אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:59 דק׳ • August 31st, 2026
קח צמח תפוח אדמה שגודל בתרבית (in vitro).
בשלב הבא, השתמשו ב-Agrobacterium רקומביננטי, פתוגן של צמחים המכיל DNA מעבר (T-DNA).
ה-T-DNA נושא גנום מלא של potato virus X, שהונדס כך שיקודד RNA לא מקודד לצורך סבסבס (sequester) של microRNAs ספציפיים בצמח.
בצעו אינפילטרציה של העלים עם החיידקים ושרטטו את הגבעול באמצעות קיסם מצופה בחיידקים.
באתר ההחדרה, החיידקים גוזרים את ה-T-DNA ומעבירים אותו כ-DNA גדיולי אחד אל תוך תאי הצמח.
בסיוע מנגנוני המארח, ה-T-DNA מייצר RNA גנומי נגיפי, אשר משתכפל ומבטא RNA לא מקודד וחלבונים נגיפיים.
ה-RNA שאינו מקודד נקשר למיקרו-RNA של צמחי המטרה, ובכך מונע מהם להיקשר ל-mRNA של המטרה שלהם ומגרום לפגמים התפתחותיים.
בינתיים, ה-RNAs הגנומיים של הנגיף יוצרים קומפלקסים של ריבונוקלאו-פרוטאין המפיצים את עצמם באופן סיסטמי דרך הפלסמודסמטות כדי לאפשר השתקה של microRNA בכל רחבי הצמח.
חריגות בעלים, הכוללות צמיחות אקטופיות ועלים בצורת חצוצרה, מעידות על התפקיד ההתפתחותי של ה-microRNAs שהשתיקו.
כאשר הצפיפות האופטית בשש מאות ננומטרים מגיעה ל-1.0, אספו את תרבית הנוזל של ה-Agrobacterium באמצעות צנטריפוגה, ותוהו מחדש את המשקע בנפח מספיק של תמיסת סינון (infiltration buffer) כדי להתאים את הצפיפות האופטית בשש מאות ננומטרים ל-1.0.
לאחר דגירה של שש שעות בטמפרטורת החדר, מלאו מזרק של 1 mL ללא מחט בתרח
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים