תרבית תאי T פעילים מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים אנושיים

אינטראקציות מרובות בין קולטן-ליגנד על פני התא בין תאי T נאיביים לתאים מציגי אנטיגן, APCs, מעוררות הפעלה והתפשטות של תאי T.

שני האירועים העיקריים בתהליך זה כוללים זיהוי של האנטיגן המבוטא ב-APC על ידי קומפלקס הקולטן של תאי CD3-T, ואחריו האינטראקציה בין ליגנד B7 המבוטא ב-APC לקולטן תאי T CD28.

כדי לחקור הפעלה והתפשטות של תאי T במבחנה, קח תאים חד-גרעיניים מדם היקפי אנושי, PBMCs, תלויים במדיום תרבית מתאים. הוסיפו חרוזים מגנטיים המצופים בנוגדנים אנטי-CD3 ו-CD28, וחלקו את התאים לשני צינורות חרוטיים.

הוסף את הציטוקין אינטרלוקין-2, IL-2, לצינור הראשון ואינטרלוקין-15, IL-15, לשני. העבירו את התאים לצלחת מרובת בארות. דגירה.

הנוגדנים נגד CD3 ו-CD28 של החרוזים נקשרים לקומפלקס הקולטן של תאי CD3-T ולקולטן CD28 המתבטא בתאי T, בהתאמה, וגורמים להפעלה והתפשטות של תאי T.

עם IL-2, הציטוקין נקשר לקולטן שלו על פני תא ה-T המופעל, מה שמוביל להתמיינות והתפשטות שלו לתאי T אפקטיביים. לעומת זאת, IL-15 מניע בעיקר התמיינות והתפשטות של תאי T לתאי זיכרון T.

השעו מחדש והעבירו מחצית מהתאים לבארות חדשות כדי לאפשר צמיחה תאית. הוסף מדיום טרי המכיל IL-2 או IL-15 כדי לשמור על אוכלוסיות תאי T מובחנים בציטוקינים לניתוח שלאחר מכן.

כדי להתחיל, שטפו חרוזי CD3/CD28 על ידי העברת 12.5 מיקרוליטר חרוזים למיליון תאים לצינור מיקרוצנטריפוגה, והוספת 12.5 מיקרוליטר PBS לכל 12.5 מיקרוליטר של החרוזים בצינור. לאחר מכן, הנח את צינור המיקרו-צנטריפוגה על מגנט מתאים למשך דקה אחת, השליך את המאגר והשהה מחדש את החרוזים בנפח המקורי של מדיום תאי T.

לאחר מכן, הוסיפו 12.5 מיקרוליטר חרוזים למיליון תאים ביחס של 1 עד 2 חרוזים לתאים, וחלקו את התאים לשני תנאים עם כ-5 מיליון תאים בכל אחד. לאחר מכן, הוסף את הנפח הנכון של ציטוקינים לכל מצב, והעביר את התאים לצלחות מרובות בארות. דגרו על התאים במשך שלושה ימים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני.

לאחר שלושה ימי דגירה, הכינו מדיום תאי T טרי עם ריכוז כפול של ציטוקינים. השעו מחדש ופצלו את התאים על ידי העברת מחצית הנפח מכל באר לבאר חדשה. לאחר מכן, הוסף את אותו נפח של מדיום תאי T שהוכן טרי לכל באר.