אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:00 דק׳ • July 8th, 2025
תאי סטרומה של מח עצם, BMSCs - אבות של שושלות רקמת השלד - שוכנים בתוך חלל מח העצם יחד עם אוכלוסיית תאים הטרוגנית הכוללת תאי גזע המטופויאטיים, HSCs ותאי דם מובחנים.
כדי לבודד BMSCs, התחל עם שוק עכבר טרי שנקטף. חותכים את הקצוות הפרוקסימליים והדיסטליים של העצם כדי לחשוף את חלל מח העצם. מניחים את העצם החתוכה בצינור מיקרופוגה מותאם המכיל מדיום.
צנטריפוגה במהירות גבוהה כדי לשטוף את מח העצם מהעצם וליצור כדור מח עצם בתחתית הצינור. הסר את העצם מהצינור. בעזרת מחט המחוברת למזרק, יש לשבש את מח העצם כדי לשבור את הגושים.
הוסף בינוני למתלה. סנן דרך מסננת תאים בגודל רשת מתאים כדי להסיר את שברי העצם. צלחת את המסנן המכיל תאי מח עצם לצלחת תרבית פלסטיק.
במהלך הדגירה למשך הזמן המתאים, ה-BMSCs נצמדים לתחתית לוחית התרבית הפלסטית ומתרבים, בעוד שהתאים הלא נצמדים, כולל HSCs, נשארים בתרחיף.
השלך את המדיום המכיל את התאים שאינם נצמדים. השתמש בטריפסין כדי לנתק את ה-BMSCs מהצלחת. יש להוסיף סרום המכיל מדיום כדי לנטרל את הטריפסין. צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט.
השעו מחדש BMSCs במדיום טרי וזרעו את התאים בצלחת תרבית. דגירה, מה שמאפשר ל-BMSCs להיצמד לצלחת וליצור חד-שכבה.
לאחר שכל העצמות נאספו, הניחו את הדגימות ב-PBS על קרח, והעבירו את הדגימות למכסה תרבית סטרילי. בטכניקה סטרילית, בצע חתכים של 1 עד 2 מילימטר בקצה הפרוק
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים