מעקב אחר דינמיקת זיהום חיידקי בעכבר באמצעות ביולומינסנציה

התחל בהשעיה של זן מוחלש של חיידק פתוגני.

הזן המוחלש מציג פתוגניות מופחתת עקב מחיקות ממוקדות בגנים אלימים.

החיידקים מסומנים כרומוזומלית עם אופרון ביולומינסנט המאפשר ייצור אור אוטונומי.

החיידקים מבטאים את האופרון הביולוגי, ומייצרים אנזים לוציפראז וקומפלקס אנזימים המסנתז את סובסטרט הלוציפראז.

לוציפראז מחמצן את המצע כדי לייצר אור נראה.

צנטריפוגה את המתלים והשליכו את הסופרנטנט.

שטפו את התאים עם מאגר, צנטריפוגה שוב והשליכו את הסופרנטנט כדי להסיר שאריות של רכיבים לא תאיים.

השעו מחדש את התאים במאגר כדי להשיג ריכוז חיידקים אופטימלי ולמשוך את התרחיף למזרק.

הזרקו את המתלה תוך צפקי לעכבר, ואז העבירו אותו לכלוב.

דמיין את האות הביו-לומינסנט במרווחי זמן קבועים.

הזן המוחלש נשאר מקומי, והביולומינסנציה פוחתת בהדרגה, מה שמעיד על פינוי זיהום.

בבוקר הזריקות, יש להפשיר את הקריוביאלים של תאי חיידקים בארבע מעלות צלזיוס למשך שלוש עד ארבע שעות. שמור את הבקבוקונים על קרח לאחר ההפשרה והזריק לעכברים תוך שעתיים. העבירו את תכולת כל קריוביאל לצינור חדש של שני מיליליטר וצנטריפוגה בטמפרטורה של 4,500 פעמים G למשך 10 דקות.

השליכו את הסופרנטנט ותלו מחדש את כדור התא במיליליטר אחד של PBS. חזור על הצנטריפוגה והשהה מחדש את התאים ב-PBS לריכוז סופי של 2.5 כפול 10 ליחידות היוצרות מושבה תשיעית למיליליטר. קח שלוש דגימות מהתרחיף הסופי של כ