העשרה מבוססת אמבה של וירוסים ענקיים מדגימת מים סביבתית

קחו פלטת ריבוי בארות המכילה אמבות שגודלו במצע הרעבה.

מדיום ההרעבה מכיל אנטיביוטיקה וחומרי אנטי-פטרייתיים המגבילים צמיחה מיקרוביאלית תוך שמירה על חיוניות האמבאות ללא התרבות או יצירת ציסטות רדומות.

קחו מבחנה המכילה את דגימת המים מהסביבה וערבבו אותה באמצעות וורטקס (vortex) כדי לשחרר נגיפים ממוצקים תלויים ומשקעים.

הוסף את דגימת המים המכילה את הווירוסים לאמבות.

הניחו את הפלטה בתוך שקית עם קומפרס רטוב למניעת התאיידות, והדגירו.

במהלך הדגירה, האמבות בולעות את הווירוסים הענקיים באמצעות פגוציטוזה.

לאחר הפנימה, הווירוס משחרר את הגנום שלו אל תוך הציטופלזמה של האמיבה.

מפעל ויראלי ציטופלזמי נוצר סביב הגנום הוויראלי, שם הוא משתמש במנגנוני המארח כדי להתרבות ולהפיק חלבונים ויראליים המרכיבים ויריונים חדשים.

פעולה זו גורמת לתאי האמבה להפוך לעגולים ולהתבקע, ובכך משחררת ויריונים חדשים אל המצע, מה שמעשיר את ריכוז הוירוסים הענקיים לצורך זיהוי בהמשך התהליך.

לאחר איסוף דגימות מים מזוהמים בהתאם לפרוטוקול הכתוב, הכינו את תא המאכסן, V. vermiformis, על ידי הוספת האמבות לבקבוק תרבית תאים של 75 סמ"ר עם 30 מיליליטר של מצע פרוטאז-פפטון-תמצית שמרים-גלוקוז, או מצע PYG, והדגירה בטמפרטורה של 28 °C למשך 48 שעות. השתמשו בلامשקפי ספירה כדי לספור את האמבות, וכאשר הן מגיעות לריכוז של 5 x 10⁵ עד 10⁶ תאים למילליליטר, אספו את התאים בא