמצעות סיכות כדי להחזיק אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש טונגסטן חדה microcapillary לעשות חתך אורכי לאורך צלחת על הגג, מן למוח האחורי עד הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן שני חתכים נוספים האורך משני צדי עמוד השדרה, ניתוק הגרעינים השורש הגבי (DRGs) במרחק חוט השדרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתק את הצלחת הרצפה מרקמת החל הזנב עד למוח האחורי, משאיר את חוט השדרה שלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את חוט השדרה בקטע רוחבי ב למוח האחורי באמצעות מספריים בסדר להפריד אותו מהגוף. </li></ol> קיבוע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחים את חוט השדרה מבודד בצלחת פטרי חדש מצופה סיליקון המכיל PBS, באמצעות סיכות כדי להחזיק אותו, מן למוח האחורי כדי לייצר זנב הכנה שטוח הר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים את PBS מן המנה ולהחליפה paraformaldehyde 4% פוספט שנאגרו מלוחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה בטמפרטורת החדר למשך שעה 1. </li></ol> אימונוהיסטוכימיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את חוט השדרה קבוע לתוך בקבוקון המכיל נוגדנים העיקרי PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה עם בהסתה עדין מעל בלילה 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את הנוגדנים X5 פעמים עם PBS, לשטוף כל שעה 1 עם בהסתה עדין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת נוגדנים משני דגירה עם בהסתה עדין מעל בלילה 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את הנוגדנים X5 פעמים עם PBS, כל אחדלשטוף שעה 1 עם בהסתה עדין. </li></ol> ספר פתוח הרכבה הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח שמן או סיליקון בצורת מלבן בשקופית ו לטפטף בתוך PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את חוט השדרה נמתח באמצע המלבן באמצעות פינצטה ולהסיק את נוזל מסביב עם פיפטה פסטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום 1-2 טיפות של התקשורת גובר על חוט השדרה ומכסים להחליק לכסות. סקווש זה כדי למנוע בועות אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את שקופיות כהה 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את חוט השדרה באמצעות מיקרוסקופיה confocal. </li></ol>

<ol><li>Zisman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteolysis+and+membrane+capture+of+F-spondin+generates+combinatorial+guidance+cues+from+a+single+molecule%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule.</a> J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).</li>
<li>Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paths%2C+elongation%2C+and+projections+of+ascending+chick+embryonic+spinal+commissural+neurons+after+crossing+the+floor+plate%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate.</a> Brain Res. 1223, 25-33 (2008).</li>
<li>Avraham, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+axonal+guidance+and+sorting+in+dorsal+interneurons+by+the+Lim-HD+proteins+Lhx9+and+Lhx1%5BTitle%5D)+AND+%22+Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1.</a> Neural Dev. 4 (1), 21(2009).</li>
<li>Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+in+ovo+electroporation+for+the+rapid+analysis+of+neural-specific+murine+enhancers%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers.</a> Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).</li>
<li>Reeber, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manipulating+Robo+expression+in+vivo+perturbs+commissural+axon+pathfinding+in+the+chick+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord.</a> J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).</li>
</ol>

Electroporation של DNA פלסמיד לתוך העובר מתפתח אפרוח כטכניקה עוצמה בביטוי חוץ רחמי vivo. השילוב של משפרי ספציפי, electroporation חומוס מספק כלי מהיר ויעיל עבור פענוח מסלולים axonal של קבוצה מוגדרת גנטית של נוירונים 1,3,5. ניצול Cre / LoxP ומערכות הגברה Gal4/UAS יכולים להגדיל את רמות ומשך הביטוי. התמונה המצטיירת היא של הבדלי מורכבת של אותות axonal הנובעת subpopulations interneuron, שהוגדר על ידי לכיוון תחזיות axonal שלהם. בנוסף, סימולטני תיוג מוגבלת מולקולרית המרחבי של ש...

פענוח מסלולים axonal של קבוצות מוגדרות גנטית של נוירונים התחתית צ&#39;יק עצבית ניצול ב אובו electroporation

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

התעסוקה של אלמנטים משפר לנהוג הביטוי של גנים כתב בנוירונים הוא פרדיגמה בשימוש נרחב עבור מעקב הקרנת axonal. למעקב הקרנת axonal של interneurons השדרה חוליות, קו במיקוד נבט גנים כתב תשואה תיוג סימטרי בילטרלי. לכן, קשה להבחין בין ipsi ו קונטרה-רוחבית אקסונים מקרין. Electroporation חד צדדית לתוך הצינור העצבי חומוס מספק אמצעי שימושי להגביל את הביטוי של הגן כתב בצד אחד של מערכת העצבים המרכזית, ולעקוב אחר התחזית axonal משני הצדדים<sup&gt; 1 ,2-5</sup&gt;. וידאו זה מדגים הראשונה איך להתמודד עם ביצים לפני הזריקה. באותו שלב HH 18-20, הדנ&quot;א מוזרק לתוך רמת העצה של הצינור העצבי, אז אלקטרודות טונגסטן ממוקמים במקביל העובר ואת פולסים חשמליים קצרים מנוהלים עם גנרטור הדופק. ביצה היא חתומה עם סרט והניח בחזרה באינקובטור להמשך פיתוח. כעבור שלושה ימים (E6) חוט השדרה הוסר כהכנה ספר פתוח מעובר קבועה, ומעובד מכתים הר שלם נוגדן. חוט השדרה מוכתם הוא רכוב על שקופיות דמיינו באמצעות מיקרוסקופיה confocal.

וידאו זה מדגים כיצד לדמיין מסלולי axonal של קבוצות מוגדרות גנטית של נוירונים בחוט השדרה ניצול חומוס עובריים<em&gt; ב אובו</em&gt; Electroporation של גנים כתב תחת שליטתה של אלמנטים ספציפיים משפר.

פענוח מסלולים axonal של קבוצות מוגדרות גנטית של נוירונים התחתית צ&#39;יק עצבית ניצול ב אובו Electroporation

השימוש באלמנטים משפרי ביטוי (enhancer elements) להנחיית ביטוי של גנים מדליים (reporter genes) בנוירונים הוא פרדיגמה נפוצה למעקב אחר השלחות אקסוניות. למעקב אחר...

שלום, אני חם מהמעבדה של ד"ר Review Klar במחלקה לנוירוביולוגיה רפואית באוניברסיטה העברית בירושלים. שלום, אני סופי אסמן ואני גם מהמעבדה של Lars. היום נראה לכם פרוצדורה ל-Innovo, אלקטרופורציה והכנת ספר פתוח של חוט השדרה.אנו משתמשים בהליך זה במעבדתנו כדי לחקור מסלולים אקסוניים של אוכלוסיות נוירונים המוגדרות גנטית בחוט השדרה העוברי. אז בואו נתחיל. כדי להתחיל בהליך זה, העבירו ביצי תרנגולת לבנות (White Leghorn) מופרות מטמפרטורת החדר לאינקובטור עם לחות, רצוי עם מגשי נדנוד, בטמפרטורה של 37 עד 38 מעלות צלזיוס.חשוב לנטר את הטמפרטורה והלחות של האינקובטור כדי להשיגו עובריים חיים ומסונכרנים. את עוברי האפרוח מבצעים להם אלקטרופורציה כאשר הם מגיעים לשלבי hamburger and Hamilton או HH stage 18 to 20, שלב אופטימלי לביטוי ספציפי תלוי-מעכב (enhancer dependence specific expression). בשלב זה, הראש נמצא בזווית ישרה לגבי הגו.בשלבים 18 עד 20 של HH, ניתן לראות גם מערכת נרחבת של כלי דם חו-עובריים, כגון כלי דם של קווי החיים (vital line vessels) הקדמיים והאחוריים, מימין ומשמאל. העוברים של האפרוח מגיעים לשלבים 19 עד 20 של HH לאחר 66 שעות של דגירה, ובזמן זה יש להוציא את הביצים מהמדגרה. לאחר הוצאת הביצים, הניחו אותן במצב אופקי והמתינו חמש עד 10 דקות. העובר נמצא כעת בקוטב העליון של הביצה.לפני הפוריגציה החשמלית, הכינו את תמיסת Hank עם 100 units per milliliter של penicillin ו-0.1 milligrams per milliliter של streptomycin. הכינו תערובת רצויה של DNA בריכוז של two to five micrograms per microliter והוסיפו מספר גרגירים של צבע fast green לצורך ויזואליזציה קלה של ה-DNA המוזרק. הכינו בנוסף פפט פה (mouth pipette), מחט של מזרק סטרילי, מספריים קטנים וסרט דבק.הכינו נימים מיקרוסקופיים על ידי מתיחת נימי זכוכית בקוטר 0.5 מילימטר באמצעות מושך פיפטות. מקמו את אלקטרודות הטונגסטן בתוך המיקרו-מניפולטורים וחברו את האלקטרודות למחולל הפולסים. הגדירו במחולל הפולסים מתח של מינוס 30 volts, אורך של 50 milliseconds לכל פולס ומספר פולסים של שלושה.יש להמשיך לאלקטרופורציה לפני חשיפת העוברים והטיפול בהם. הכניסו מזרק לקוטב הצר של הביצה והוציאו חמישה עד שישה מיליליטרים של אלבומין מכל ביצה. האלבומין מוסר כדי למנוע את נשפכותו.בעת החיתוך בשלב הבא, השתמש במספריים קטנים לצורך הגזירה. פתח חלון אובלי בחלקו העליון של הביצה לאחר חשיפת העובר, והלחה אותו עם 0.5 עד 1 milliliters של תמיסת hanks ו-penicillin streptomycin. לאחר מכן, השתמש בפיפטה ידנית כדי למלא את המיקרו-קפילרה מזכוכית.בעזרת תערובת צבעי DNA, יש להטעין בקלות נימה מיקרו-קפילרית בעלת הקוטר המתאים ב-DNA. תחת מיקרוסקופ בינוקולרי, מקמו את העובר לצורך הזרקת ה-DNA לתוך צינור העצבים. הניחו את העובר כך שזנבו פונה אליכם.בשלב התפתחותי זה, חוט השדרה נראה בבירור ולכן אין צורך בטכניקות ניגודיות. חוט השדרה אטום הן בקצה הראש והן בקצה הזנב. עם זאת, בעת ביצוע דקיקות עם מיקרו-קפילריה, יש להכין חורים בצינור העצבי ולחדור אליו בזווית רדודה; מיקרו-קפילריה דקה מספיק ובקוטר הנכון אמורה לחדור את הצינור מבלי לגרום לו נזק.הזריקו את ה-DNA באמצעות פיפטה ידנית (mouth pipette). מיקרו-קפילרה בקוטר המתאים צריכה לשחרר את ה-DNA באמצעות נשיפה סדירה. הצבע הירוק צריך להתפשט מקצה הזנב ועד לבועיות של המוח המתפתח.הזרק עד שהצינור העצבי מלא ב-DNA; נדרשת אלקטרופורציה של ה-DNA המוזרק כדי שיחדור לתאים. ראשית, מקם את האלקטרודות במקביל לצינור העצבי ובמרחק קרוב ככל האפשר ממנו, מבלי לגעת בצינור עצמו. ודא שהאלקטרודות מכוסות בנוזל כדי לאפשר מוליכות חשמלית במהלך הפולס.בדרך כלל, תמיסת Hank שנוספה מיד לאחר חשיפת העובר מספיקה. אך אם לא, יש להוסיף טיפה אחת של תמיסת Hank רגע לפני הפולס, כאשר האלקטרודות ממוצבות וטבולות בנוזל, ולהפעיל את הפולס החשמלי; לאחר מכן, יש להוציא בזהירות את האלקטרודות ולאטום את החלון ואת הביצה באמצעות סרט דבק. חשוב לאטום את הביצה לחלוטין כדי למנוע התייבשות של העובר במהלך תקופת הדגירה העוקבת.החזירו את הביצה לדגירה והדגירו אותה עד שהעובר של האפרוח מגיע לשלב התפתחותי של היום השישי (E6). כאשר העובר שעבר אלקטרופורציה מגיע ליום השישי (E6) להתפתחותית, שלושה ימים לאחר האלקטרופורציה, זהו הזמן לדימות; הוציאו אותו מהביצה בעזרת מספריים עדינים והניחו אותו בתוך צלחת פטרי מצופה סיליקון המכילה PBS.הסיר את הקרומים ומתוך אתו העובר על צדו הגחוני באמצעות סיכות הננעצות בסיליקון כדי לקבע אותו במקומו. בעזרת מיקרו-קפילרית חדה מתנגסטן, בצע חתךlongitudal לאורך לוח הגג (roof plate) מהמוח האחורי ועד הזנב.בצעו שתי חתכים לאורכיים נוספים משני צדי חבל השדרה, ובכך הפרדו את ganglion של השורש האחורי (DRGs) מחבל השדרה. הפרדו את ה-floor plate מהרקמה, החל מהזנב ועד למוח האחורי, תוך השארת חבל השדרה שלם. לבסוף, השתמשו במספריים עדינות כדי לחתוך את חבל השדרה בחתך רוחבי באזור המוח האחורי ולהפריד את חבל השדרה מהגוף.כעת, לאחר שחוט השדרה בודד, פרסו אותו בתוך צלחת פטרי חדשה מצופה סיליקון המכילה PBS, תוך שימוש בסיכות כדי לקבע אותו מהמוח האחורי ועד הזנב, כדי ליצור דגימה שטוחה (flat mount). קבעו את חוט השדרה ב-4% paraformaldehyde ב-PBS למשך שעה בטמפרטורת החדר, ובצעו צביעה אימונוהיסטוכימית בהתאם לפרוטוקול הכתוב המפורט המצורף לקיבוע חוט השדרה במצב פתוח. הכינו את הדגימה להדמיה.מרחו גריז או סיליקון בצורת מלבן על זכוכית כיסוי וטפטפו PBS בתוך המלבן. השתמשו בפינצטה כדי להניח את חוט השדרה, כאשר הוא מתוח במרכז המלבן, ושאבו את הנוזל שסביבו. בעזרת פיפטה, טפטפו אחת עד שתיים טיפות של חומר קיבוע (mounting media) על חוט השדרה וכסו בזכוכית כיסוי.הפעל לחץ על לוכית הכיסוי. כדי למנוע בועות אוויר. שמור את השקופיות בחושך בטמפרטורה של 4 °C.יש לבחון את חבל השדרה באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית. להלן מספר תוצאות מייצגות של נשירה אקסונית של נוירונים אינטר-ספינליים של גוזאלי רפתה בניסויי בקרה שבהם RFP מובע בכל הנוירונים באמצעות אלמנט מגביר אוניברסלי מ-CMV; רוב הנוירונים ואקסוניהם מסומנים. במצב זה, לא ניתן לפענח את מסלול האקסונים של תתי-אוכלוסיות נוירונליות.עם זאת, כאשר מיישמים אלמנטים משפרים ספציפיים, נחשף מסלול אקסוני מוגדר של תת-אוכלוסייה ספציפית של נוירונים DI שניים בדוגמה זו. כך שהראינו לכם הרגע כיצד לבצע אלקטרופורציה של צינור עצבי של עוף עם משפר נוירונלי ספציפי ב-E3, וכיצד להכין חוט שדרה בשיטת "ספר פתוח" ב-E6. בעת ביצוע הליך זה, עליכם לזכור להיות זהירים וסבלניים.זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם. בהצלחה.

deciphering-axonal-pathways-genetically-defined-groups-neurons-chick

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ב electroporation ברחם היא שיטה ערך עבור transfecting ובתאים עצביים in vivo. בהתאם למיקום של אלקטרודות ואת timepoint ההתפתחותי של electroporation, תת מסוימים של תאים בקליפת המוח יכול להיות ממוקד. התאים הממוקדים אז יכול להיות מנותח in vivo או במבחנה על ההשפעות של שינוי גנטי.

ברחם electroporation ואחריו תרבות עצבית ראשונית ללימוד פונקציה ג&#39;ין בתת קבוצה של נוירונים קליפתיים

ב electroporation ברחם מאפשר למסירה גן מהירה באופן מרחבית, ובזמן שבשליטת במערכת לפתח את העצבים המרכזית (CNS). כאן אנו מתארים וישימה מאוד בפרוטוקול electroporation ברחם, שניתן להשתמש בהם כדי לספק בונה ביטוי עובריים לתוך מערכת העצבים המרכזית מספר תחומים, כולל diencephalon telencephalon, ואת הרשתית.

ג&#39;ין אספקה ​​יעילה לתוך השטחים CNS מרובים באמצעות בתוך הרחם Electroporation

כדי להעריך את תפקוד רגולציה של גנים במהלך ההתפתחות של נוירונים המוח התיכון דופאמין, אנו מתארים שיטה...

ב electroporation לג&#39;ימי של המוח התיכון צ&#39;יק לחקר תפקוד הגן בהתפתחות Neuron דופאמין

שיטה שבאמצעותה ביטוי גנים בצינור העצבי יכול להיות downregulated באופן ספציפי לסוג תא, מעקב מתוארת. אנחנו מדגימים...

בelectroporation אובו של פלסמידים מירנה מבוססים ברכבת התחתית הפיתוח העצבי והערכת פנוטיפים ידי הזרקת DiI בהכנות-ספר פתוח

איך רשתות עצביות נוצרות במוח העוברי היא שאלה בסיסית בנוירוביולוגיה התפתחותית. כאן אנו בשילוב טכניקת electroporation עם כלים גנטיים חדשים, כגון מערכת טרנספוזיציה DNA PiggyBac בתיווך במוח האחורי העופות לתייג interneurons גב ולעקוב אחר תחזיות axonal ומטרות סינפטיים בשלבי התפתחות שונים Cre / קס-פלסמידים ו.

Electroporation של המוח האחורי כדי לעקוב אחר מסלולים ויעדי axonal Synaptic בעובר האפרוח

סרטון זה מציג את השלבים הבסיסיים לביצוע ניתוח טרנסקריפטום שלם על דגימות חוט שדרה עוברי של אפרוח מנותח לאחר טרנספקציה עם אלקטרופורציה בביצית.

RNA-Seq ניתוח של ביטוי הגנים בדיפרנציאל חוט השדרה Electroporated אפרוח עוברי

כתב יד זה מספק פרוטוקולים המשתמשים ב electroporation ברחם (IUE) כדי לתאר את הקישוריות המבנית של נוירונים ברמת התא בודד ועל הרגישויות של נוירונים שכותרתו fluorescently. היסטולוגיה משמש כדי לאפיין הדנדריטים ותחזיות axonal. הקלטה כל התא פרוס חריפה משמשת לחקור רגישות.

ברחם Electroporation גישות לחקר רגישות של העצבית subpopulations וקישוריות תא יחיד

נוירונים גזעיים של גזע המוח של avians ויונקים הם מיוחדים עבור קידוד עצבי מהיר, תהליך בסיסי עבור פונקציות השמיעה הרגילה. נוירונים אלה נובעים מבשרי ברורים של המוח האחורי עובריים. אנו מציגים טכניקות ניצול electroporation להביע גנים במוח האחורי של עוברים עוף ללמוד תפקוד הגן במהלך פיתוח השמיעה.

ב Electrooration Ovo ב המוח עוף שמיעה

אנו מתארים את פעולות השירות עבור תיוג פלורסנט tangentially גידול תאים על-ידי אלקטרופורציה ולאחר עבור הדמיה בצילום מואץ של התנועה תאים עם תוויות בתרבות שטוח-הר כדי להמחיש נודדות תא התנהגות tectum אופטיים לפתח הבחורה .

ויזואליזציה של נדידת תאים העוסקות ב Tectum אופטיים לפתח הבחורה

הגוזל הוא אורגניזם מודל חסכוני, נגיש וזמין באופן נרחב למגוון מחקרים. כאן מפורטת סדרה של פרוטוקולים להבנת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס ההתפתחות וההתחדשות של האוזן הפנימית של העופות.

בשיטות אובו ואקס אובו לחקר התפתחות האוזן הפנימית של העופות

למד לפענח מסלולים אקסונליים של נוירונים מוגדרים גנטית בחוט השדרה העוברי של תרנגולת באמצעות אלקטרופורציה in ovo. שיטה זו מאפשרת חקר מסלולי אקסונים ופיתוח עצבי.

פענוח מסלולים axonal של קבוצות מוגדרות גנטית של נוירונים התחתית צ'יק עצבית ניצול ב אובו Electroporation

גלה סרטונים נוספים