הדמיה של מיטוכונדריה עצבית באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק-פנים סדרתי

קחו קטע רקמת מוח של עכבר קצוץ וממוטבע בשרף המכיל את ההיפוקמפוס.

החלק מוכתם במתכות כבדות כדי לשפר את הניגודיות במיקרוסקופ אלקטרונים.

הרכיבו את החלק על סיכת אלומיניום באמצעות דבק ציאנואקרילט.

צפו את דפנות הבלוק במשחת כסף קולואידית כדי ליצור נתיב מוליך לפין האלומיניום.

בדקו את בלוק הרקמה באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק בלוק סדרתי (SBFSEM).

בתוך ה-SBFSEM, האולטרה-מיקרוטום פורס את הבלוק ברצף לשכבות דקות במיוחד בעוד קרן אלקטרונים במתח נמוך סורקת את המשטח החשוף.

גלאי אלקטרונים מפוזר לאחור לוכד תמונות דו-ממדיות ברזולוציה גבוהה, וחושף את המיטוכונדריה ואת המבנים התאיים שמסביב.

באמצעות תוכנה מתאימה, התאם את הבהירות והניגודיות כדי לשפר את בהירות התמונה.

יישר את התמונות הרציפות כדי לשחזר נפח תלת-ממדי של רקמת המוח. שחזור תלת מימד זה מאפשר מיפוי מדויק של המורפולוגיה המיטוכונדריאלית, ההתפלגות המרחבית והקשרים ביניהם בתוך תאים עצביים.

חתוך את הדגימות לאזור העניין והרכיב אותן על סיכת אלומיניום באמצעות דבק-על ציאנואקרילט ג'ל. לאחר מכן מצפים את הדגימה במשחת כסף קולואידית סביב צידי הבלוק כדי לספק נתיב מוליך לסיכת האלומיניום. בדוק את דגימות הרקמה באמצעות מערכת מיקרוסקופ אלקטרונים סורק המצוידת בשלב אולטרה-מיקרוטום בתוך החדר וגלאי אלקטרונים מפוזר לאחור בקילו-וולט נמוך.

צלמו את הדוגמאות עם הגדרות אלה. התחל את הניתוח על-ידי בחירת סוג תמונה, ולאחר מכן 8 סיביות כדי להמיר את התמונות לתבנית TIFF של 8 סיביות מ- 16 סיביות הקניינית המקורית. אם המרת ניגודיות ו/או בהירות אוטומטית בשלב זה אינה אידיאלית לתמונות, פתחו מחדש את תמונות 16 הסיביות ולחצו על התמונה. התאם את ניגודיות הבהירות.

בחר טווח שמתאים לכל התמונות ולחץ על Apply. לאחר מכן בצע את ההמרה. אם הייתה תנועת תמונה לא מקובלת בין פרוסות, יישר את אוספי התמונות על-ידי בחירה ב-Plug-ins, Registration ויישור מחסנית ליניארית עם SIFT והגדר את היישור למצב תרגום בלבד ולא לגוף קשיח.

הגדל את גודל בד הציור לפני הרישום על-ידי בחירה באפשרות התאמת גודל בד הציור של התמונה. לחלופין, צמצם את התמונה לאזור עניין על-ידי בחירת האזור הרצוי ולאחר מכן חיתוך. במידת הצורך, שנה את קנה המידה של התמונות לגודל קטן יותר וקל יותר לניהול באמצעות תמונה j, ולאחר מכן בחר תמונה וקנה מידה.