Ex Vivo התרחבות של תאי הרג טבעיים מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים

תאי הרג טבעי, NK, הם לימפוציטים גרגירים גדולים המבטלים גידולים וזיהומים מיקרוביאליים.

להרחבת תאי NK ex vivo, קח תרחיף של תאים חד-גרעיניים בדם היקפי, PBMCs, המכילים אוכלוסייה הטרוגנית של לימפוציטים, כולל תאי NK. הוסף תאי הזנה מוקרנים - תאים לימפובלסטואידים שאינם מתרבים - המבטאים אינטרלוקין 21, mIL-21 הקשור לממברנה, הנדרש להפעלה והרחבה של תאי NK.

הוסף את התרבות המשותפת בבאר תרבית מיוחדת עם קרום חדיר גז בתחתית, המאפשר חילופי גזים. התאים שוקעים ומתרבים לתקופה ממושכת ללא צורך במעבר.

הוסף אינטרלוקין 2, IL-2 ואינטרלוקין 15, IL-15 - ציטוקינים לשגשוג תאי NK. דגירה לתקופה מספקת בתנאים פיזיולוגיים.

mIL-21 על תאי ההזנה נקשר לקולטן הטרודימרי ספציפי בתאי ה-NK. IL-15 ו-IL-2 אקסוגניים נקשרים לקולטנים שלהם. הקישור גורם למסלולי איתות שונים במורד הזרם - מפעיל ביטוי גנים - המגביל את ההזדקנות התאית ומוביל לשגשוג ממושך של תאי NK.

באמצעות ציטומטריית זרימה, הערך את התרחבות תאי ה-NK במרווחי זמן קבועים.

שרטט את הנתונים המוקלטים כדי לנתח את קצב ההתפשטות של התאים ואת טוהרם - צמיחה סלקטיבית של סוג תא ה-NK המטרה. התרחבות הסעפת לאורך תקופת הדגירה מעידה על התפשטות מתמשכת תוך שמירה על טוהר גבוה.

שטפו את התאים החד-גרעיניים של הדם ההיקפי, או PBMCs, ו-100 תאי 221-mIL-21 המוקרנים בגמא בנפרד על ידי צנטריפוגה ב-400 גרם למשך 5 דקות עם 10 מיליליטר של מדיה R-10.

לאחר צנטריפוגה, שמור 1 x 10⁶ PBMCs לציטומטריית זרימה, וערבב 5 x 10⁶ PBMCs עם 10 x 10⁶ 100 תאי 221 mIL-21 מוקרני גמא בצלחת מיוחדת של 6 בארות. הוסף 30 מיליליטר של מדיית R-10 בתוספת אינטרלוקין-2 אנושי ואינטרלוקין-15 אנושי לאותה צלחת של 6 בארות, ודגירה על הצלחת ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני עם החלפת המדיה כל שלושה עד ארבעה ימים.

בזמן הדגירה, רשום את סך הרוצח הטבעי בדם ההיקפי או מספר תאי PBNK, כדאיות, ובצע ציטומטריית זרימה כל שלושה עד ארבעה ימים כדי לחשב את קצב התפשטות תאי ה-NK.