בידוד סלקטיבי של תאי T CD4⁺ Vδ1⁺ γδ מתאי דם מונוגרעיניים היקפיים אנושיים

תאי T γδ מבטאים קולטני תאי T, TCRs, המורכבים משרשראות גמא ודלתא עם תחומים משתנים וקבועים.

תאי CD4+ Vδ1+ T - תת-אוכלוסייה של תאי T γδ - מבטאים במשותף את שרשרת Vδ1 המשתנה ואת הקולטן המשותף CD4. תאים אלה נודדים לרקמות דלקתיות ומתמיינים לתאי CD4+ או CD8+ αβ T בוגרים מבחינה תפקודית - מתווכים תגובה חיסונית.

כדי לבודד תאי CD4+ Vδ1+ T מתאים חד-גרעיניים בדם היקפי אנושי, PBMCs, השעו מחדש את התאים במאגר. השתמש במגיב חוסם FC כדי לחסום את קולטני ה-Fc על פני התא ולמנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

הוסף נוגדנים נגד Vδ1 המצומדים עם הפלואורופור FITC, הנקשרים לאנטיגנים Vδ1 של תאי γδ T. דגירה עם מיקרו-חרוזים מגנטיים מצומדים לנוגדנים נגד FITC, הנצמדים לצבע FITC על הנוגדנים הקשורים לתאי Vδ1 T.

העבירו את התערובת דרך עמודה מגנטית כדי למשוך את תאי ה-Vδ1+ T הקשורים לחרוזים; תאי Vδ1-T נשארים לא קשורים ולאחר מכן נשטפים החוצה. שטוף בכוח את העמודה על ידי דחיפת המאגר דרכו כדי לנתק את תאי Vδ1+ T.

דגרו על התאים עם חרוזים מגנטיים מצופים נוגדנים נגד CD4, הנקשרים לקולטן CD4 של התאים. הנח את הצינור במגנט כדי למשוך את תאי CD4+ Vδ1+ T הקשורים לחרוזים; תאי CD4-Vδ1+ T נשארים לא קשורים.

השעו מחדש את תאי CD4+ Vδ1+ T במדיום. הוסף ריאגנט לניתוק חרוזים כדי לשחרר את החרוזים מהתאים. החזר את הצינור על המגנט כדי להפריד בין החרוזים.