טיהור והפעלה של טסיות דם מדם שלם

לאחר פגיעה בכלי הדם, טסיות הדם מגויסות ומופעלות באתר הפציעה כדי ליצור פקק טסיות וליזום תיקון רקמות.

כדי לטהר טסיות דם מלא של עכברים ולהפעיל אותם במבחנה, קח מדיום שיפוע צפיפות מתאים. שכב בזהירות את דגימת הדם על גבי המדיום. צנטריפוגה להפרדת טסיות הדם מהפלזמה ומשכבות תאי הדם האדומות והלבנות.

העבירו את הטסיות לשני צינורות חדשים המכילים מאגר מכתים מתאים. הוסף את הטטרפפטיד הסינתטי GPRP המכיל את רצף חומצות האמינו גליצין-פרולין-ארגינין-פרולין לצינור אחד, ואחריו תרומבין.

תרומבין מבקע תחומים חוץ-תאיים ספציפיים של קולטני התרומבין על פני הטסיות, יוזם מפל איתות במורד הזרם ומפעיל את טסיות הדם. גרגירי הטסיות המופעלות משחררים חלבון CD62P, שעובר במהירות אל פני הממברנה.

הטטרפפטיד GPRP חוסם פיברינוגן - גליקופרוטאין שנקשר לאינטגרין CD41/CD61 המתפרש על פני הממברנה על טסיות דם מופעלות כדי ליזום צבירת טסיות דם - ובכך שומר על הטסיות המופעלות בתרחיף.

הוסף נוגדנים נגד CD41 ו-CD62P עם תווית פלואורסצנטית לצינורות המכילים טסיות דם.

הנוגדנים נגד CD41 נקשרים ל-CD41 המתבטא בכל מקום על טסיות מנוחה ומופעלות. עם זאת, anti-CD62P נקשר באופן ספציפי ל-CD62P המועבר למשטח הממברנה של טסיות דם מופעלות.

נתח את התאים באמצעות ציטומטריית זרימה. טסיות מנוחה מופיעות כתאי CD41+, ואילו טסיות מופעלות מאופיינות כתאי CD41+ CD62P+.

כדי