בידוד תאי סרטולי בקרה חיסונית מצינוריות זרע עכבר

צינורות הזרע של האשכים מכילים תאי סרטולי, המזינים תאי נבט. תאי סרטולי מחוברים באמצעות צמתים הדוקים ומחוברים היטב למטריצת הבסיס העשירה בחומצה היאלורונית. סידור זה של תאי סרטולי מווסת את כניסת תאי החיסון לצינורית ומגן על תאי נבט מתפתחים מפני פירוק.

כדי לבודד תאי סרטולי, התחל עם צינור המכיל צינורות זרע מעוכלים חלקית שמקורם באשכי עכבר. צינורות אלה חסרים תאים פריטובולריים - תאי שריר חלק המקיפים את צינורות הזרע.

טפלו בצינוריות עם קוקטייל אנזימים המכיל היאלורונידאז - חיוני להידרוליזה של חומצה היאלורונית - ו-DNase.

היאלורונידאזות נכנסות לצינורות ומבקעות חומצה היאלורונית - פוליסכריד במרתף - יוזמות ניתוק תאי סרטולי ממטריצת המרתף ומשחררות תאי נבט לתמיסה. DNase מעכל כל מזהמי DNA מהתמיסה, ומונע צבירת תאים.

שטפו את הצינורות המתעכלים אנזימטית עם חיץ, והסירו שאריות אנזימים, שברי תאים ותאי נבט. השעו מחדש את הצינורות המעוכלים והעמיסו את המתלה למכלול מזרק מחט.

העבירו את התמיסה שוב ושוב כדי ליצור גזירה הידרודינמית ולשבש את הצמתים ההדוקים של תאי הסרטולי, ולשחרר אותם כתאים בודדים יחד עם תאי הנבט הנותרים.

סנן את מתלה התאים, הסר פסולת סלולרית וקבל מתלה תא יחיד. צנטריפוגה את המסנן כדי לגלול את התאים.

השעו מחדש את התאים במצע גידול נטול סרום להרחבה סלקטיבית של תאי סרטולי.

כדי לבודד את תאי סרטולי, השתמש בפיפט