השגת עמילואידים ציטוטוקסיים בעקבות זיהום חיידקי של תאי אנדותל ריאתיים של חולדות
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:14 דק׳ • September 26th, 2025
קח שכבה חד-שכבתית של תאי אנדותל ריאתיים של חולדות.
שוטפים את התאים עם מאגר. הוסף השעיה של Pseudomonas aeruginosa ודגירה.
במהלך הדגירה, החיידקים יוצרים קשר עם התאים ומזריקים חלבוני אפקטור לציטופלזמה.
חלבוני אפקטור אלה גורמים לפירוק מיקרו-צינורות ולשיבוש בתא השלד
השיבוש הציטו-שלד מפעיל תגובות מתח תאיות, מה שמוביל להיווצרות אגרגטים של חלבונים ציטוטוקסיים-אוליגומרים עמילואידים.
חלבוני האפקטור יוצרים גם נקבוביות בקרום התא, ומאפשרים שחרור אוליגומר עמילואיד לחלל החוץ-תאי.
בנוסף, השיבוש הציטו-שלד משנה את המורפולוגיה התאית, ויוצר פערים בין-תאיים בחד-שכבת האנדותל.
לאחר מכן, התבונן בשכבה החד-שכבתית תחת מיקרוסקופ אור. לאחר שהפערים הבין-תאיים מתגלים, יש לסיים את הדגירה.
לאחר מכן, אספו את הסופרנטנט המכיל עמילואידים ציטוטוקסיים, וצנטריפוגה כדי לזרוק את הפסולת.
אסוף את הסופרנטנט וסנן אותו כדי להסיר את כל החיידקים שנותרו.
הסופרנטנט שנקטף המכיל עמילואידים ציטוטוקסיים מוכן לניתוח נוסף.
כדי לייצר סופרנטנט ציטוטוקסי, שטפו צלחת של 150 סנטימטר של תאי אנדותל עם HBSS, ודללו מושבת P. aeruginosa לספיגה של 0.25 ב-540 ננומטר. לדלל עוד יותר את תאי החיידקים כדי לאפשר ריבוי זיהומים של 20 עד 1 ל-20 מיליליטר של HBSS ולזרוע את החיידקים על צלחת תאי האנדותל. לאחר מכן הניחו את התאים הנגועים באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים