אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:14 דק׳ • July 8th, 2025
תאי הרג טבעי, NK, הם לימפוציטים גרגירים גדולים המבטלים גידולים וזיהומים מיקרוביאליים.
להרחבת תאי NK ex vivo, קח תרחיף של תאים חד-גרעיניים בדם היקפי, PBMCs, המכילים אוכלוסייה הטרוגנית של לימפוציטים, כולל תאי NK. הוסף תאי הזנה מוקרנים - תאים לימפובלסטואידים שאינם מתרבים - המבטאים אינטרלוקין 21, mIL-21 הקשור לממברנה, הנדרש להפעלה והרחבה של תאי NK.
הוסף את התרבות המשותפת בבאר תרבית מיוחדת עם קרום חדיר גז בתחתית, המאפשר חילופי גזים. התאים שוקעים ומתרבים לתקופה ממושכת ללא צורך במעבר.
הוסף אינטרלוקין 2, IL-2 ואינטרלוקין 15, IL-15 - ציטוקינים לשגשוג תאי NK. דגירה לתקופה מספקת בתנאים פיזיולוגיים.
mIL-21 על תאי ההזנה נקשר לקולטן הטרודימרי ספציפי בתאי ה-NK. IL-15 ו-IL-2 אקסוגניים נקשרים לקולטנים שלהם. הקישור גורם למסלולי איתות שונים במורד הזרם - מפעיל ביטוי גנים - המגביל את ההזדקנות התאית ומוביל לשגשוג ממושך של תאי NK.
באמצעות ציטומטריית זרימה, הערך את התרחבות תאי ה-NK במרווחי זמן קבועים.
שרטט את הנתונים המוקלטים כדי לנתח את קצב ההתפשטות של התאים ואת טוהרם - צמיחה סלקטיבית של סוג תא ה-NK המטרה. התרחבות הסעפת לאורך תקופת הדגירה מעידה על התפשטות מתמשכת תוך שמירה על טוהר גבוה.
שטפו את התאים החד-גרעיניים של הדם ההיקפי, או PBMCs, ו-100 תאי 221-mIL-21 המוקרנים בגמא בנפרד על ידי צנטריפוגה ב-400 גרם
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים