בידוד תאי דם חד-גרעיניים היקפיים ממעילי באפי אנושיים

תאים חד-גרעיניים בדם היקפי, PBMCs, מורכבים מאוכלוסייה הטרוגנית של תאים חיסוניים מיוחדים, כולל לימפוציטים, מונוציטים ותאים דנדריטים.

כדי לבודד PBMCs, התחל עם צינור המכיל דם מעיל באפי אנושי שהושג טרי. דם הפרווה של באפי מכיל PBMCs, יחד עם גרנולוציטים עם גרעינים מרובי אונות, אריתרוציטים וטסיות דם תלויים בפלזמה.

שכב בזהירות את מתלה המעיל של באפי על נפח שווה של מדיום שיפוע צפיפות עם צפיפות ספציפית רצויה האופטימלית להפרדת PBMC.

במהלך הצנטריפוגה, סוגי התאים השונים נפרדים לשכבות נפרדות, בהתבסס על צפיפות התאים ביחס למדיום השיפוע. בנוסף, הפוליסכרידים במדיום שיפוע הצפיפות מקדמים צבירה ושקיעה של אריתרוציטים.

האריתרוציטים והגרנולוציטים עם צפיפות גבוהה יותר משקעים לתחתית הצינור, ואילו הפלזמה, עם הצפיפות הנמוכה ביותר, יוצרת את השכבה העליונה. ה-PBMCs, בעלי צפיפות נמוכה יותר ממדיום שיפוע הצפיפות, יוצרים שכבה לבנה מעוננת בממשק תווך שיפוע צפיפות הפלזמה.

הסר את שכבת הפלזמה העליונה. אוספים בזהירות את השכבה העכורה המכילה את ה-PBMCs ומעבירים אותה לשפופרת טרייה עם מדיום נטול סרום. צנטריפוגה לכדור ה-PBMCs. השליכו את הסופרנטנט המכיל טסיות דם ומדיום שיפוע שיורי.

השעו מחדש את ה-PBMCs במדיום טרי והשתמשו בו לניתוח נוסף.

כדי לבודד PBMC ממעילי באפי של תורם אנושי, השתמש בפיפטה כדי לכסות באיטיות 15 מילימטרים של דם מ