בעכבר חוץ גופי עצם עצם התמיינות תאי סטרומה לאדיפוציטים

אדיפוציטים, או תאים אוגרי שומן, הם התאים השולטים ברקמת השומן - המפרישים אדיפוקינים - מולקולות איתות חיסוניות המווסתות את התגובה החיסונית.

כדי ליצור אדיפוציטים במבחנה, התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה תרבית דבוקה של תאי סטרומה של מח עצם עכבר, BMSCs, - תאים מולטיפוטנטיים לא מובחנים.

טפל בתאים במדיום אינדוקציה של אדיפוציטים המכיל מעכבי אנזים פוספודיאסטראז ודקסמתזון - גלוקוקורטיקואיד סינתטי - כדי לעורר את התמיינות התאים.

המעכבים נכנסים לתאים ומבטלים את הנוקלאוטידים המחזוריים פוספודיאסטראזות, אנזימים החיוניים לפירוק אדנוזין מונופוספט מחזורי, או cAMP. עיכוב זה מביא לעלייה ברמות cAMP תוך-תאי, קריטיות להתמיינות תאים.

דקסמתזון נקשר לקולטנים תוך-תאיים ב-BMSCs ונכנס לגרעין כדי להפעיל גנים המעורבים בסינתזה והצטברות שומנים. זה גורם להתמיינות של BMSCs לפרה-אדיפוציטים - תאי המבשר של אדיפוציטים בוגרים.

החלף את המדיום המושקע במדיום אינדוקציה טרי כדי לשמור על הפרה-אדיפוציטים. לאחר משך זמן מסוים, יש לטפל בתאים במדיום בסיס אדיפוציטים המכיל גלוקוז ואינסולין גבוהים.

אינסולין נקשר לקולטני פני התא הספציפיים שלו ומפעיל את הטרנסלוקציה של מובילי גלוקוז על פני התא, מה שמקל על ספיגת הגלוקוז לתוך הפרה-אדיפוציטים. התאים מנצלים עודף גלוקוז כדי לסנתז את טיפות השומנים, מה שמוביל לאדיפוגנזה - תהליך הצטברות השומנים - המקדם התמיינות לאדיפוציטים בוגרים.

טפל בתאים בצבע מכתים שומנים והתבונן בהם במיקרוסקופ אור. אדיפוציטים בוגרים מופיעים כתאים עגולים עם טיפות שומן אדומות מרובות.

כדי לגרום להתמיינות אדיפוציטים של תאי גזע של מח עצם, החלף את מדיום תרבית התאים של תרבית תאי מח עצם במדיום אינדוקציה של אדיפוציטים. לאחר יומיים של תרבית, החלף את הסופרנטנט במדיום אינדוקציה טרי של אדיפוציטים, ועבור למדיום מבוסס אדיפוציטים ביום 4. ביום השביעי, ודא כי התאים צברו טיפות שומנים וכי תצוגת הפנוטיפ דומה לאדיפוציטים בוגרים.