בידוד רשת תאי מערכת החיסון של חניכיים מחסימות שיניים מורין

החניכיים, או רקמת החניכיים, מקיפה את החלק הצווארי של השיניים ואת עצם הלסת.

רקמת חניכיים מורכבת משכבת אפיתל, המופרדת מרקמת החיבור הבסיסית על ידי קרום בסיס עשיר בקולגן IV. רקמת החיבור של החניכיים מכילה רשת תאי חיסון, כולל לימפוציטים, תאי פיטום ונויטרופילים המגנים על החניכיים מפני זיהומים.

כדי לבודד את רשת תאי חיסון החניכיים, קח בלוקים של שיני עכברים המכילים רקמת חניכיים מחוברת היטב. טפלו בבלוקים עם קוקטייל אנזימים - המכיל קולגנאזות ו-DNases מסוג 4.

קולגנאזות חודרות לרקמה, מפרקות קולגן-IV ומשבשות את קרום הבסיס ואת אפיתל החניכיים, וגורמות להתרופפות החניכיים מהשיניים. בינתיים, DNases מפרקים את מזהמי ה-DNA. הוסף חומר כלאט לצינור; כדי להסיר קטיונים דו-ערכיים ולמנוע צבירת תאים.

העבירו את גושי השיניים המעוכלות לצלחת פטרי המכילה מדיום DNase. הוציאו את רקמת החניכיים מגושי השיניים, והעבירו אותה למסננת תאים.

בעזרת בוכנה מועכים את הרקמה. דיסוציאציה מכנית זו משבשת את שכבת החיבור של החניכיים, ומשחררת את תאי החיסון מהרקמה. שוטפים את המסננת במדיה ואוספים את התאים המשוחררים בסינון.

צנטריפוגה את המסנן, מגלגלת את התאים, ומשליכה את הסופרנטנט המכיל שאריות אנזימים ופסולת. השעו מחדש את אוכלוסיית התאים הנושאת תאים חיסוניים במדיה מלאה, מוכנה לניתוח עתידי.

הסר את הרקמה העודפת מגבול החניכיים, והעביר את הבלוקים הלסתיים והלסת התחתונה לצינור חרוטי של 50 מיליליטר המכיל 5 מיליליטר קולגנאז ו-DNase על קרח. עכל את הרקמה בחממת שייקר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה, והוסף 50 מיקרוליטר של 0.5 EDTA מולארי במהלך חמש הדקות האחרונות. לאחר מכן, הוסף 5 מיליליטר של מדיום DNase קר לרקמות, וערבב בעדינות את תוכן הצינור על ידי מערבולת. לאחר מכן, העבירו את ארבעת גושי הרקמה לצלחת פטרי, וכסו אותם ב -500 מיקרוליטר של מדיום DNase טרי.

השתמש באזמל כדי להסיר את החניכיים מכל גוש רקמה ולהעביר את כל תכולת הכלי למסננת תאים של 70 מיקרון על גבי שפופרת של 50 מיליליטר. שטפו את צלחת הפטרי והמסננת עם 3 עד 5 מיליליטר של מדיום DNase טרי, ולאחר מכן, השתמשו בבוכנה של מזרק סטרילי של 3 מיליליטר כדי לרסק את רקמת החניכיים כנגד רשת המסננת. שוטפים את המסננת עם 30 עד 35 מיליליטר מדיום DNase קר, וצנטריפוגה את המסנן. לאחר מכן, השעו מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של מדיום שלם, וקבעו את מספר התאים הקיימאים.