אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:18 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לבודד תאי T - תאי דם לבנים החיוניים למערכת החיסון - באמצעות מיון תאים המופעלים על ידי ציפה, BACS, קח תרחיף של תאים חד-גרעיניים בדם היקפי, PBMCs. PBMCs מכילים תאי T מטרה ותאים שאינם מטרה כמו תאי B, מונוציטים, תאי הרג טבעיים ותאים דנדריטיים.
הוסף חוצץ המכיל כמות מספקת של נוגדן אנטי-CD3 ביוטיניל ודגר למשך הזמן הנדרש. הנוגדן נקשר לקומפלקס CD3 - קומפלקס חלבון מולטימרי על פני התא - מאפיין מגדיר של תאי T.
הוסף מיקרו-בועות פונקציונליות - חלקיקים כדוריים קטנים המצופים בסטרפטווידין - לבחירה חיובית של תאי T הקשורים לנוגדנים. הליבה של כל מיקרו-בועה היא כדור חלול, מה שהופך אותם לחלקיקים בצפיפות נמוכה המסוגלים לצוף בתמיסה מימית.
דגרו את התערובת תחת תסיסה, ואפשרו למיקרו-בועות ולדגימה להתערבב היטב. במהלך הדגירה, סטרפטווידין על המיקרו-בועה נקשר לביוטין על הנוגדן הקשור לתאי T, ומשתק את התאים על המיקרו-בועות.
צנטריפוגה את הצינור. תאים שאינם מטרה נפרדים מהתערובת ככדור בתחתית.
המיקרו-בועות הקשורות לתאי T נשארות צפות על פני השטח, מה שמוביל להפרדה מבוססת ציפה של תאי T. טכניקת הפרדה זו מגבילה את הלחץ על תאי המטרה. בעזרת פיפטה דקה, הסר את הגלולה ואת החומר מבלי להפריע לשכבת המיקרו-בועה.
השעו מחדש את תאי ה-T המבודדים הקשורים למיקרו-בועות במדיום תרבית מתאים להמשך עיבוד.
כדי להתחיל, דגרו 3 x 108 PBMCs שהוש
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים