Name: הפקה של חילוץ העובר ציק לגידול Murine בתאי גזע עצביים קרסט (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-27T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 12 s
Description: למדו את שיטת הכנת תמצית עוברי עוף מעוברים בני 11 ימים לגידול תאי גזע עצביים קרסט. הפרוטוקול כולל בידוד, ריסוק, סרכוז וסינון להשגת תמצית איכותית לחקר עצבים ותאי גזע.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

התמיכה והייעוץ של מרקוס Pajtler ורוברט Bohrer היו שלא יסולא בפז עבור להדמיה של פרוטוקול זה.

המדינה המחברים כי ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם הקהילות האירופיות Council Directive (86/609/EEC), בעקבות הנחיות של NIH לגבי טיפול השימוש בבעלי חיים הפרוצדורות והתקנות שנקבעו על ידי בעלי חיים המוסדי טיפול השתמש הוועדה (IACUC) באוניברסיטת דואיסבורג-אסן (גרמניה). חלק 1: הגדרת (לא מוצג על וידאו) והכנת חומר ופתרונות (לפני נטילת הביצים מן האינקובטור) <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הביצים צריכים להיות מודגרות בתוך חממה humidified 11 ימים ב 37 ° C (100 ° F). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרסיס אתנול 70%, צלחות נקיות, מלקחיים נקי ומדויק, 4 ° C (40 ° F) קר סטרילי DMEM על קרח 60 מ&quot;ל מזרקים סטריליים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 מ&quot;ל צינורות סטרילי קורנינג צריך להיות חצי מלא 4 ° C קר DMEM לערבב את העוברים macerated ביחס של 1:1 (מסה macerated: DMEM). ברגע ביצים נלקחים מתוך לנתיחה בחממה של עוברי אפרוח צריך להיות נכתבו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר כלי לנתיחה ב החיטוי או ביום לנתיחה, לטבול את הכלים באתנול 70% במשך 20 דקות. </li></ul> חלק 2: Dissection של עוברים צ&#39;יק (הפגינו וידאו) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרטיב את הביצים מודגרות עם תרסיס אתנול 70% לפחות במשך 30 שניות ויבש אותם בקפידה נקי עם מגבות נייר רך ואילו לא רועדות הביצים מוגזם. הערה: אנו ממליצים שלא לנתח יותר מ -60 עוברי אפרוח בו זמנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את הביצים בקפידה על ידי נמרץ כנגד הקצה חדה ולהוציא את העובר בזהירות לא להרוס את שק חלמון או עובר אפרוח עצמו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיפוש בתחילת חבל הטבור במהירות לפתוח את העטיפה ברור מבלי להרוס את שק חלמון או כל כלי קטן. ואז לנתח את חבל הטבור עם מלקחיים נקי ומדויק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קחו את העובר מתוך שק החלמון. הערה: עוברים צריך להיות ערופה במהירות (לא רואים בסרט). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את העוברים בתווך חיוני מינימלי ב 4 ° C. </li></ol> חלק 3: מסמוס של עוברים צ&#39;יק <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את הבוכנה מתוך מזרק סטרילי 60 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת כ -10 עוברי לתוך מזרק 60 מ&quot;ל one. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכניסים את הבוכנה חזרה לתוך המזרק בזהירות, כדי לא להסתכן באובדן החומר macerated. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מרוכך על ידי לחיצה על הבוכנה כלפי מטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף המוני של צינורות macerated מוכן קורנינג חצי מלא DMEM ביחס של 1:1 (מסה macerated: DMEM). באמצעות 10 עוברי נפח של כ 25 מ&quot;ל מיוצר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את התערובת על שייקר 45 דקות ב 4 ° C. </li></ol> חלק 4: צנטריפוגה של העובר צ&#39;יק - השעיה DMEM <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת העובר חומוס - השעיה DMEM לתוך צינורות צנטריפוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף hyaluronidase סטרילית בריכוז של 1 מ&quot;ג ל 25 מ&quot;ג של העובר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרה צנטריפוגה צינורות מאוד דווקא. הערה: שלב זה צריך להתבצע בזהירות כמו צנטריפוגה היא לרוץ לעבר הכוח גרם נזק גבוהה מאוד של חומר או צנטריפוגה יכול להתרחש אם באמצעות צינורות מאוזן. עם דיוק גבוהה במשקל בהתאם מכונת לגבי שלוש עמדות לאחר הנקודה העשרונית עבור צינורות כל צריך להתקבל על ידי התאמת הסכום החסר עם DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים את הטמפרטורה של צנטריפוגות עד 4 ° C. הערה: גם הרוטור צנטריפוגה יש לאחסן בתא הקירור או במקרר למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה 6 שעות לפחות 180.000 xgx ח הערה: לקבלת תוצאות משופרות לגבי ההפרדה בין שלבי יחיד להשתמש 266.000 xgx ח במידת האפשר, להשתמש התאמת ואקום. </li></ol> חלק 5: סינון של חלץ את העובר צ&#39;יק לאחר צנטריפוגה, שלושה שלבים יכול להיות לב: השלב העליון נוזל מלוכלך עם שברי שומן, השלב נוזל שקוף באמצע ואת גלולה בתחתית הצינור צנטריפוגה. הערה: טלטול או העברה מהירה של התערובת centrifuged יש להימנע לחלוטין, כמו זה יהרוס את התוצאה של השלב על ידי צנטריפוגה לאבד את השלב ברור נוזלי המרכזית. הערה: כל השלבים הבאים חייב להתבצע בתנאים סטריליים באמצעות זרימת אוויר למינרית ספסל: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה השלב נוזל שקוף לתוך מערכת סינון עם נקבוביות של 0.45 מיקרומטר. ואז לעבור על משאבת ואקום מחוברת. הערה: אל תיגע גלולה בתחתית. זה יוביל לזיהום של תמצית לבין חסימה של מערכת הסינון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת לחלץ מראש לתוך מערכת סינון עם נקבוביות של 0.22 מיקרומטר ולעבור על משאבת ואקום מחוברת שוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aliquot העובר הגיע לחלץ חומוסב סטרילי 15 צינורות מ&quot;ל קורנינג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מהר לחנות aliquots ב -80 ° C (-62 ° F). הערה: CEE להימשך עד שנתיים אם המאוחסן ב -80 ° C. </li></ol>

<ol><li>Bronner-Fraser, M., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+analysis+reveals+multipotency+of+some+avian+neural+crest+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cell lineage analysis reveals multipotency of some avian neural crest cells.</a> Nature. 335, 161-164 (1988).</li>
<li>Stemple, D. L., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+stem+cell+for+neurons+and+glia+from+the+mammalian+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Isolation of a stem cell for neurons and glia from the mammalian neural crest.</a> Cell. 71, 973-985 (1992).</li>
<li>Rao, M. S., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immortalization+and+controlled+in+vitro+differentiation+of+murine+multipotent+neural+crest+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Immortalization and controlled in vitro differentiation of murine multipotent neural crest stem cells.</a> J Neurobiol. 32, 722-746 (1997).</li>
<li>Paratore, C., Goerich, D. E., Suter, U., Wegner, M., Sommer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+and+glial+fate+acquisition+of+neural+crest+cells+are+regulated+by+an+interplay+between+the+transcription+factor+Sox10+and+extrinsic+combinatorial+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Survival and glial fate acquisition of neural crest cells are regulated by an interplay between the transcription factor Sox10 and extrinsic combinatorial signaling.</a> Cell. 128, 3949-3961 (2001).</li>
<li>Kim, J., Lo, L., Dormand, E., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SOX10+maintains+multipotency+and+inhibits+neuronal+differentiation+of+neural+crest+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">SOX10 maintains multipotency and inhibits neuronal differentiation of neural crest stem cells.</a> Neuron. 38, 17-31 (2003).</li>
<li>Anderson, D. J., Groves, A., Lo, L., Ma, Q., Rao, M., Shah, N. M., Sommer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+determination+and+the+control+of+neuronal+identity+in+the+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Review+Cold+Spring+Harb+Symp+Quant+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell lineage determination and the control of neuronal identity in the neural crest.</a> Review Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 62, 493-504 (1997).</li>
<li>Dorsky, R. I., Moon, R. T., Raible, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+signals+and+cell+fate+specification+in+premigratory+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Review+Bioessays%22%5BJournal%5D)">Environmental signals and cell fate specification in premigratory neural crest.</a> Review Bioessays. 22, 708-716 (2000).</li>
<li>Sieber-Blum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+controlling+lineage+specification+in+the+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Factors controlling lineage specification in the neural crest.</a> Int Rev Cytol. 197, 1-33 (2000).</li>
<li>Dupin, E., Real, C., Ledouarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neural+crest+stem+cells%3A+control+of+neural+crest+cell+fate+and+plasticity+by+endothelin-3%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">The neural crest stem cells: control of neural crest cell fate and plasticity by endothelin-3.</a> Int Rev Cytol. 73, 533-545 (2001).</li>
<li>Maurer, J., Fuchs, S., Jäger, R., Kurz, B., Sommer, L., Schorle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+controlled+differentiation+of+neural+crest+stem+cell+lines+using+conditional+transgenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Establishment and controlled differentiation of neural crest stem cell lines using conditional transgenesis.</a> Differentiation. 75, 890-891 (2007).</li>
<li>Wu, Y. Y., Mujtaba, T., Rao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+stem+and+precursor+cells+from+fetal+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of stem and precursor cells from fetal tissue.</a> Methods Mol Biol. 198, 29-40 (2002).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

פרוטוקול זה מבוסס על שינויים של נהלים אשר תוארו 10,11 האחרונות. בנוסף לפרסומים לשעבר אנחנו כאן להראות את השלבים השונים של תהליך אישי מורחב יותר. זו תומכת הנסיין עם פרטים חשובים להבטחת ההליכים הנכונים תוצאות אמינות. יתר על כן, כאשר תהליך הניתוח הוא חלק חיוני להפקת CEE אנו מתארים את התהליך של נטילת עוברים מתוך שק החלמון בכל פרט. ישנן מספר נקודות חשובות לציין כמפורט להלן. דיסקציה של עוברי אפרוח יש להתחיל ...

<table><tbody><tr><td>ביצי עוף שדגרו במשך 11 ימים</td><td>Sorries-Trockels Vermehrungszucht GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ספריי חיטוי אלכוהולי</td><td>Sch&amp;#252;lke Mayr GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEMGlutamax</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מזרק סטרילי (60 ml)</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מבחנות סטריליות (50; 15 ml)</td><td>Greiner Bio-One</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טיפים סטריליים לפיפט</td><td>Starlab GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase typeIV-S</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מסנני Milipore stericups סטריליים (0.45; 0.22 &amp;mu;l)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פיפטות סטריליות (25; 10; 5 ml)</td><td>Greiner Bio-One</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה L5-50</td><td>רוטור מסוג Ti-45</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

הפקה של חילוץ העובר צ&#39;יק לגידול murine בתאי גזע עצביים קרסט

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

הרכס העצבי נובעת האאקטודרם נוירו במהלך embryogenesis ואת נמשכת רק באופן זמני. ניסויים מוקדמים כבר proofed ובתאים pluripotent להיות חלק אינטגרלי של הרכס העצבי 1. Phenotypically, בתאי גזע עצביים לפסגה (NCSC) מוגדרים בו זמנית על ידי הבעת p75 (נמוך המאוחד גורם גדילה עצבי קולטן, LNGFR) ו SOX10 במהלך הנדידה שלהם מן הרכס העצבי 2,3,4,5. אלה ובתאים יכולים להתמיין לתאי שריר חלק, chromaffin התאים, נוירונים ותאי גלייה, כמו גם מלנוציטים, סחוס ועצם 6,7,8,9. כדי לטפח NCSC במבחנה, גזע מיוחד הרכס העצבי בינוני תא (NCSCM) נדרש 10. החלק המורכב ביותר של NCSCM היא הכנת תמצית חומוס העובר (CEE) המייצג מקור חיוני של גורמי גדילה עבור NCSC כמו גם עבור סוגים אחרים של explants עצביים. מרכיבים אחרים NCSCM ליד CEE זמינים מסחרית. הפקת CCE באמצעות ציוד מעבדה סטנדרטי יש חשיבות גבוהה לדעת את הפרטים מאתגר כמו בידוד, מסמוס, צנטריפוגה, תהליכי סינון. בפרוטוקול זה אנו מתארים טכניקות מדויקות כדי לייצר כמות מוגדל של איכות CEE טהור גבוהה.

כדי לטפח גזע עצביים לפסגה תאים (NCSC) במבחנה, בינוני מיוחד (NCSCM) נדרשת. חלק חיוני של NCSCM הוא עובר אפרוח לחלץ (CEE). כאן אנו מתארים טכניקות מדויקות כדי לייצר כמות מוגדל של איכות CEE טהור גבוהה, כולל פרטים כמו בידוד, מסמוס, צנטריפוגה, תהליכי סינון.

הפקה של חילוץ העובר צ&#39;יק לגידול Murine בתאי גזע עצביים קרסט

הרב רב-עצבי (neural crest) נוצר מהנוירו-אקטודרם במהלך העוברגנזה וקיים רק באופן זמני. ניסויים מוקדמים כבר הוכיחו פלוריפוטנטיות...

שלום, שמי אנה מהמעבדה של פרופסור איקה אגר במחלקה לאונקולוגיה פדיאטרית בבית החולים לילדים של האוניברסיטה, אסן, גרמניה. היום נראה לכם הליך להכנת תמציות מעוברים של אפרוחים בביתם ביום ה-11 להריון. הניחו DMEM על קרח כדי לקרר אותו לטמפרטורה של לפחות ארבע מעלות צלזיוס.אנו משתמשים ב-DMEM glutamate מבית GIB co, שהומנה בתוך מבחנות סטריליות שמולאו עד מחציתן. בעזרת ה-MEM, שטפו את הביצים ב-70%E ethanol תוך שימוש ב-X שעברו אינקובציה במשך 11 ימים ב-100 degree Fahrenheit באינקובטור עם לחות. ודאו שה-ethanol נספג למשך 30 שניות לפחות.לאחר היישום, ייבשו בזהירות את הביצים בעזרת נייר סופג רך. נקו צלחת פלסטיק או זכוכית באמצעות אתנול. פתחו את הביצים.הניחו את העובר בזהירות בתוך הצלחת. הימנעו מהרס ה-EC או של כלי דם קטנים כלשהם. השתמשו בסטים של סיכות דיוק נקיות וחדות כדי להוציא את העוברים בדיסקציה.ראשית, חפש את השכרת (umbilical cord). שוב. אין להרוס את השקיק או כלי דם קטנים בעת החיפוש אחר השכרת. ברגע שמצאת את השכרת, עקוב אחריה אל תחילתה ובצע דיסקציה.לאחר פתיחת העטיפה השקופה שמעל העובר, הוצא בזהירות את העובר מה-EC מבלי להשמידו. העבר את העוברים לתווך מינימלי חיוני (minimal essential medium) סטרילי על קרח. אנו משתמשים ב-DMEM glutamate מבית gyp Co. הוצא את הבוכנה ממזרק סטרילי בנפח 60 מ"ל.העבירו כ-10 עוברים בכל פעם אל תוך ה-siren. הכניסו את הבוכנה אל ה-siren. בשילו את העוברים על ידי לחיצה על הבוכנה כלפי מטה.היזהרו שלא להפעיל לחץ רב מדי, אחרת תאבדו חומר שהבשיל. אספו את העוברים שהבשילו למבחנות שהוכנו ביחס של עובר אחד ל-MEM 10 embryos. התוצאה צריכה להיות נפח של כ-25 milliliters.נער את תערובת העוברים עם EMEM ביחס של אחד לאחד למשך 45 דקות בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס. העבר בזהירות את התערובת לתוך מבחנות הצנטריפוגה. הוסף את ה-hyaluronidase.אנו משתמשים ב-R Hay days מתוך Boin testis מבית sigma. שקלו את מבחנות הצנטריפוגה באמצעות מכשיר שקילה בעל דיוק AC מיוחד. חשוב מאוד להקפיד על שלוש ספרות לאחר הנקודה העשרונית.עליהם להיות שווים. אחרת, אתם מסתכנים בבעיות עם הצנטריפוגה בשל המהירות הגבוהה הדרושה לצנטריפוגציה של התערובת. במידת הצורך, תקנו אי-שוויון על ידי פיפטור של הכמות החסרה של ה-MEM. הרוטור היה צריך להיות בתוך מקרר או בתא קירור למשך הלילה כדי לצנן אותו ל-4 °C.יש לסגור את מבחנות הצנטריפוגה באופן הדוק מאוד. אחרת, קיים סיכון שייווצרו קשיים בהוצאתן מהרוטור. לאחר הצנטריפוגה, מלאו את הרוטור במבחנות וסגרו אותו היטב מראש.קררו את הצנטריפוגה ל-4°C. השתמשו בוואקום בכל מקרה. המתינו עד שהרוטור יגיע למהירותו הסופית.אם קורה דבר חריג, עליכם להפסיק מיד את פעולת הצנטריפוגה. לחצו על כפתור הבלם כדי לעצור את הסבב. זאת לאחר שרוטור TI I 45 פעל במשך שש שעות במהירות של 45,000 סיבובים לדקה.הוציאו בזהירות את המבחנות. אין לנער אותן כלל, שכן הדבר עלול לגרום להגדלת שכבת הנוזל העכור העליונה בתוך המבחנות. שימו לב לשלושת השלבים.בחלק העליון קיים נוזל עכור עם חלקיקים שומניים. במרכז קיים נוזל צלול, ובתחתית ניתן לראות את המשקע. יש להיזהר מאוד בעת שאיבת הפאזה הצלולה מחלקו המרכזי של המבחנה.אין לגעת במשקע כלל, שכן הדבר יוביל לזיהום של התמצית וכן לסתימה של מערכת הסינון. ראשית, השתמשו במסנן של 0.45 micrometer המחובר למשאבת ואקום. בשלב השני, סננו את הנוזל שהתקבל דרך מסנן של 0.22 micrometer, המחובר אף הוא למשאבת ואקום, אל תוך מבחנות התמצית.לבסוף, יש לאחסן את המבחנות בטמפרטורה של 80- מעלות צלזיוס.

production-chick-embryo-extract-for-cultivation-murine-neural-crest

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

וידאו זה מתאר את שיטת לבידוד של neuroprecursors מהקורטקס המתפתח של עכברים עובריים. ההליך להסרת עוברים מן הרחם, לנתח את רקמת קליפת המוח, ולעכל את קליפת המוח מבודד מוצג.

תרבות עצבית עכבר מקדימים לתאי גזע

אינדוקציה עצבית היא הצעד הראשון ביצירת המוח. זהו המנגנון שבאמצעותו הצומת של Hensen (מארגן), מורה רקמות סמוכות לאמץ גורל עצביים, כלומר להצמיח מערכת העצבים. וידאו זה מדגים assay לזירוז העצבית בעובר האפרוח.

Assay עבור אינדוקציה עצבית בעובר צ&#39;יק

הבידוד של הרכס העצבי העובר מן הצינור העצבי מאפשרת את...

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

סרטון זה מדגים שיטה ליצירת תאי אב עצביים (NPCs) במבחנה מתאי גזע עובריים של עכברים (mESCs). mESCs מתורבתים בתרחיף ליצירת גופים עובריים (EBs), אשר מונחים לאחר מכן להתמיין NPCs באמצעות טיפול בחומצה רטינואית בתרבית דבקה.

טכניקה ליצירת תאי אב עצביים מתאי גזע עובריים של עכברים

סרטון זה מדגים טכניקה לבידוד קפלים עצביים גולגולתיים מאזור המוח התיכון של עוברי אפרוחים. הוא מציג תהליך דיסקציה מפורט של הקפלים העצביים, מיקומם וחיבורם על כיסויים מצופים פיברונקטין ואחריו תצפית על נדידת תאי הפסגה העצבית מהקפלים העצביים.

בידוד קפלים עצביים גולגולתיים מעובר אפרוח לצורך תרבית תאי קרסט עצבית

פרוטוקול זה מתאר בפירוט את השיטה ליצירת אבות עצביים מתאי גזע עובריים בשיטה חד-שכבתית נטולת סרום. ניתן להשתמש באבות אלה כדי לגזור סוגי תאים עצביים בוגרים או לחקור את תהליך המפרט העצבי והם ניתנים לקנה מידה של פורמט מרובה בארות עבור סינון מורכב.

בידול עצבי של תאי עכבר גזע עובריים בסרום ללא חד שכבתי תרבות

מעבר אפיתל למזנכימלי (EMT) מאפשר לסרטן להפוך לפולשני. כדי לחקור EMT, מתואר מודל מבחנה מבוסס תאי גזע עצביים (NSC) נטול סרום ואנזימים. מערכת סטנדרטית זו מאפשרת הערכה כמותית ואיכותית של נדידת תאים, ביטוי גנים וחלבונים. המודל מתאים לגילוי תרופות.

Enzyme- ואת הסרום ללא דגם תרבית תאי גזע עצבי לחקירות EMT המתאימים גילוי תרופות

מאמר זה מתאר פרוטוקול ביעילות להפיק, תרבות pluripotent שורות תאי גזע מעוברים עכבר בשלב הבלסטוציסט.

נגזרת של שורות תאי גזע מעוברים של עכבר

כאן, אנחנו מציגים בטכניקה המיקרוכירורגית הרומן על בידודו של תאי גזע עצביים מ E13 העכבר עובר ganglionic קדושתו.

בידוד והתרבות של תאי גזע עצביים עובריים בעכבר

פרוטוקול זה מתאר את הניתוח והתרבות של תאי ציצה עצביים הגולגולת מדגמי העכבר, בעיקר למחקר של הגירה תא. אנו מתארים את טכניקות ההדמיה החי בשימוש וניתוח של מהירות וצורה תא שינויים.

חיתוך, תרבות וניתוח של הגולגולת הראשי ציצה עצביים תאים מעכבר לחקר של ציצה של תא העצבים העצבי והגירה

פרוטוקול רב-תכליתי זה מתאר את הבידוד של תאי פסגה עצבית קדם-מיגרטיבית (NCCs) באמצעות כריתה של קפלים עצביים גולגולתיים מעוברי אפרוחים. עם הציפוי והדגירה, NCCs נודדים מגיחים מתוך קצוות עצביים, מה שמאפשר הערכה של מורפולוגיה של תאים ונדידה בסביבה דו-ממדית פשוטה.

הכנה וניתוח מורפולוגי של תרביות תאי צמרת עצביים גולגולתיים של אפרוחים

למדו את שיטת הכנת תמצית עוברי עוף מעוברים בני 11 ימים לגידול תאי גזע עצביים קרסט. הפרוטוקול כולל בידוד, ריסוק, סרכוז וסינון להשגת תמצית איכותית לחקר עצבים ותאי גזע.

הפקה של חילוץ העובר צ'יק לגידול Murine בתאי גזע עצביים קרסט

גלה סרטונים נוספים