טכניקת מבחנה לחקר טיפולים אנטי-מיקרוביאליים על אגרגטים חיידקיים

כדי לחקור את ההשפעה של אנטי-מיקרוביאלים על אגרגטים של חיידקים, קח תרבית Pseudomonas aeruginosa במצע גידול המקדם היווצרות אגרגטים - המדמה צמיחה במהלך זיהום.

החיידקים המהונדסים מבטאים חלבון פלואורסצנטי לזיהוי אגרגט במיקרוסקופ פלואורסצנטי. תמונה בתלת מימד כדי לחשב את נפח האגרגטים, או הביומסה החיידקית, ולדמיין את הגידול בביומסה לאורך זמן, מה שמעיד על צמיחת חיידקים.

הוסיפו קוליסטין - פפטיד אנטי-מיקרוביאלי קטיוני - בריכוז תת-קטלני שהורג חיידקים רגישים תוך בחירת החיידקים העמידים לאנטיביוטיקה.

קוליסטין נקשר לליפופוליסכרידים בעלי מטען שלילי, או LPS, על הממברנה החיצונית של החיידקים, ומחליף גשרים קטיוניים המייצבים את ה-LPS חד-שכבתי - ופוגעים בשלמות הממברנה.

קוליסטין נכנס לפריפלזמה ונקשר ל-LPS על קרום התא, משבש את הממברנה וכתוצאה מכך ליזה של תאים. כמנגנון נגד, מוטציות גנטיות ספציפיות בתת-קבוצה של חיידקים מנטרלות את המטען השלילי של LPS. שינוי זה מעכב את האינטראקציה האלקטרוסטטית של קוליסטין קטיוני עם LPS פחות אניוני - ומונע מוות של תאים.

תמונה להמחשת ירידה בביומסה עם הזמן, המציינת את ההשפעה של האנטי-מיקרוביאלי. הוסף פרופידיום יודיד או PI - צבע פלואורסצנטי - שנכנס דרך הממברנה הפגועה כדי לקשור DNA, ומסמן רק את התאים המתים.

בצע מיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות, או FACS, המפריד בין תאים רגישים