אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 7:01 דק׳ • July 8th, 2025
גורם מגרה מושבת גרנולוציטים-מקרופאגים, GM-CSF מופרש על ידי תאי T helper המייצרים GM-CSF או תאי THGM. תאים אלה מראים ביטוי נמוך של ציטוקינים ספציפיים לתאי T מסייעים אחרים.
כדי להתחיל בהתמיינות במבחנה של תאי THGM, קח תרחיף תאי T מסייע - מבודד מטחול העכבר - המכיל תאים בוגרים המופעלים על ידי אנטיגן ותאים נאיביים לא ממויינים.
הוסף נוגדנים עם תווית פלואורסצנטית המכוונים לסמני פני שטח אופייניים של התאים הנאיביים והבוגרים. בצע מיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות כדי לבודד את תאי ה-T הנאיביים.
צלחת את התאים בבאר מצופה בנוגדנים הנקשרים לקומפלקס הקולטן של תאי T. הוסף נוגדן שנקשר לקולטן הגירוי המשותף. הקישור הסינרגטי מפעיל את התאים.
הוסף אינטרלוקין 7 - ציטוקין - הגורם להתמיינות לתאיTHGM וייצור GM-CSF. הוסף פורבול מיריסטאט אצטט, PMA - תרכובת פרו דלקתית, יונומיצין - יונופור סידן ומעכב הובלת חלבון.
PMA נכנס לתא ומפעיל חלבון קינאז. היונומיצין החדיר לממברנה מעביר את יוני הסידן בתוך התא - ומעלה את ריכוז הסידן התוך-תאי.
הפעלת החלבון קינאז ורמת סידן גבוהה יוזמים אותות המגרים מחדש אתתאי ה-T.H.GM - וכתוצאה מכך ייצור GM-CSF גבוה יותר. מעכב הובלת החלבון חוסם את הפרשת GM-CSF, ומסייע לזיהוי תוך-תאי.
בצע צביעה אימונופלואורסצנטית, זיהוי ציטוקינים תוך-תאיים וניתוח התאים באמצעות ציטומטריית זרימה. רוב התאים המ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים