אפיון מלכודות חוץ-תאיות של מקרופאגים בדגימות רקמת ריאה של עכבר

מלכודות חוץ-תאיות של מקרופאגים, METs, הן מבנים דמויי רשת המשוחררים על ידי מקרופאגים כדי ללכוד ולחסל פתוגנים.

METs מורכבים מסיבי כרומטין חוץ-תאיים הקשורים למטריקס מטאלופרוטאינאז-9, MMP-9 והיסטון ציטרולין H3, H3Cit - חלבון היסטון שונה שבו הארגינין מומר לציטרולין.

כדי לאפיין METs בקטעי רקמת ריאה של עכברים קבועים בפורמלין, משובצים בפרפין, ראשית, יש לייבש את השקופיות. טבלו בקסילן כדי להפחית את החלקים. השתמש באתנול מימי כדי להחזיר לחות לחלקים.

מחממים את החלקים כדי לשבור את קישורי החלבון המושרים על ידי פורמלין, וחושפים את אנטיגני המטרה לקשירת נוגדנים לאחר מכן.

הוסף תמיסה המכילה חלבון כדי לחסום אתרי קישור לא ספציפיים. דגירה עם קוקטייל של נוגדנים ראשוניים נגד MMP-9, אנטי-H3Cit ואנטי-F4/80.

הנוגדן נגד F4/80 נקשר לגליקופרוטאין F4/80 על פני תא המקרופאגים. הנוגדנים נגד MMP-9 ואנטי-H3Cit נקשרים ל-MMP-9 ו-H3Cit ב-METs בהתאמה. הוסף נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור שונים הנקשרים לנוגדנים הראשוניים שלהם הקשורים למטרותיהם.

התקן את החלקים עם מדיום הרכבה המכיל DAPI. DAPI מכתים את סיבי הכרומטין של ה-MET. בעזרת מיקרוסקופ קונפוקלי, דמיין את החלקים כדי להמחיש את הקרינה של סמני ה-MET.

METs מאופיינים בסיבי הכרומטין החוץ-תאיים שלהם ובביטוי משותף של F4/80, MMP-9 ו-H3Cit.

כדי לטפל מראש בדגימות FFPE בתמיסת אחזו