אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:28 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לתייג רדיו עוזר T של עכברים, לימפוציטים Th הנושאים קולטן תאי T, TCR, ספציפי לפפטיד אובאלבומין עוף, לוקחים צינור המכיל נוגדנים חד שבטיים עם תווית רדיו, mAbs, עם הפעילות הרדיואקטיבית הרצויה.
ה-mAb מורכב מ-mAb עכברי ספציפי ל-TCR המתבטא על קרום הלימפוציטים Th של העכבר. כלאטור מצמיד את ה-mAb ואיזוטופ נחושת פולט פוזיטרונים, ויוצר קומפלקס יציב.
יש לדלל את ה-mAbs עם תווית הרדיו במי מלח. לאחר מכן, הוסף את ה-mAbs המדולל עם תווית הרדיו לצלחת מרובת בארות המכילה תרחיף לימפוציטים Th. דגירה קצרה.
בתוך התרבית, ה-mAbs המסומנים ברדיו נקשרים ל-TCRs על ממברנות הלימפוציטים Th. לאחר הדגירה, העבירו את תרחיף התא לצינור חדש.
צנטריפוגה. השליכו את הסופרנטנט המכיל נוגדנים לא קשורים עם תווית רדיו. השעו מחדש את לימפוציטים Th במדיום והעבירו לצלחת מרובת בארות. דגירה למשך זמן ממושך.
קשירת ה-mAb-TCR המסומנת ברדיו גורמת לגיוס חלבון מתאם לצד הציטופלזמי של קרום הפלזמה, אליו נקשרים טריסקלונים של קלתרין ויוצרים בור מצופה קלתרין.
חלבונים נלווים עוזרים לצבוט את השלפוחית מקרום הפלזמה, מה שמקל על הפנמת קומפלקס ה-mAb-TCR המסומן ברדיו לתוך הציטופלזמה. בסופו של דבר, TCRs מתבטאים מחדש על ממברנות הלימפוציטים Th.
לימפוציטים Th המסומנים ברדיו מוכנים לניסויים נוספים.
עבור תיוג רדיו של תאי TH1 ספציפיים לאובאלבומין עוף, השתמש תחי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים