אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:20 דק׳ • July 8th, 2025
תאי B המפרישים נוגדנים, או ASCs, הם תאי B מובחנים המפרישים איזוטיפים של נוגדנים, כולל IgG ו-IgM, כדי להבטיח הגנה מפני פתוגנים.
כדי לבצע הערכה תפקודית של ASCs במבחנה, התחל בבדיקת הנקודה האימונוסורבנטית המקושרת לאנזים. קח צלחת ELISpot המכילה קרום פלואוריד פוליווינילידן מופעל בבסיס.
דגרו על הבארות עם שברי נוגדנים רב-שבטיים המכילים אך ורק אזורי Fab ללא אזור ה-Fc של הנוגדן. לכל אזור Fab יש אתר קשירה לאיזוטיפים ספציפיים של נוגדנים - IgG או IgM, המאפשר זיהוי של שני האיזוטיפים.
במהלך הדגירה, שברי הנוגדנים נצמדים לקרום, מה שמוביל לקיבוע.
כסו את הבארות בתמיסות חוסמות למניעת כריכה לא ספציפית. זרעו את הצלחת עם תאי B מפרישי נוגדנים פעילים, ודגרו. ה-ASCs מפרישים איזוטיפים שונים, כולל IgG ו-IgM, הנקשרים לשברי הנוגדנים הקשורים לממברנה.
שטפו את הצלחת עם חוצץ כדי להסיר נוגדנים מופרשים לא קשורים. טפל בבארות מסוימות עם נוגדנים לזיהוי מצומדים של אנזים ל-IgM ואחרות עם נוגדנים לזיהוי ל-IgG, ודגירה.
נוגדני הזיהוי נקשרים לאיזוטיפים שלהם, ויוצרים אימונוקומפלקסים.
הוסף מצעים קולורימטריים לכל הבארות, המקיימים אינטראקציה עם האנזימים ומייצרים כתמים בצבע סגול על הממברנה. הוסף פתרון עצירה כדי לעצור את התגובה.
הכתם הצבעוני המיוצר בכל באר מצביע על נוכחות האיזוטיפ של הנוגדן הספציפי, בקורלציה עם פעילות ההפרשה של תאי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים