אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:25 דק׳ • July 8th, 2025
אינטראקציות מרובות בין קולטן-ליגנד על פני התא בין תאי T נאיביים לתאים מציגי אנטיגן, APCs, מעוררות הפעלה והתפשטות של תאי T.
שני האירועים העיקריים בתהליך זה כוללים זיהוי של האנטיגן המבוטא ב-APC על ידי קומפלקס הקולטן של תאי CD3-T, ואחריו האינטראקציה בין ליגנד B7 המבוטא ב-APC לקולטן תאי T CD28.
כדי לחקור הפעלה והתפשטות של תאי T במבחנה, קח תאים חד-גרעיניים מדם היקפי אנושי, PBMCs, תלויים במדיום תרבית מתאים. הוסיפו חרוזים מגנטיים המצופים בנוגדנים אנטי-CD3 ו-CD28, וחלקו את התאים לשני צינורות חרוטיים.
הוסף את הציטוקין אינטרלוקין-2, IL-2, לצינור הראשון ואינטרלוקין-15, IL-15, לשני. העבירו את התאים לצלחת מרובת בארות. דגירה.
הנוגדנים נגד CD3 ו-CD28 של החרוזים נקשרים לקומפלקס הקולטן של תאי CD3-T ולקולטן CD28 המתבטא בתאי T, בהתאמה, וגורמים להפעלה והתפשטות של תאי T.
עם IL-2, הציטוקין נקשר לקולטן שלו על פני תא ה-T המופעל, מה שמוביל להתמיינות והתפשטות שלו לתאי T אפקטיביים. לעומת זאת, IL-15 מניע בעיקר התמיינות והתפשטות של תאי T לתאי זיכרון T.
השעו מחדש והעבירו מחצית מהתאים לבארות חדשות כדי לאפשר צמיחה תאית. הוסף מדיום טרי המכיל IL-2 או IL-15 כדי לשמור על אוכלוסיות תאי T מובחנים בציטוקינים לניתוח שלאחר מכן.
כדי להתחיל, שטפו חרוזי CD3/CD28 על ידי העברת 12.5 מיקרוליטר חרוזים למיליון תאים לצינור מיקרוצנט
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים