בידוד תאי הרג טבעי מרקמת הכבד להרחבה סלקטיבית

כדי לבודד תאי הרג טבעיים, או תאי NK - תאי דם לבנים מיוחדים המעורבים במערכת החיסון המולדת, התחילו ברקמת כבד אנושית המכילה אוכלוסיות תאים מגוונות, כולל תאים המכילים שומן, אריתרוציטים, גרנולוציטים, לימפוציטים ותאים קשורים אחרים הכלואים בתוך מטריצה חוץ-תאית עשירה בקולגן.

טחנו את הרקמה לחתיכות קטנות והעבירו אותן לצינור המכיל קולגנאז - אנזים פרוטאוליטי. קולגנאז מבקע את הקולגן, משבש את המטריצה ומשחרר את התאים הקשורים ל-ECM.

הכנס את הצינור לתוך מפרק רקמות. דיסוציאציה מכנית זו מפרקת עוד יותר את ECM כדי לשחרר תאים מחוברים באופן רופף לתמיסה. סנן את התוכן כדי להסיר רקמה לא מעוכלת ושברי ECM ולאסוף את המסנן המכיל תאים שונים.

השעו מחדש את התאים למאגר המכיל חרוזי סיליקה מצופים פוליוויניל פירולידון או PVP. חרוזי ה-PVP נקשרים באופן סלקטיבי לתאים המכילים שומן, ומפרידים אותם למעשה משאר התאים.

צנטריפוגה במהירות נמוכה כדי לגלול את אוכלוסיית התאים; השליכו את הסופרנטנט המכיל פסולת ותאי שומן הקשורים לחרוזים. השעו מחדש את הגלולה וכסו את תרחיף התא על צינור המכיל מדיום שיפוע צפיפות כדי להפריד את התאים על סמך צפיפויותיהם.

צנטריפוגה במהירות נמוכה. האריתרוציטים והגרנולוציטים בצפיפות גבוהה יותר מתיישבים בתחתית, ואילו לימפוציטים מופיעים בשלב הביניים בין שני נוזלים.

אסוף את התאים משלב הביניים ותרבית אותם במדיום סלק