דור חוץ גופי של תאים דנדריטיים פלסמציטואידים מאבות לימפואידים נפוצים

תאים דנדריטיים פלסמציטואידים, או pDCs, הם תאים חיסוניים המגיבים לזיהום על ידי ייצור אינטרפרון ציטוקין מסוג I.

כדי ליצור pDCs במבחנה, קח תרחיף של תאי אב לימפואידים נפוצים, או CLPs, המבודדים ממח עצם העכבר. CLPs יכולים להתמיין ללימפוציטים ותאים דנדריטיים.

הוסף את תרחיף התאים על שכבה של תאי הזנה - תאי סטרומה דבקים - המוקרנים בקרני גמא כדי לעכב התפשטות. תאי ההזנה מספקים ציטוקינים ומגע תא-תא הנדרש להתמיינות של CLPs.

הוסף ריכוז הולם של טירוזין קינאז 3 ליגנד דמוי Fms, או FL - ציטוקין דו-ערכי המקדם התפתחות pDC - ודגר.

ה-CLPs נודדים בין תאי ההזנה ומתרבים ליצירת קבוצות תאים, הנקראות אזורים מרוצפי אבן.

ה-FL במדיום נקשר לקולטן Flt3 - קולטן טירוזין קינאז - על ה-CLPs. הקישור גורם לדימריזציה של קולטנים ולזרחון עצמי של שאריות הטירוזין בתחום הציטופלזמי

.

חלבוני מתאם ציטופלזמיים נקשרים לשאריות אלה והופכים לזרחניים, ומעבירים את האות לרכיבי האיתות במורד הזרם. מפל האיתות גורם להתמיינות של CLPs ל-pDCs - תאים עגולים קטנים הגדלים בתרחיף - כמו גם לתאים דנדריטיים קונבנציונליים, או cDCs - תאים דבקים גדולים יותר בצורת ציר.

אסוף את התאים. הוסף נוגדנים כנגד סמני משטח ספציפיים ל-pDC ו-cDC. נתח את התאים באמצעות ציטומטריית זרימה.

תאים חיוביים לסמנים ספציפיים ל-pDC ושליליים לסמנים ספציפיים ל-cDC מצביעים על התפתחות מו