אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:41 דק׳ • July 8th, 2025
השרו טחול ובלוטות לימפה של עכבר על מסננת תאים. יש לשטוף את המסננת עם מאגר מתאים לאיסוף טחול ולימפוציטים.
דגרו על התאים עם קוקטייל נוגדנים ביוטיניליים ומיקרו-חרוזים אנטי-ביוטיניים מגנטיים הנקשרים לתאים שאינם CD8+.
העבירו את מתלה התאים דרך עמוד מגנטי. בשל הכוח המגנטי, התאים שאינם CD8+ הקשורים לחרוזים נקשרים לדופן העמודה בעוד שתאי CD8+ T נפלטים החוצה.
דגרו על התאים המנופחים עם תאים מציגי אנטיגן מלאכותיים, aAPCs. אלו הם ננו-חלקיקים מגנטיים המתפקדים עם חלבון היתוך קומפלקס-אימונוגלובולין טעון אנטיגן, MHC-Ig ונוגדנים נגד CD28.
ה-MHC-Igs הטעונים באנטיגן נקשרים לקולטנים נפרדים בתאי CD8+ T הספציפיים לאנטיגן. הנוגדנים נגד CD28 מקיימים אינטראקציה עם קולטני CD28 של תאי T, ומתחילים את הפעלת תאי T.
הנח את הצינור המכיל ננו-חלקיקים מגנטיים ותערובת תאים על מעמד מגנטי. תאי CD8+ T הקשורים ל-aAPC נמשכים לשדה המגנטי, בעוד שתאי CD8+ T לא ספציפיים נשארים תלויים. הסר את ה-supernatant.
הסר את הצינור מהמעמד המגנטי. השעו מחדש את התאים הקשורים ל-aAPC במדיה המכילה גורם גדילה של תאי T. זרעו אותם בצלחת מרובת בארות.
גורמי הגדילה גורמים להתרחבות תאי CD8+ T ספציפיים לאנטיגן.
כדי לבודד תאי T חיוביים ל-CD8 ספציפיים לאנטיגן, יש להשרות את הטחול ובלוטות הלימפה מעכברי C57Black/6j מסוג בר דרך מסננת תאים סטרילית של 70 מיקרו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים