בידוד של לויקוציטים בכבד שוליים מכבד עכבר

שוליים בכבד, MH, לויקוציטים, נמצאים דבוקים לדפנות כלי הדם המיוחדים בכבד או סינוסואידים, המרופדים בתאי אנדותל. לויקוציטים MH מגויסים לרקמה שמסביב בתגובה לדלקת.

כדי לקצור לויקוציטים MH, התחל עם עכבר שעבר המתת חסד במצב שכיבה. חותכים את חללי הצפק והחזה, וחושפים את קומפלקס הכבד והלב-ריאה.

עקור את המעיים כדי לחשוף את וריד הפורטל, המוביל דם מהטחול, מערכת העיכול והאיברים הקשורים אליו לכבד. הכנס מחט המחוברת למשאבה פריסטלטית לווריד הפורטל.

נתח את הווריד הנבוב התחתון - כלי דם עיקרי המוביל דם לא מחומצן מהכבד ללב - כדי לאסוף את הפרפוזה במהלך הזלוף.

לחלחל את הכבד דרך וריד הפורטל עם חיץ המכיל נוגד קרישה בקצב זרימה נמוך למשך זמן קצר. שלב זה מסייע בהוצאת דם עם תאים שאינם נדבקים מכלי הדם של הכבד דרך יציאת הווריד הנבוב התחתון. השליכו את הפרפוזה המזוהמת בדם.

כעת, חלחל בקצב זרימה גבוה יותר. הזלוף הכפוי בזרימה מוגברת ובקצב גזירה משבש את ההידבקות בין לויקוציטים MH לרירית הפנימית של כלי הדם, ובכך מנתק את לויקוציטים MH מהדופן הסינוסואידית.

אסוף והעביר את הפרפוזה המכילה לויקוציטים MH ותאי דם אחרים לתוך צינור טרי. צנטריפוגה. השעו מחדש את הגלולה המכילה לויקוציטים MH להמשך ניתוח במורד הזרם.

כדי לאסוף לויקוציטים בשולי הכבד של העכברים, מיד עם הפסקת הנשימה, השתמש במספריים סטריליים ובמלקחיים של רקמת השן כדי לבצע חתך בטן בקו האמצע עד לתהליך ה-xiphoid. לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי להרים את עצם החזה וחתוך בזהירות את הסרעפת ואת כלוב הצלעות משני הצדדים.

מהדקים המוסטט על עצם החזה ומקפלים את כלוב הצלעות בצורה רחבה כדי לחשוף את קומפלקס הלב ריאה. העבר את המעיים מחוץ לחלל הבטן משמאל לבעל החיים, וחשוף את וריד הפורטל. לאחר מכן, חבר מחט בגודל 30 למשאבה פריסטלטית, והכנס אותה לווריד הפורטל, רוסטרל לווריד הטחול.

חותכים את הווריד הנבוב התחתון מעל הסרעפת כדי לאפשר ניקוז ואיסוף של הפרפוזה מחלל החזה. לאחר מכן, הפעל את המשאבה הפריסטלטית במהירות של כ -3 מיליליטר לדקה, ואסוף את המיליליטר הראשונים של פרפוזה מזוהמת בדם מבריכת חלל החזה. לאחר שנאספו 3 מיליליטר, כבה את המשאבה.

לאחר מכן, לאחר החדרת מחט פרפר בגודל 21 המחוברת למזרק של 10 מיליליטר, התחל מחדש את הזלוף במהירות של עד 4 מיליליטר לדקה עד שנאספים 10 מיליליטר פרפוזה מחלל החזה. כאשר הכבד הופך לחום בהיר, יש להפסיק את הזילוף. לאחר מכן, העבירו את הפרפוזה לצינור של 15 מיליליטר. צנטריפוגה אותו, ואז, שאפו את הסופרנטנט.