כימות אלגינט חיידקי באמצעות בדיקת קרבזול חומצה אורונית

קח תרבית של החיידק Pseudomonas aeruginosa במרק.

צלחת את התרבית על אגר בידוד ודגירה כדי לקדם צמיחת חיידקים וייצור אלגינט, אקסופוליסכריד המורכב מחומצות אורוניות.

הוסף תמיסת מלח איזוטונית לדשא החיידקים וגרד כדי לאסוף את תאי החיידקים יחד עם אלגינט.

העבירו את התרחיף לתוך צינור, מערבולת כדי לפזר את התוכן והניחו אותו על קרח כדי למנוע פירוק אנזימטי.

מדוד את הצפיפות האופטית, או OD, כדי לקבוע את צפיפות החיידקים.

מוסיפים את תרחיף החיידקים לתמיסת החומצה-בוראט ומערבבים להידרוליזה של אלגינט למונומרים של חומצה אורונית.

מוסיפים קרבזול, מגיב כרומוגני, ומדגרים. בתנאים חומציים, המגיב מגיב עם חומצות אורוניות ליצירת קומפלקסים צבעוניים.

מדוד את הספיגה כדי לכמת את רמות החומצה האורונית, המשקפות את ריכוז האלגינט.

בעזרת עקומה סטנדרטית, קבע את ריכוז האלגינט, ולאחר מכן חלק אותו בצפיפות תאי החיידקים הנמדדת כדי לחשב את ייצור האלגינט ליחידת ביומסה.

כדי להתחיל בבדיקת קרבזול של חומצה אורונית, זהו מושבה בודדת מתרבית טהורה של הזן הרצוי לבדיקה ובחרו את המושבה באמצעות קיסם סטרילי.

הניחו את הקיסם במבחנה בתרבית המכילה חמישה מיליליטר PIB. גדל בחממת שייקר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. לאחר הדגירה, הוסיפו מנה קטנה של ציר PIB מתורבת לצלחת PIA שחוממה מראש.

בעזרת מפזר תאים סטרילי מורחים את המרק על הצלחת וגדלים בחום של 37 מע