טכניקה לבידוד תאי פיטום ראשוניים מחלל הצפק המורין

תאי פיטום - תאי דם לבנים המכילים גרגירים ציטופלזמיים מלאים במתווכים דלקתיים - ממלאים תפקיד מרכזי בתגובות חיסוניות מולדות ונרכשות.

כדי לבודד תאי פיטום מסוג רקמת חיבור מחלל הצפק - חלל מלא בנוזל המאכלס איברי בטן - קח עכבר שעבר המתת חסד קבוע במצב שכיבה. בצע חתך אורכי עד עצם החזה, וחשוף את דופן הבטן.

חלל הצפק נמצא מתחת לדופן הבטן, ומכיל נוזל המכיל מספר תאים חיסוניים כולל מקרופאגים, לימפוציטים, לויקוציטים פולימורפו-גרעיניים ותאי פיטום.

כדי לבודד את התאים על ידי שטיפת הצפק - שאיבת התוכן התוך-צפקי - הזריק מצע גידול קר כקרח לחלל הצפק מבלי לנקב את האיברים, והימנע מדליפת דם. המדיום הקר מסייע בשמירה על כדאיות התאים.

נער בזהירות את העכבר למשך זמן מתאים, ערבב את תאי החיסון עם המדיום. הכנס מזרק ריק לחלל. שאפו לאט את המדיום - וחזרו את רוב הנוזל המוזרק לתפוקה תאית טובה יותר.

העבר את מתלה התאים לצינור איסוף. צנטריפוגה כדי לזרז את התאים ככדור. השליכו את הסופרנטנט. השעו מחדש את הגלולה במדיום מתאים.

צלחת את התאים ודגרה אותם בתנאים פיזיולוגיים, מה שמאפשר לתאים להיצמד לכלי התרבית. הוסף ציטוקינים ספציפיים הנקשרים לקולטנים שלהם על תאי הפיטום, וגורמים לשגשוג תאים.

התאים המתרבים מוכנים לבדיקות במורד הזרם.

כדי להתחיל בהליך זה, יש לרסס את העכבר המורדם באתנול 70%, ולקבע אותו על גוש קצף כשהצד הגבי שלו כלפי מטה ב