בדיקת פירוק תאי פיטום כדי לחקור את ההשפעה של כימיקל מטרה

תאי פיטום - תאי דם לבנים מיוחדים, מכילים גרגירי הפרשה עשירים באנזימים ליזוזומליים, כגון בטא-הקסוזמינידאז.

כדי לבצע דה-גרנולציה של תאי פיטום - תהליך הכולל שחרור גרגירי הפרשה, התחל בצלחת מרובת בארות המכילה תרחיף תאי פיטום צפקי עכברי שטופל מראש באימונוגלובולינים.

טפל בתאים עם כימיקל מטרה. כימיקל המטרה בעל פוטנציאל הגירוי מקיים אינטראקציה עם אימונוגלובולינים קשורים מראש על הקולטנים הספציפיים של תאי פיטום. זה מפעיל את תנועת הגרגירים המכילים בטא-הקסוזמינידאז אל פני התא, ומשחרר אותו לתמיסה.

צנטריפוגה את הצלחת כדי לגלול את התאים, ולהעביר את הסופרנטנט המכיל אנזים לבאר ריקה של צלחת טרייה. טפל בכדורי התאים עם מאגר ליזה כדי לשחרר את תוכנם לתוך הליזאט, כולל בטא-הקסוזמינידאז תוך תאי.

הוסף את הליזט המכיל אנזים לבאר אחרת מאותה צלחת מרובת בארות. טפל בשתי הבארות עם המצע של האנזים, p-nitrophenyl-acetyl-D-glucosamine, ודגירה. האנזימים מבצעים הידרוליזה של הסובסטרטים, ומשחררים p-nitrophenols - מוצר צבעוני שהופך את התמיסה לצהובה.

כסו את הבאר בתמיסה עצירת אלקליין כדי לסיים את התגובה ולהמיר p-nitrophenol ל-p-nitrophenolate, ולהעצים את הצבע הצהוב. מעריך ספקטרופוטומטרית את ספיגת התמיסה עבור שתי הבארות ב-405 ננומטר.

חשב את אחוז השחרור של אנזימים שמתאם עם ההשפעה הממריצה של כימיקלים המטרה על פירוק תאי פיטום.

כד