זיהוי סמן CD של תאי הרג המושרים על ידי ציטוקינים אנושיים על ידי ציטומטריה של זרימה
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:35 דק׳ • July 8th, 2025
תאי רוצח המושרה על ידי ציטוקין, CIK, הם אוכלוסיות תאי חיסון הטרוגניות הנוצרות ex vivo מתרביות תאים חד-גרעיניים בדם היקפי (PBMC) המגורים עם ציטוקינים ספציפיים ונוגדנים חד שבטיים. תאי CIK מורכבים מאוכלוסיות תאים, כולל תאי CD3+CD56+ NK-T, תאי CD3+CD56-T ותאי CD3-CD56+ NK.
כדי לקבוע את פרופורציה של תאי CIK, התחל עם צינורות המכילים תרחיף תאי CIK שמקורו ב-PBMC. הוסף נוגדנים נגד CD3 ואנטי-CD56 המצומדים לפלואורופורים שונים ואת התערובת שלהם לצינורות ייעודיים. הוסף נוגדנים לבקרת איזוטיפים מצומדים לפלואורופורים דומים כנוגדנים ספציפיים לצינורות אחרים.
נוגדנים נגד CD3 ו-CD56 המסומנים באופן פלואורסצנטי מזהים ונקשרים ל-CD3 ו-CD56 המתבטאים באוכלוסיות תאי CIK, בהתאמה. נוגדנים לבקרת איזוטיפים חסרים ספציפיות של אנטיגן מטרה, מה שמקל על מדידות אותות רקע לא ספציפיות.
תאי פיפטה לצינורות תחתונים עגולים עם מכסי מסננת תאים, המסייעים בהסרת אגרגטים של תאים. טען את הצינורות לקרוסלת ציטומטר זרימה. במהלך הריצה, כל תא עובר דרך התעלה ופוגש את קרני הלייזר ומפזר את האור.
גלאי אחד מודד את עוצמת האור המפוזר קדימה, המעידה על גודל התא; אחר מודד את עוצמת האור המפוזר בצד בניצב לקרן הלייזר, מה שמרמז על גרעיניות התא. יחד, מידע זה מסייע בזיהוי אוכלוסיית תאי החיסון.
במקביל, קרני לייזר באורכי גל עירור ספציפיים מעוררות את הנוגד
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים