טיהור של אינטגראז ויראלי באמצעות כרומטוגרפיית זיקה

התחילו עם תרחיף של תאי חיידקים המבטאים אינטגראז ויראלי עם תג פוליהיסטידין.

בצע סוניקציה לתמיסות כדי לפרק את ממברנות החיידקים ולשחרר את האינטגראז.

העבירו את הליזט לשפופרת אולטרה-צנטריפוגה.

סבב בצנטריפוגה במהירות גבוהה כדי לשקיע את פסולת התאים ואסוף את הנוזל העליון.

לאחר מכן, קחו עמודת כרומטוגרפיה ארוזה בשרף טעון בניקל ושווו אותה לבאפר.

העמיסו את הליסאט המזוך על העמודה.

חלבונים בעלי היסטידינים נקשרים באופן חלש לניקל, בעוד שאינטגראז המסומן ב-polyhistidine נקשר באופן חזק.

שטפו עם באפר להסרת חלבונים שלא נקשרו, ולאחר מכן הוסיפו באפר אלוציה עם ריכוז אימידזול העולה באופן ליניארי.

אימידזול מתחרה עם היסטידין על הקישור לניקל ומשחרר את האינטגראז.

אספו את הפראקציות והעבירו מנות (aliquots) למבחנות המכילות תמיסת טעינה.

חממו כדי לדנטור את החלבונים, ולאחר מכן טענו על ג'ל פוליאקרילאמיד.

בצעו אלקטרופורזה ונתחו את פסי החלבון.

זהו את הפראקציות המכילות אינטגראז טהור, ללא חלבוני זיהום, ואגדו אותן כדי לקבל אינטגראז ויראלי מטוהר.

התחל בהפשרת משקע אחד של .E.coli ביטוי של אינטגראז של prototype foamy virus על קרח. השתמשו בסוניקטור המצויד בקרן ביולוגית (biohorn) בעלת קוטר של 0.5 אינץ' עם מיקרוטיפ קוני בקוטר של 0.125 אינץ', ובצעו סוניקציה למשך 30 שניות באמפליטודה של 30% כאשר המבחנה נמצאת על קרח. לאחר הסוניקציה, העבירו את דג