הערכת התקשרות פנאומוקוקית לתאי אנדותל אנושיים ראשוניים תחת זרימת מדיה קבועה

הנח שקופית תעלה מצופה ג'לטין, המחוברת למשאבה מיקרופלואידית, על במת מיקרוסקופ.

השקופית מכילה תאי אנדותל אנושיים ראשוניים שגודלו תחת מדיה זורמת, עם מחרוזות של פקטור פון וילברנד או VWF, גליקופרוטאין, על פני התא.

מיתרים אלה נוצרים על ידי גירוי התאים בהיסטמין.

זרימת מדיה מבוקרת, המיושמת דרך המשאבה המיקרופלואידית, מקדמת הפרשת VWF ושחרורו. פעולה זו חושפת תחומי איגוד ספציפיים במחרוזות VWF.

עצור את זרימת המדיה, הוסף נוגדן ירוק מצומד פלואורופור ספציפי ל-VWF, והמשך את הזרימה כדי לתייג את המחרוזות עם הנוגדן.

השהה את זרימת המדיה והכנס חיידקי פנאומוקוק אדומים המבטאים חלבון פלואורסצנטי.

הפעל מחדש את הזרימה כדי להפיץ את החיידקים, מה שמאפשר היצמדות לתחומים החשופים באמצעות הידבקויות פני השטח.

באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית, דמיין קשירת חיידקים בזמן אמת למיתרים.

עצור את זרימת המדיה ורכוש תמונות Z-stack כדי לכמת את ההתקשרות של חיידקים לתאי האנדותל.

להדמיה מיקרוסקופית, הנח את היחידה הנוזלית בתא החימום של 37 מעלות צלזיוס. הנח את שקופית הערוץ על הבמה של מיקרוסקופ שחומם מראש.

לשלוט במורפולוגיה של התא ובשלמות שכבת ה-HUVEC לפני הזרקת היסטמין וחיידקים למחזור הזרימה. שמור על הגדרת הזרימה. לגרום לשחרור VWF מגופי פאלאדה ברי קיימא אנדותל על ידי הזרקת 136 מיקרוליטר של תמיסת מלאי היסטמין של 100 מילי-מולרית דרך פתח הזרקה ל