בדיקה לזיהוי הפרשת אינטרפרון-גמא באיברי הלימפה של מורין

אינטרפרון-גמא, או IFN-γ, ציטוקין המופרש על ידי הלימפוציטים תאי T ותאי הרג טבעיים או תאי NK, מתווך את התגובה החיסונית נגד פתוגנים.

כדי לחקור באתרו ייצור IFN-γ, קחו עכבר מושתל בתאי T עם תווית פלואורסצנטית שהונדסו לבטא קולטן המזהה אובאלבומין - אנטיגן מודל.

קחו תרחיף של חיידקים פתוגניים - מהונדסים גנטית כדי לבטא אובאלבומין - והזריקו אותו לווריד לעכבר, מה שגורם לזיהום מערכתי. החיידקים המסתובבים מגיעים לטחול - איבר לימפה משני - המסייע בהסרת פתוגנים על ידי הקלה על אינטראקציה עם תאי חיסון.

תאים המציגים אנטיגן בולעים את החיידקים ומציגים את האנטיגן. תאי T נקשרים לאנטיגן דרך הקולטן שלו, מופעלים ומייצרים IFN-γ.

תאי מקרופאגים, הנגועים בחיידקים, משחררים מתווכים חיסוניים ומווסתים ליגנדים מפעילים על פני השטח שלהם. עם אינטראקציה עם אותות אלה, תאי NK מופעלים ומייצרים IFN-γ.

הזרקת מעכב הובלת חלבון תוך תאי כדי להגביל את הפרשת IFN-γ, ולגרום להצטברות התוך תאית שלו.

קציר את טחול העכבר. תקן את הרקמה והקפיא אותה כדי לסייע בחיתוך. בעזרת קריו-מיקרוטום, צור קטעי רקמה דקים והנח אותם על שקופיות זכוכית. הוסף נוגדנים ספציפיים לתאי NK, הנקשרים לסמני פני השטח, ונוגדנים ספציפיים ל-IFN-γ, הצובעים את ה-IFN-γ התוך-תאי. נוגדנים אלה מסומנים בפלואורופורים שונים.

מקמו את השקופית מתחת למיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לזהות IFN-γ