אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:50 דק׳ • July 8th, 2025
מיקרו-חלקיקים תאיים הם שלפוחיות קשורות לממברנה בגודל תת-מיקרוני הסוגרות ביומולקולות המשתחררות מקרום הפלזמה של תאים אוקריוטיים העוברים אפופטוזיס.
כדי ליצור מיקרו-חלקיקים שמקורם בלימפוציטים מסוג T, LMPs במבחנה, לוקחים בקבוק תרבית המכיל תרבית לימפוציטים מסוג T. הוסף אקטינומיצין-D, אנטיביוטיקה. דגירה למשך זמן מתאים.
אקטינומיצין-D נכנס ללימפוציטים ועובר לגרעין. הוא מתערבב בין זוגות בסיסי DNA ספציפיים, ומעכב את השעתוק. זה מוביל לעצירת מחזור התא ומפעיל את המסלול האפופטותי.
בתחילת האפופטוזיס, ה-caspase-3 המופעל מתבקע ומפעיל קינאז הקשור ל-rho, ROCK1. ROCK1, בתורו, מזרחן את חלבוני המטרה שלו במורד הזרם, וגורם להתכווצות אקטומיוזין, מה שמוביל לבליב הממברנה ולשחרור לאחר מכן של LMPs המכילים את הרכיבים הציטוזוליים והגרעיניים לתווך.
התאים עוברים בסופו של דבר אפופטוזיס.
לאחר הדגירה, העבירו את מדיום התרבות לצינור טרי. צנטריפוגה לכדור לימפוציטים T. העבירו את הסופרנטנט לצינור טרי.
צנטריפוגה להסרת פסולת תאים גדולה. העבירו את הסופרנטנט המכיל LMPs לבקבוק. בצע אולטרה-צנטריפוגה במהירות גבוהה כדי לגלול את ה-LMPs. השהה מחדש את ה-LMPs במאגר. יש לאחסן בטמפרטורות נמוכות עד לניתוח נוסף.
בתור התחלה, יש לתרבית תאי CEM T בארבע צלוחיות T175, שכל אחת מהן מכילה 150 מיליליטר של מדיום טרי, ולדגור ב-37 מעלות צלזיוס לצפיפו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים