אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:20 דק׳ • September 26th, 2025
קח מיקרופלייט עם דגימה המכילה אלגינט, אקסופוליסכריד מגן המיוצר על ידי החיידק Pseudomonas aeruginosa.
הכן דילול סדרתי של תקן הנגזר מאלגינאט כדי לכמת את ריכוז האלגינט בדגימה.
הוסף מאגר ציפוי ודגירה כדי להקל על היצמדות המולקולות למשטח הבאר.
יש לשטוף כדי להסיר מולקולות לא קשורות.
דגירה עם חומר חוסם כדי להסוות אתרי קשירה לא ספציפיים.
יש לשטוף, ואז לדגור עם נוגדנים ראשוניים ספציפיים לאלגינט.
שטפו שוב, ואז דגרו עם נוגדנים משניים מצומדים לאנזים המכוונים לנוגדנים הראשוניים.
שוטפים ואז דוגרים עם מצע כרומוגני, שהאנזים מתחמצן לייצור מוצר צבעוני.
הוסף תמיסה חומצית שעוצרת את התגובה ומשפרת את הצבע כדי לאפשר זיהוי קולורימטרי.
בעזרת קורא מיקרו-פלטות, מדוד את עוצמת הצבע.
צור עקומה סטנדרטית מעוצמות הדילולים הסטנדרטיים ושרטט את עוצמת הדגימה כדי לקבוע את ריכוז האלגינט.
בעזרת מיקרופיפטה, הוסף 50 מיקרוליטר מהדגימה שנאספה לצלחת לא מטופלת של 96 בארות.
לאחר מכן הוסף 50 מיקרוליטר של חיץ ציפוי ELISA לבארות. דגרו את הצלחת בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים. בעזרת בקבוק שפריץ, שטפו את בארות הצלחת פעמיים עם PBS-T על ידי מילוי הבארות ולאחר מכן ניקוזן על ידי הפיכת הצלחת.
הוסף 200 מיקרוליטר של חיץ חוסם לבארות בעזרת מיקרופיפטה ודגירה בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה. למחרת, שטפו את הצלחת פעמיים עם PBS-T כמו קודם. לאחר מכן הוסיפו 1
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים