Name: הכנת מטריצות תלונה לכימות התכווצות נייד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-14T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 38 s
Description: למדו להכין מטריצות תלומה מצופות במטריצה חוץ-תאית לכימות התכווצות תאים באמצעות מיקרוסקופיית כוחות משיכה. שיטה זו מאפשרת חקר השפעת קשיחות המטריצה על התנהגות התאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים במעבדה של אולריך שוורץ עבור תוכנת מעקב חישובית המשמש כימות של כוחות המתיחה הסלולר (Sabass et al. 2008). עבודה זו נתמכה על ידי פרס בורוז קריירה Wellcome ופרס פיוניר NIH של מנהל (DP10D00354) כדי ML ​​Gardel רפואי המדען השירות הלאומי לחקר פרס (5 T32 GM07281) חורף SP.

<ol><li>Damljanovic, V., Lajerholm, B. C., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bulk+and+micropatterned+conjugation+of+extracellular+matrix+proteins+to+characterized+polyacrylamid+substrates+for+cell+mechanotransduction+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Bulk and micropatterned conjugation of extracellular matrix proteins to characterized polyacrylamid substrates for cell mechanotransduction assays.</a> Biotechniques. 39 (6), 847-851 (2005).</li>
<li>Engler, A., Bacakova, L. N. ewman, Hategan, C., Griffin, A., M, D. D. ischer <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substrate+compliance+versus+ligand+in+cell+on+gel+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Substrate compliance versus ligand in cell on gel responses.</a> Biophys J. 86 ((1 Pt 1)), 617-628 (2004).</li>
<li>Gardel, M. L., Sabass, B., Ji, L., Danuser, G., Schwarz, U. S., Waterman, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traction+stress+in+focal+adhesions+correlates+biphasically+with+actin+retrograde+flow+speed%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Traction stress in focal adhesions correlates biphasically with actin retrograde flow speed.</a> J Cell Biol. 183, 999-1005 (2008).</li>
<li>Rajagopalan, P., Marganski, W. A., Brown, X. Q., Wong, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+comparison+of+the+spread+area%2C+contractility%2C+and+migration+of+balb%2Fc+3T3+fibroblasts+adhered+to+fibronectin-+and+RGD-modified+substrata%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Direct comparison of the spread area, contractility, and migration of balb/c 3T3 fibroblasts adhered to fibronectin- and RGD-modified substrata.</a> Biophys J. 87 (4), 2818-2827 (2004).</li>
<li>Reinhart-King, C. A., Dembo, M., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamics+and+mechanics+of+endothelial+cell+spreading%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">The dynamics and mechanics of endothelial cell spreading.</a> Biophys J. 89, 676-689 (2005).</li>
<li>Stricker, J., Sabass, B., Schwarz, U. S., Gardel, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+traction+force+microscopy+for+micron-sized+focal+adhesions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys%3A+Condensed+Matter%22%5BJournal%5D)">Optimization of traction force microscopy for micron-sized focal adhesions.</a> J. Phys: Condensed Matter. 22, 194104-194114 (2010).</li>
<li>Sabass, B., Gardel, M. L., Waterman, C. M., Schwarz, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+traction+force+microscopy+based+on+experimental+and+computational+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">High resolution traction force microscopy based on experimental and computational advances.</a> Biophys J. 94, 207-220 (2008).</li>
<li>Yeung, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+substrate+stiffness+on+cell+morphology%2C+cytoskeletal+structure%2C+and+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motil+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Effects of substrate stiffness on cell morphology, cytoskeletal structure, and adhesion.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 60 (1), 24-34 (2005).</li>
<li>Waterman-Storer, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtubule%2Forganelle+motility+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Microtubule/organelle motility assays.</a> Curr Protoc Cell Biol. , 13.1.1-13.1.21 (1998).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

ההליך המתואר כאן להתקנה של מיקרוסקופ כוח המתיחה (TFM) ניסוי, יחד עם יישום שגרת מעקב חישובית (Sabass et al., 2008), מאפשרת כימות של כוחות הסלולר עם רזולוציה מיקרון בקנה מידה מרחביים. כדי לייעל את פרוטוקול הניסוי, חיוני ליצירת מצע ג&#39;ל טהור ואחיד עם ציפוי אחיד של ליגנד ECM. אנו דנים החסרונות האפשריים הבאים: לא אחידה משטח ג&#39;ל או דמעות: ...

<table><tbody><tr><td>3-aminopropyltrimethyoxysilane</td><td>Aldrich</td><td>28, 177-8</td><td></td></tr><tr><td>40% Acrylamide</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0140</td><td></td></tr><tr><td>2% Bis-acrylamide</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1404</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP 150-20</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium persulfate</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP179</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-ספירות פלואורסצנטיות 40nm</td><td>Invitrogen</td><td>F8789</td><td></td></tr><tr><td>Sulfo-SANPAH</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>22589</td><td></td></tr><tr><td>תא דימות קונפוקלית (RC-30)</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0320</td><td></td></tr><tr><td>ספינר לכיסויי זכוכית</td><td>בנייה עצמית</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>מנורת אולטרה-סגול CL1000</td><td>UVP Inc.</td><td>95-0228-01</td><td></td></tr><tr><td>מתקן פלדת אל-חלד</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72239-04</td><td></td></tr><tr><td>acryloyl-X, SE (6-((acryloyl)amino)hexanoic acid)</td><td>Invitrogen</td><td>A-20770</td><td></td></tr><tr><td>הידראזין הידראט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>225819</td><td></td></tr><tr><td>נתרן מטה-פריודאט</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>20504</td><td></td></tr><tr><td>איזופרופנול</td><td>Fisher Scientific</td><td>A416-4</td><td></td></tr><tr><td>פיברונקטין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td></td></tr><tr><td>קולגן</td><td>BD Biosciences</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>כיסויי זכוכית (#1.5)</td><td>Corning</td><td>2940&amp;#8208;224</td><td></td></tr><tr><td>גלוטראלדהיד</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>Rain-X</td><td>SOPUS Products</td><td>www.rainx.com</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אצטית</td><td>Acros Organics</td><td>64-19-7</td><td></td></tr></tbody></table>

הכנת מטריצות תלונה לכימות התכווצות נייד

Preparation of Complaint Matrices for Quantifying Cellular Contraction

הסדרת הידבקות הסלולר מטריקס תאית (ECM) חיונית נדידת תאים שיפוץ ECM. הידבקויות מרחק הם מכלולים macromolecular כי בני הזוג cytoskeleton כויץ F-אקטין ECM. חיבור זה מאפשר שידור של כוחות מכניים תאיים על פני קרום התא למצע הבסיסי. מחקר שנערך לאחרונה הוכיח את תכונות מכניות של ECM להסדיר הידבקות מוקד ו-F-אקטין מורפולוגיה, כמו גם תהליכים פיזיולוגיים רבים, כולל התמיינות תאים, חלוקה, הפצה והגירה. לפיכך, השימוש מצעים תרבית תאים הפכה שיטה נפוצה יותר ויותר בדיוק מלאה לווסת ECM תכונות מכניות. כדי לכמת את כוחות המתיחה על הידבקויות מוקד בתא חסיד, מצעים תואם משמשים בשילוב עם הדמיה ברזולוציה גבוהה וטכניקות חישוביות בתוך שיטה מיקרוסקופית המכונה כוח המתיחה (TFM). טכניקה זו מתבססת על מדידות של עוצמת הכיוון המקומית של דפורמציות המצע המושרה על ידי התכווצות הסלולר. בשילוב עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי ברזולוציה גבוהה של החלבונים המתויגים fluorescently, ניתן לתאם ארגון שיפוץ cytoskeletal עם כוחות המתיחה. כאן אנו מציגים את פרוטוקול הניסוי מפורט להכנת דו מימדי, מטריצות תואם לצורך יצירת מצע תרבית תאים עם קשיחות, מאופיין היטב מכני מתכונן, אשר מתאים למדידת התכווצות הסלולר. פרוטוקולים אלה כוללים ייצור של הידרוג polyacrylamide, ציפוי של חלבונים ECM על ג&#39;ל כזה, תאים ציפוי על ג&#39;לים, ברזולוציה גבוהה מיקרוסקופיה confocal באמצעות תא זלוף. בנוסף, אנו מספקים מדגם מייצג של נתונים הוכחת המיקום ואת העוצמה של הכוחות באמצעות הסלולר מצוטט בפרוטוקולים TFM.

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את ניסיוני בטכניקות בשימוש לפברק תואם, תאי המטריצה ​​(ECM) מצעים מצופה מתאים תרבית תאים, ואשר ניתנים במיקרוסקופ כוח המתיחה והתבוננות ההשפעות של קשיחות ECM על התנהגות התא.

הבקירה של היצמדות תאית למטריקה החוץ-תאית (ECM) חיונית עבור נדידת תאים ושקיעה מחדש של המטריקה החוץ-תאית. היצמדותים מוקדיים הם...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא ליצור מטריצות גמישות (compliant) לצורך ויסות וכימות של התכווצות תאית. דבר זה מושג תחילה על ידי הפעלת לכיסוי זכוכית (cover slip) כדי לאפשר עיגון של המטריצה. השלב השני של הפרוצדורה הוא פולימריזציה של ג'ל פוליאקרילאמיד אל לכיסוי הזכוכית המופעל.השלב השלישי של הפרוטוקול הוא זריעת התאים על הג'ל והמתנה להיצמדותם. השלב הסופי של הפרוטוקול הוא הדמיית הג'ל כדי להפיק נתונים שינותחו באמצעות פרוטוקולים של מיקרוסקופיית כוחות מתיחה (traction force microscopy). בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המראות תאים המפעילים כוחות מתיחה על המטריקס שלהם באמצעות מיקרוסקופיית כוחות מתיחה.שלום, אני איבון איונס מהמעבדה של מרגרט ELL במחלקה לפיזיקה ובמכון לדינמיקה ביופיזית באוניברסיטת שיקגו. אני סטיבן וינטר, גם אני ממעבדת Guard. היום נרצה להראות לכם פרוטוקול להכנת מטריצות גמישות למדידת התכווצות תאית.אנו משתמשים בפרוצדורות אלו במעבדה שלנו כדי לחקור רשתות של actin myosin מתכווצות. אז בואו נתחיל. לפני הפעלת לוחות כיסוי, הניחו מראש מספר לוחות כיסוי בגודל 22 על 40 מילימטר, מספר 1.5.שטפו ב-70% ethanol במעמד נירוסטה כך שכיסויי הזכוכית (cover slips) יהיו במרווחים זה מזה ולא ייגעו זה בזה. בעבודה תחת מנדף כימי, הכינו תמיסת 2% three or minor profile trimeth ב-isopropanol בתוך צלחת זכוכית מרובעת. השתמשו בפיפטת זכוכית מסוג pasta כדי להוסיף את ה-three or minoro profile.בשל תגובתיות לפלסטיק, טבול את לוחות הכיסוי באופן מלא בתמיסת Trimeth oxy והדגש אותם למשך 10 דקות תוך ערבוב על פלטת ערבוב במנדף. לאחר ההשריה, שטוף את לוחות הכיסוי על ידי טבילה במים מזוקקים פעמיים. החלף את המים ארבע פעמים; לאחר ההחלפה האחרונה, המצב מוכן.השרו את הזכוכית למשך 10 דקות תוך כדי ערבוב. לאחר מכן, ייבשו את לוחות הכיסוי באינקובטור בטמפרטורה של בערך 37 °C למשך 10 דקות. לאחר הייבוש, הניחו להם להגיע לטמפרטורת החדר.טבלו את לבישי הזכוכית (cover slips) בתמיסת Glutaraldehyde בריכוז 1% במים מזוקקים פעמיים. השתמשו בכלי זכוכית מרובע על גבי מעבנ שקיפה למשך 30 דקות. ודאו שאתם משתמשים בכלי נקי.אחרכך, התמיסה עלולה להיראות עכורה. שטפו את לוחות המכסה בשלושה סבבים של מים מזוקקים פעמיים למשך 10 דקות לכל סבב תוך כדי ערבוב. לאחר מכן, כסו את לוחות המכסה בנייר אלומיניום כדי למנוע הצטברות אבק והניחו להם להתייבש בטמפרטורת החדר.לאחר הייבוש, יש לאחסן את לביבות הכיסוי במקום יבש הרחק מאבק למשך עד חודשיים. להכנת ג'ל פוליאקרילאמיד או PAA, הכין תחילה תמיסות מלאי של Acrylamide bis. ערבב Acrylamide מ-40% acrylamide ו-2% bis acrylamide כפי שמתואר בפרוטוקול ה-RI.בצעו דגזציה (DGA) לתמיסת האקרילאמיד בתא ואקום למשך 20 דקות. פעולה זו מפחיתה את רמת החמצן בתוך הג'ל, דבר המונע פולימריזציה. במקביל, הכינו תמיסת 암מוניום פרסולפט (ammonium per sulfate) או תמיסת PS בריכוז 10%.לאחר מכן, נגבו זכוכיות מיקרוסקופ בגודל one by three inch בעזרת מגבונים של Rain X כדי להפוך את פני השטח של הזכוכית להידרופוביים. הסירו אבק בעזרת Kim wipe כדי להבטיח פני שטח חלקים לג'ל. כסו את הזכוכית בנייר אלומיניום והניחו בצד.לאחר מכן, הוצא את תמיסת האקרילאמיד מתא הוואקום והוסף חרוזי פלואורסצנציה. כדי להתחיל את פולימריזציית הג'ל, הוסף 0.75 µL של TM E ו-2.5 µL של 10%a PS. ערבב את התמיסה קצרות באמצעות שאיבה ודחיפה עם פיפט. לאחר מכן, העבר 10 עד 12 µL של תמיסת האקרילאמיד לזכוכית המיקרוסקופ ההידרופובית שהוכנה קודם לכן.הנח זכוכית כיסוי מופעלת בגודל 22 על 40 מילימטר מעל הטיפה. תמיסת הג'ל צריכה לצפות את כל זכוכית הכיסוי. החלק בועות שעלולות להופיע בתוך התמיסה.הניחו לתמיסת הג'ל להתפלמר בטמפרטורת החדר למשך כ-10 דקות. לאחר הפולימריזציה, הג'ל יסוג מקצות זכוכית הכיסוי. בעזרת קצה דק של פינצטה, הסירו בזהירות את זכוכית הכיסוי עם הג'ל הדבוק אליה ממשטח זכוכית המיקרוסקופ.טבלו את הג'ל בצלחת פטרי המכילה מים מזוקקים פעמיים כדי לשמור על פני שטח ג'ל הידרטי לצורך קישור צולב של חלבוני המטריצה החוץ-תאית (ECM) לג'ל. ראשית, הכינו מנות עבודה של 40 µL של sulfur san par על ידי המסה של אבקת SULF san par ב-dimethyl sulf oxide או DMSO אנहाइडרי. לאחר מכן, הסירו את המים המזוקקים פעמיים מפני השטח של הג'ל באמצעות שימוש קצר בספינר לכיסויי זכוכית (cover slip spinner).יש להקפיד שהג'ל לא יתייבש מיד לפני השימוש. יש לדלל את מנות ה-sulfur sampa DMSO במים מזוקקים פעמיים ולצפות את מרכז פני השטח של הג'ל בכ-200 microliters. לאחר מכן, יש לחשוף את פני השטח של הג'ל לאור UV בתנור UV crosslinker.לאחר החשיפה ל-UV, טבול את לביבות הכיסוי בב mengangkat עם מים מזוקקים פעמיים טריים. הסר כל תמיסה מפני השטח של הג'ל באמצעות מסובב לביבות כיסוי. לאחר מכן, הנח את ה-param במכל של צלחת פטרי והטף 50 µL של פיברונקטין קר על ה-param.הפוך את לוכסנית הכיסוי והנח את צד הג'ל מעל הפיברונכטין. הנח ללוכסניות הכיסוי להגיב בטמפרטורת החדר למשך שעה עד שעתיים, או ב-4 °C למשך הלילה. לאחר הדגירה, העבר את הדגימות למנדף סטרילי למטפלות רקמה.הניחו את לביות הזכוכית (cover slips) בתוך צלחות תרבית רקמה של שישה סנטימטרים המכילות PBS כדי לצפות את הלביות. שטפו את לביות הזכוכית ביסודיות באמצעות מספר החלפות של PBS תחת תנאים סטריליים לאחר השטיפה. סטריליזו את לביות הזכוכית באמצעות טיפול ב-UV למשך 30 דקות.לאחר מכן, דגרו את לוחות הכיסוי במצע תרבית תאים למשך 30 עד 45 דקות לפני זריעת התאים. בשלב הבא, מקמו לוח כיסוי בגודל 22 על 30 מילימטר על מחזיק לוח הכיסוי העליון של תא דימוי קונפוקאלי מבית Warner Instruments, תוך שימוש בגריז ואקום כדי לקבע את לוח הכיסוי במקומו. הניחו אטם גומי ליצירת תא על גבי לוח הכיסוי, כך שתהיה גישה הן לצינור הפוליאתילן של הכניסה והן לזה של היציאה.פעולה זו תאפשר מרווח של 150 עד 1000 מיקרון בין זכוכית הכיסוי העליונה לבין זכוכית כיסוי במידות 22 על 40 מילימטר מצופה ג'ל, בהתאם לגודל האטם שבו נעשה שימוש. לאחר מכן, טענו מזרקים המכילים מצע תרבית תאים חמים אל צינור הכניסה באמצעות ערכת המחברים, ובדקו כי מצע התרבית זורם דרך הצינור אל זכוכית הכיסוי העליונה. מרחו גריז ואקום על בסיס התא והכניסו זכוכית כיסוי במידות 22 על 40 מילימטר מצופה ג'ל, כאשר צד התאים פונה כלפי מעלה.יש להחיל את המצע החם על התאים. מקמו את מחזיק כיסוי הזכוכית העליון על בסיס התא, כאשר אטמי התא מפרידים בינו לבין כיסוי הזכוכית המצופה בג'ל. ודאו שפיני המיקום בבסיס התא יושבים בתוך חורי המיקום בכיסוי הזכוכית העליון.הנח את לוחית הלחץ על בסיס התא והשתמש במפתח ללוחית הלחץ כדי להבריג ולהדק את לוחית הלחץ. בדוק את זרימת המדיום דרך הפעריות והתא כדי לנטר דליפות פוטנציאליות בתוך התא, וכדי למנוע אזורים נטולי מדיום על פני השטח של התאים.הצמד את תא הדימוי הקונפוקאלי למתאם הבמה הממוקם בתוך מחזיק המיקרוסקופ כדי לדמות חלבון מסומן פלואורסצנטית וחרוזי פלואורסצנציה המוטמעים בתשתית הג'ל במיקרוסקופ פלואורסצנציה קונפוקאלי, וזאת כדי לקבל תמונה של מיקום החרוזים ללא מאמץ בתוך זרימת הג'ל. בצע שטיפות כדי להפריד הידבקותים תאיים מהג'ל ודמיין את חרוזי הפלואורסצנציה באותו שדה דימוי שבו נמצאים התאים. כאשר הפרוטוקול מבוצע נכון, פני השטח של הג'ל יהיו שטוחים וחלקים יחסית, עם חרוזי פלואורסצנציה המוטמעים באופן אחיד לכל אורכו.ניתן להדמיות את ה-ECM גם באמצעות אימונופלורסצנציה של פיברונקטין. אם נמדד התכווצות של הג'ל במיקום של היצמדותים מוקדיים (focal adhesions), יש לבצע את הדמיית הג'ל והתאים במישור האופטי הקונפוקלי של ההיצמדותים המוקדיים. כאן, היצמדותים מוקדיים מודמיינים בניסוי של כוח משיכה בתאי אוסטאוסרקומה אנושיים או תאי U2 OS המסומנים ב-GFP pxi.ניתן להדמיות את התכווצות הג'ל באמצעות תזוזה של חרוזי פלואורסצנציה מוטמעים מתחת להיצמדותים מוקדיים (focal adhesions). השוואה בין מיקומי חרוזים תחת מאמץ (בצבע ירוק) למיקומי חרוזים ללא מאמץ (בצבע אדום) מאפשרת כימות של תזוזת תשתית הג'ל תחת התכווצות; להלן תוצאה מייצגת של תא פרוס המנותק מפני השטח של הג'ל באמצעות טריפסין. להלן תוצאה מייצגת של השוואה בין מיקומי חרוזים תחת מאמץ למיקומי חרוזים ללא מאמץ.שימוש באלגוריתמים חישוביים מתוחכמים יכול להניב מאמצי מתיחה הקשורים להעתקת חרוצים ולמודול האלסטיות של הג'לים. מאמצים אלו מוצגים כאן באמצעות מפת צבעים (heat scale map) ווקטורים, כאשר הצבעים החמים יותר במפת הצבעים וחצים גדולים יותר מציינים כוחות חזקים יותר. הרגע הצגנו כיצד להכין מטריצות גמישות למדידת התכווצות תאית בעת ביצוע פרוצדורה זו.חשוב לתכנן מראש כדי שניתן יהיה לבצע את השלבים הרגישים לזמן במהירות. זהו כל הדבר. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

preparation-of-complaint-matrices-for-quantifying-cellular-contraction

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

אנו מתארים את שיטת האבטיפוס לייצור coverslips מיקרוסקופ פלואורסצנטי המצופה ג'לטין להמחשת הפחתת מטריצת invadopodia בתיווך. טכניקות חישוב באמצעות תוכנה זמינה מוצגות לכימות הרמות כתוצאה של proteolysis מטריצה ​​של תאים בודדים בתוך אוכלוסייה מעורבת וקבוצות תאיות המקיפות את השדות מיקרוסקופים שלמים.

מדידת כמותית של Proteolysis מטריקס invadopodia בתיווך בקשרים יחידים ורבים תאיים

סרטון וידאו זה מתאר את מדידת התכווצות תאי השריר החלק באבי העורקים (SMC) באמצעות חישת עכבה חשמלית של מצע התא, או ECIS. ECIS מודד את תנועת התאים והיא שיטה אמינה למדידת התכווצויות.

מדידת התכווצות SMC במבחנה: שיטה לא פולשנית להערכת התכווצות תאי שריר חלק באמצעות חישת עכבת מצע תא חשמלי

פרוטוקול זה מתאר את השימוש בזיזי סיליקון microscale כמשטחי תרבות גמישים למדידת ההתכווצות של תאי שריר במבחנה. התכווצות סלולרית גורמת לכיפוף שלוחה, הניתן למדידה, נרשם, והוסב לקריאות כוח, מתן מערכת לא פולשנית וניתן להרחבה למדידת תפקוד התכווצות במבחנה.

ניצול של זיזי סיליקון המיקרוסקופים כדי להעריך את התפקוד נייד התכווצות במבחנה

כאן, אנו מתארים את הפיתוח והיישום של בדיקת התכווצות ג'ל להערכת תפקוד התכווצות בתאים מזנכימליים שעברו מעבר אפיתל-מזנכימלי.

פיתוח של<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay לאבחון תפקוד התכווצות של תאי mesenchymal שעבר אפיתל-mesenchymal מעבר

התמיינות תאים מוסדרת על ידי שורה של גורמי microenvironmental, כוללים שני תכונות חומר רכב מצע מטריקס. אנו מתארים כאן טכניקת ניצול microarrays תא בשיתוף עם מיקרוסקופ כוח המתיחה להעריך הן התמיינות תאי אינטראקציות תא-מצע ביומכנית כפונקציה של הקשר microenvironmental.

פלטפורמת Microarray Cell תפוקה גבוהה עבור ניתוח גומל של התמיינות תאי כוחות המתיחה

כוחות מכניים חשובים לשליטה בהעברת תאים. פרוטוקול זה מדגים את השימוש של הידרוג'לים אלסטיים שיכולים להיות מעוותים באמצעות מיקרופיפטה זכוכית מיקרומניפולציה כדי לגרות תאים עם מעבר קשיות מקומי כדי לעורר שינויים במבנה התא והגירה.

מערכת בודדת של תא להערכת בקרה מכנית של התנועה הסלולרית ואירועי איתות קשורים

אנו מציגים פרוטוקול להערכת ההשפעות האלקטרו-מאלקטרומכניים של הפעלת GtACR1 בקרדיוציטים בארנבים. אנו מספקים מידע מפורט על בידוד התא, culturing ו אדנונגיפי התמרה, ועל ניסויים פונקציונליים עם מלחציים טלאי וסיבי פחמן.

הערכה אלקטרו-מגנטית של אלקטרואופטיקה פעילות מודולציט

מאמר זה מתאר שיטה מבוססת תרבית אקספלנט לבידוד וגידול של תאי שריר חלקים ראשוניים של אבי העורקים האנושיים הספציפיים לחולה ופיברובלסטים עוריים. יתר על כן, מוצגת שיטה חדשנית למדידת התכווצות תאים וניתוח לאחר מכן, אשר ניתן להשתמש בה כדי לחקור הבדלים ספציפיים לחולה בתאים אלה.

בידוד של תאי שריר חלק אבי העורקים העיקריים הספציפיים למטופל ומדידות כיווץ חצי-קוונטיטיביות בזמן אמת במבחנה

עבודה זו מציגה פרוטוקול גמיש לשימוש בטכנולוגיית משטחים אלסטומריים (FLECS) בעלי תווית פלואורסצנטית בפורמט מיקרווול לכימות פשוט יותר של כוחות התכווצות של תאים חד-תאיים המבוססים על תזוזות חזותיות של מיקרופטרנים של חלבון פלואורסצנטי.

ניתוח פשוט בעל תפוקה גבוהה של התכווצות של תאים חד-תאיים באמצעות אלסטומרים מיקרו-מרופדים

ניתוח השינויים בתפקוד ההתכווצות ובשלמות התאים של קרדיומיוציטים שמקורם ב- iPSC אנושי הוא בעל חשיבות עצומה לפיתוח תרופות לא קליניות. מערכת היברידית של 96 תאים מטפלת בשני הפרמטרים בזמן אמת ובאופן פיזיולוגי לקבלת תוצאות אמינות ורלוונטיות לבני אדם, הנחוצות למעבר בטוח לשלבים קליניים.

מערכת ניתוח תאים היברידית להערכת שינויים מבניים והתכווצות של קרדיומיוציטים שמקורם ב- iPSC אנושי להערכת סיכון לבבי פרה-קליני

פרוטוקול זה מתאר כיצד למדוד התכווצות בקרדיומיוציטים ראשוניים אנושיים בוגרים מלבבות תורמים באמצעות מערכת MyoBLAZER, פלטפורמה אמינה להערכת שינויים בהתכווצות הנגרמת על ידי תרופות במהלך הפיתוח הפרה-קליני.

מדידת התכווצות הלב בקרדיומיוציטים ראשוניים אנושיים בוגרים מבודדים

למדו להכין מטריצות תלומה מצופות במטריצה חוץ-תאית לכימות התכווצות תאים באמצעות מיקרוסקופיית כוחות משיכה. שיטה זו מאפשרת חקר השפעת קשיחות המטריצה על התנהגות התאים.

הכנת מטריצות תלונה לכימות התכווצות נייד

גלה סרטונים נוספים