Name: השרשה של קאף הראש מפעילה שאר מתח טרשת עורקים המושרה עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: חקור שיטה ליצירת טרשת עורקים בעכברים באמצעות שתלת חפת קונית בכלי הדם הצווארי. המודל מאפשר ניתוח השפעת מתח גזיר שונה על התפתחות הלקויות והתגובות הדלקתיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך בחלקו על ידי דויטשה Forschungsgemeinschaft (DFG), GZ פרויקט PI 771/1-1; SFB 656 &quot;מולקולרית והדמיה לב וכלי דם&quot;, מינסטר, גרמניה (פרויקטים C6, Z2, B3, ו PM3); האיחוד האירופי נואי &quot;אבחון הדמיה מולקולרית, דימי &quot;(WP 11.1 ו -11.2). המחקר מומן גם על ידי קרן הלב הבריטית, בריטניה בחלקו.

1. הכנת מתקן מתח גזירה (השרוול) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתקן מתח גזירה מורכב משני חצאים האורך של גליל עם לומן בצורת חרוט. פגזים המחצית עשויים polyetherketone תרמופלסטיים המיוצרים על ידי הליך הליהוק פלסטיק. גורמים משתתפים נשלחות בזמן עדיין מחובר הרץ. לפיכך, חצאים צריך להיות מנותקים לפני השימוש. הטיל מכיל קליפות חצי בגדלים שונים הנעים בין 150 מיקרומטר - 300 מיקרומטר (קוטר פנימי הנמוך ביותר בסוף במורד הזרם). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה השרוול צריכה להתבצע תחת מיקרוסקופ כירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את החצי שרוול פגז עם מלקחיים בוטה בעדינות לחתוך אותו מן השחקנים באמצעות אזמל חד. הליך זה יוביל לחצי מבשרי פגז אשר צריך להיות מעובד יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הף מבשר על הצלחת אפילו לא חלקלק; לתקן את זה עם מלקחיים בוטה לחתוך אותו בדיוק לאורך החתך preformed כדי remove סוף סגור. זו תניב חצי שרוול פגז מוכן לשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפיקוח על חצאים מתחת למיקרוסקופ בעדינות להסיר כל קצוות חדים הנותרים. לומן הפנימי חרוטי חיונית גרימת איכויות שונות של לחץ בתוך גזירה, במעלה או במורד השרוול של המושתל. חריץ על פני השטח החיצוני של חצאים פועל בניצב לומן הפנימי משמש מנחה עבור חוט אשר בסופו של דבר המקלות חצאים יחד כדי ליצור את השרוול תפקודית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות חצאים השרוול, מסווגים לפי גודל, באתנול 70%. </li></ol> 2. להשתיל את השרוול סביב עורק הצוואר הימני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים ApoE נוקאאוט צריך להיות סביב 10 שבועות של גיל במשקל של לפחות 20 גרם. אם התפתחות פלאק יש לחקור תחת דיאטה כולסטרול גבוה, החל כגון דיאטה סוג המערבי 4 שבועות לפני ההשתלה השרוול מומלץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליך כירורגי כל צריךלהתבצע תחת לפחות חצי סטרילי תנאים: לבשי חלוק הניתוחים, מסכה, כובע וכפפות סטריליות. לחטא את המכשירים עבור 30 שניות מעקר מכשיר חרוז ומניחים אותם על גיליון אטום סטרילית. היזהרו! מכשירים צריך להתקרר לפני השימוש! </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקמו את העכבר בתא הרדמה אינדוקציה מלא 3% isoflurane עד שהוא מורדם לחלוטין. בדיקת עומק של הרדמה עם תגובה לצבוט הבוהן. לחלופין, ניתן לבצע הרדמה עם זריקה (IP) intraperitoneal של קטמין (80 מ"ג / ק"ג) ו Xylazine (10 מ"ג / ק"ג) או הרדמה חלופי שאושר על ידי IACUC. עבור הזרקה ip, להחזיק את העכבר במצב פרקדן ולהזריק ההרדמה ברבע התחתון השמאלי של הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר על צלחת מחוממת כירורגית, במצב שכיבה. על מנת למנוע את עיני פועל יבש להרטיב אותם עם משחה העין (למשל Bepanthen קרם העיניים והאף). מורחים את הקדמי ואת הכפות האחוריות, קלטת אותם לצלחת. אם ביצוע הרדמה isoflurane, את זרימת הגז נרקוטיים (2% isoflurane) חייב להיות מסופק באמצעות מסכה מכרסם קטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת שיער בין הלסת התחתונה ואת עצם החזה על ידי סוכן או מקריח יישום (למשל Pilca מד) או באמצעות קנס מכונת גילוח חשמלית (למשל Wella Contura). גילוח חייב להתבצע בזהירות כדי למנוע עור מעצבן. אם באמצעות סוכן מקריח, לתת לו 1-2 דקות בשביל לחדור את השיער, לאחר מכן, לשפשף בעדינות עד שכל השיער סוכן מקריח מוסר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האם מוכן מוכן בעבר half השרוול פגזים בגדלים שונים (שניים בכל גודל) ו 2.5 ס"מ באורך פיסת תפר 6-0 משי מקשרות את הפגזים וחצי באתר של חסימת עורק התרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את השדה הפעלה עם כמות ליברלית של בבטאדין. השתמש במספריים חדים קטן כדי לפתוח את העור ואת fascia הבסיסית של הצוואר על ידי חתך 4-5mm המדיאלי החל מהחלק העליון של עצם החזה (manubrium). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרחב את הפתיחה שלhift בלוטת הפרוטיד ימין הצידה להוסיף מפזר כירורגית. אז בבוטות לנתח לתוך עמוק, עזב רק של קנה הנשימה (מתצוגת מנתחים), שבו השריר sternomastoideus זכות חוצה את השריר omohyoid הנכון, עד שתוכלו לזהות את הראש הפועם המשותף הנכון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מלקחיים או בזווית מעוגלת יפה מאוד (למשל דומון # 5 / 45), לנתח את עורק התרדמה המשותף הימני בעדינות על ידי הסרת רקמת החיבור שמסביב. הפרד את הראש מן העצב התועה - אובייקט לבן, סיבי פועל ישירות לאורך התרדמה - צעד זה הכרחי לחלוטין לחשוף את כלי השיט. היזהר לא לפגוע העצב התועה ולא סניף של וריד הצוואר השמאלי הפנימי, שהוא גם בקשר קרוב הראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לבחור את גודל השרוול הימני, להשוות את הקוטר של הראש החשוף בקוטר הפנימי של השרוול חצאים: רוחבו הגדול ביותר של לומן האזיקים צריך לפגוש את הקוטר החיצוני של הראש. </li> כעת, בזהירות את קצה מלקחיים תחת הראש, לפתוח את מלקחיים, חוט פיסת תפר 6-0 משי תחת הראש ואת צורת לולאה. בין לולאה לבין מקום התרדמה one השרוול פגז וחצי מתחת הראש. הצד של היצרות הגדול חייב להיות במורד הזרם. <li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את מעטפת המחצית השנייה השרוול בתוך הלולאה על גבי הראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדק בעדינות את הלולאה תפר באמצעות מלקחיים תפירת ואת הצומת חוט. בכך גזירה משנה את התפקוד הלחץ נוצר. למדידה מדויקת של החפת זה הכרחי כי תפר פועל בדיוק בתוך החריץ preformed על פני השטח החיצוני של השרוול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את בלוטת הפרוטיד זכות חזרה למיקום המקורי שלה, המקורב ולסגור את העור או באמצעות כמות קטנה של תפר 6-0 prolene או, לחילופין, ניתן להשתמש קליפים הפצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק מנה בודדת של Carprofen 5 מ"ג / ק"ג (למשל Rimadyl) מתחת לעור על מנת לספק טיפול מניעתי ואת מקום הכאבהעכבר בתא ההתחממות עד משחזרת. בדרך כלל זה לוקח 30-60 דקות כאשר בהרדמה קטמין / Xylazine. בעת שימוש isoflurane משאיפת הרדמה תקופת התאוששות קצרה יותר באופן משמעותי (10-20 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניסיוננו, חיות להחזיר פעילות unstressed נורמלי בתוך 24 השעות הראשונות לאחר ההשתלה השרוול עם התערבות מתבצע על ידי מנתח מנוסה. עם זאת, אם בעל החיים נראה במצוקה אפילו יום אחד לאחר הניתוח, לחזור על הטיפול משכך כאבים ולהתייעץ עם צוות וטרינרי. </li></ol> 3. Explanting השרוול ואת עורקי הראש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניתוח היסטולוגית עורקי הראש צריך להיות שנקטפו בסוף תקופת התצפית. לפני שמתחילים explantation, החיה צריך להיהרג בהתאם להנחיות IACUC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם את החצי פגזים השרוול נועדו לשימוש חוזר, להסיר בזהירות את כל שברי רקמות חיבור תפר מאלמנטים פלסטיק, דיסsecting של עורקי הראש, לשטוף ולאחסן את הפגזים חצי פתרון אלכוהול 70%. ראוי לזכור כי השרוול מוטבע הידבקויות רקמת החיבור לאחר מספר שבועות של ההשתלה כי יש לנתח את השרוול בזהירות כדי לא לפגוע בקירות כלי שיט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין, השרוול יכול להיות explanted ומוטבעים יחד עם עורק הצוואר. חומר פלסטי של השרוול הוא עמיד פתרונות קיבעון ממיסים נורמלי משמש להטבעת פרפין. כמו כן, דגימות המוטבע ניתן לחתוך באמצעות microtome נורמלי מצויד להבים רגילים. </li></ol> 4. נציג תוצאות השרוול צריך להיות ממוקם תמיד סביב אחד משני עורקי הראש המשותף של בעל חיים (איור 1A, 1B) - הצד הנגדי משמש כביקורת. על התמונה מציגה את שני פגזים חצי שרוול (איור 1B) צורה חרוטית של לומן הפנימי גלוי. זו צורה חרוטית חיונית establishing שלושת האזורים עם זרימת הדינמיקה ברורה. טיפוסי דפוסי מתח גזירה הנגרמת על ידי השחקנים מחושב ממדידות דופלר 11 ואת מהירויות זרימת המקביל מבוסס על שלב לעומת מהירות MR הדמיה 12 מקבלים באיור 2. כאשר השרוול הוא מושתל עכברים בנוקאאוט ApoE תזונה סוג המערבי הזרימה משתנה הדינמיקה גזירה הנגרמת לעורר מתח בתצהיר פלאק טרשת עורקים (איור 3): Upstream של מתח חרוטי נמוך התכווצות למינרית גזירה מוביל להתפתחות מסיבית של פלאק טרשת עורקים של יותר פנוטיפ פגיע, המאופיינת ליבות השומנים קרוב לומן המרכזי מכוסה רק על ידי כובע סיביים דקים (איור 3A1). לומן הפנימי חרוטי של השרוול שמוביל לעלייה מהירות הזרימה. כמעט אין בתצהיר פלאק הוא ציין בתחום זה. במורד הזרם ישירות באתר של צוואר הבקבוק מיידית הרחבת התוצאות עורק באזור של מערבולות ו פלו oscillatoryw פרמטרים, מה שגורם להתפתחות פלאק המורחבת של פנוטיפ פחות יציבה יותר (כלומר, ליבות פחות שומנים אשר מקומי קרוב יותר לאמצעי התקשורת). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3308/3308fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> איור 1 צירוף מתח גזירה - הרכבה מיקום (א) ציור סכמטי של האזיק מושתל:.. השרוול ממוקם סביב עורק התרדמה המשותף הימני (RCCA) - הצד הנגדי (LCCA = שמאל העורק הראשי משותף) משמש בקרה . (ב) vivo MRI אנגיוגרפיה בעכבר: ב הקרנת העוצמה המקסימלית של שלושה ממדי הזמן של הטיסה MR אנגיוגרפיה התכווצות חרוטי המושרה על ידי השחקנים (חץ לבן) נראה (לפרטים ראו 12). (H = ראש, F = מטר, R = ימין, L = שמאל). בפינה הימנית העליונה להציג מקרוסקופית על לומן הפנימי ואת המשטח החיצוני של חצאים השרוול הוא נתון. כאשר התאספו, שני חצאים יוצרים גליל חרוטי, אשר משנה הזרימה הדינמיקה בתוך כלי השיט בצורה מוגדרת. כדי להבטיח את ההתאמה הנכונה, חריץ על פני השטח החיצוני של השרוול (חץ צהוב) משמש מנחה עבור תפר המקשר. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3308/3308fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> באיור 2. אזורים שונים של דינמיקה זרימת מתח גזירה. השרשה של השרוול הדינמיקה תזרים משנה ומתח גזירה לאחר מכן בעורק הראש מכווץ באופן מוגדר. באיור הסכמטי העליון המאפיינים את זרימת שונים מצוינים ואת הערכים משוער המקומית מתח גזירה מקבלים (מבוסס על מדידות דופלר 11). להלן, מהירויות זרימת המקביל חיה אחת נמדד על ידי בדיקת MRI במעלה הזרם של השרוול מושתל מוצגים תמונה-MRI T1-משוקלל חתך של הצוואר (שלב בניגוד הדמיה מהירות, לפרטים ראה 12). &gt; <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3308/3308fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> באיור 3. הלחץ שאר המושרה התפתחות פלאק בעכברים בנוקאאוט ApoE. בפינה השמאלית העליונה מראה את התצוגה מקרוסקופית על הצוואר נפתחה חשוף עורקי הראש של העכבר בנוקאאוט ApoE תחת דיאטה גבוה (סוג המערבי) שומן 8 שבועות לאחר ההשתלה של מתח גזירה משנה סביב עורק התרדמה המשותף הימני (RCCA). אזור לבן אטום של כלי השיט (*) במעלה הזרם של השרוול מתאים לאתר של בתצהיר נרחב פלאק טרשת עורקים. החץ הצהוב מציין את חוט המשלבת את שני חצאי השרוול. לעומת זאת, אין סימנים של בתצהיר פלאק העורק הכלילי השמאלי משותף (LCCA). (א) - (ג) נציג HE מוכתם חתכי רוחב של עורק התרדמה המשותף הימני של העכבר בנוקאאוט ApoE תחת דיאטה סוג המערבי 8 שבועות לאחר ההשתלה של השרוול. האיור הסכמטי נותן המטוסים המקביל (קווים מקווקווים) wherדואר הסעיפים אותרו. (א) Upstream של טרשת עורקים השרוול שמוביל בתצהיר פלאק מסיבי. ליבות השומנים גדול (חצים אדומים), אשר בחלק ממוקמים בקרבת מרכזי לומן (פרט A1) לאפיין את אופי הפגיעה של השלטים האלה. (ב) מטוס של צוואר הבקבוק השרוול כמעט שום התפתחות פלאק ברור, בעוד הזרם ישירות של השרוול (ג) תזרים oscillatory מוביל מתונה התפתחות פלאק מסוג יציב יותר (כלומר פחות שומנים ליבות או לא). (C1, C2 = פגזים מחצית השרוול, P = הפלאק, כוכבית = כלי לומן)

<ol><li>Chiu, J. J., Chien, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+disturbed+flow+on+vascular+endothelium%3A+pathophysiological+basis+and+clinical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Effects of disturbed flow on vascular endothelium: pathophysiological basis and clinical perspectives.</a> Physiol. Rev. 91, 327-387 (2011).</li>
<li>Cunningham, K. S., Gotlieb, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+shear+stress+in+the+pathogenesis+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Invest%22%5BJournal%5D)">The role of shear stress in the pathogenesis of atherosclerosis.</a> Lab. Invest. 85, 9-23 (2005).</li>
<li>Ali, F., Zakkar, M., Karu, K., Lidington, E. A., Hamdulay, S. S., Boyle, J. J., Zloh, M., Bauer, A., Haskard, D. O., Evans, P. C., Mason, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+the+cytoprotective+enzyme+heme+oxygenase-1+by+statins+is+enhanced+in+vascular+endothelium+exposed+to+laminar+shear+stress+and+impaired+by+disturbed+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Induction of the cytoprotective enzyme heme oxygenase-1 by statins is enhanced in vascular endothelium exposed to laminar shear stress and impaired by disturbed flow.</a> J. Biol. Chem. 284, 18882-18892 (2009).</li>
<li>Hastings, N. E., Simmers, M. B., McDonald, O. G., Wamhoff, B. R., Blackman, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerosis-prone+hemodynamics+differentially+regulates+endothelial+and+smooth+muscle+cell+phenotypes+and+promotes+pro-inflammatory+priming%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Atherosclerosis-prone hemodynamics differentially regulates endothelial and smooth muscle cell phenotypes and promotes pro-inflammatory priming.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 293, C1824-C1833 (2007).</li>
<li>Zheng, J., Abendschein, D. R., Okamoto, R. J., Yang, D., McCommis, K. S., Misselwitz, B., Gropler, R. J., Tang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI-based+biomechanical+imaging%3A+initial+study+on+early+plaque+progression+and+vessel+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Imaging%22%5BJournal%5D)">MRI-based biomechanical imaging: initial study on early plaque progression and vessel remodeling.</a> Magn. Reson. Imaging. 27, 1309-1318 (2009).</li>
<li>Stone, P. H., Coskun, A. U., Kinlay, S., Clark, M. E., Sonka, M., Wahle, A., Ilegbusi, O. J., Yeghiazarians, Y., Popma, J. J., Orav, J., Kuntz, R. E., Feldman, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+endothelial+shear+stress+on+the+progression+of+coronary+artery+disease%2C+vascular+remodeling%2C+and+in-stent+restenosis+in+humans%3A+in+vivo+6-month+follow-up+study%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Effect of endothelial shear stress on the progression of coronary artery disease, vascular remodeling, and in-stent restenosis in humans: in vivo 6-month follow-up study.</a> Circulation. 108, 438-444 (2003).</li>
<li>Pedersen, E. M., Oyre, S., Agerbaek, M., Kristensen, I. B., Ringgaard, S., Boesiger, P., Paaske, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+early+atherosclerotic+lesions+in+the+human+abdominal+aorta+correlates+with+wall+shear+stresses+measured+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Vasc.+Endovasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Distribution of early atherosclerotic lesions in the human abdominal aorta correlates with wall shear stresses measured in vivo.</a> Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 18, 328-333 (1999).</li>
<li>Buchanan, J. R., Kleinstreuer, C., Truskey, G. A., Lei, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+between+non-uniform+hemodynamics+and+sites+of+altered+permeability+and+lesion+growth+at+the+rabbit+aorto-celiac+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Relation between non-uniform hemodynamics and sites of altered permeability and lesion growth at the rabbit aorto-celiac junction.</a> Atherosclerosis. 143, 27-40 (1999).</li>
<li>Nam, D., Ni, C. W., Rezvan, A., Suo, J., Budzyn, K., Llanos, A., Harrison, D., Giddens, D., Jo, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+carotid+ligation+is+a+model+of+acutely+induced+disturbed+flow%2C+leading+to+rapid+endothelial+dysfunction+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, 1535-1543 (2009).</li>
<li>Cheng, C., van Haperen, R., de Waard, M., van Damme, L. C., Tempel, D., Hanemaaijer, L., van Cappellen, G. W., Bos, J., Slager, C. J., Duncker, D. J., van der Steen, A. F., de Crom, R., Krams, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shear+stress+affects+the+intracellular+distribution+of+eNOS%3A+direct+demonstration+by+a+novel+in+vivo+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Shear stress affects the intracellular distribution of eNOS: direct demonstration by a novel in vivo technique.</a> Blood. 106, 3691-3698 (2005).</li>
<li>Cheng, C., Tempel, D., van Haperen, R., van der Baan, A., Grosveld, F., Daemen, M. J., Krams, R., de Crom, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerotic+lesion+size+and+vulnerability+are+determined+by+patterns+of+fluid+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Atherosclerotic lesion size and vulnerability are determined by patterns of fluid shear stress.</a> Circulation. 113, 2744-2753 (2006).</li>
<li>van Bochove, G. S., Straathof, R., Krams, R., Nicolay, K., Strijkers, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI-determined+carotid+artery+flow+velocities+and+wall+shear+stress+in+a+mouse+model+of+vulnerable+and+stable+atherosclerotic+plaque%5BTitle%5D)+AND+%22MAGMA%22%5BJournal%5D)">MRI-determined carotid artery flow velocities and wall shear stress in a mouse model of vulnerable and stable atherosclerotic plaque.</a> MAGMA. 23, 77-84 (2010).</li>
<li>Cuhlmann, S., Van der Heiden, K., Saliba, D., Tremoleda, J. L., Khalil, M., Zakkar, M., Chaudhury, H., Luong, L. A., Mason, J. C., Udalova, I., Gsell, W., Jones, H., Haskard, D. O., Krams, R., Evans, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disturbed+Blood+Flow+Induces+RelA+Expression+via+c-Jun+N-Terminal+Kinase+1%3A+A+Novel+Mode+of+NF-%7Bkappa%7DB+Regulation+That+Promotes+Arterial+Inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Disturbed Blood Flow Induces RelA Expression via c-Jun N-Terminal Kinase 1: A Novel Mode of NF-{kappa}B Regulation That Promotes Arterial Inflammation.</a> Circ. Res. 108, Forthcoming (2011).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

כדי למזער וריאציה ניסיוני מומלץ לעבוד עם בעלי חיים גיל כמעט זהה עם ההיסטוריה תזונה זהה. תחקיר שפורסם לאחרונה מוכיח כי מתקן מתח להחיל גזירה בעכברים wildtype יכול להיות מודל טוב חקירת תפקוד האנדותל תגובות דלקתיות מוקדם המושרה על ידי זרם שונה דינמיקת 13. עם זאת, חקירה של התפתחות טרשת עורקים פלאק hyperlipidemic מודלים עכבר מהונדס (למשל העכבר בנוקאאוט ApoE) נדרשים. התקדמות וההיקף של בתצהיר פלאק כל דגם העכבר תלויים בסוג של דיאטה בשימוש. באופן כללי, תוכן כולסטרול גבוה / שומן ש...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> הלחץ משנה גזירה (polyetherketone) </td><td> Promolding BV <a href="http://promolding.nl">http://promolding.nl</a> </td><td> מטיל נשלחות בזמן עדיין מחובר הרץ. לפיכך, אחד האלמנטים חייבים להיות מנותקים לפני השימוש. </td></tr></tbody></table>

השרשה של קאף הראש מפעילה שאר מתח טרשת עורקים המושרה עכברים

Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

מקובל כי שינויים גזירה הלחץ בכלי הדם לעורר את הביטוי של גנים דלקתיים בתאי האנדותל ובכך לגרום לטרשת עורקים (הנסקרת ב 1 ו -2). תפקידה של מתח גזירה נחקרה בהרחבה במבחנה חוקרת את ההשפעה של זרימה על הדינמיקה לתאי אנדותל בתרבית 1,3,4 ו - in vivo בבעלי חיים גדולים ובני אדם 1,5,6,7,8. עם זאת, לשעתקו מאוד במודלים של בעלי חיים קטנים המאפשר חקירה שיטתית של השפעת הלחץ גזירה על התפתחות פלאק הם נדירים. לאחרונה, הציג נאם et al. 9 במודל עכבר שבה קשירת הענפים של עורק הצוואר יוצר אזור של זרם נמוך oscillatory. אף על פי מודל זה גורם תפקוד האנדותל היווצרות מהירה של טרשת עורקים בעכברים hyperlipidemic, לא ניתן לשלול כי התגובה הדלקתית הוא ציין, לפחות בחלקה, תוצאה of אנדותל ו / או נזק לכלי בשל קשירת. כדי למנוע מגבלות כאלה, חפתים מתח גזירה שינוי פותחה על סמך דינמיקה של נוזלים מחושב, אשר חרוט לומן הפנימי בצורת נבחרה כדי ליצור אזורים מוגדרים של מתח נמוך, גזירה גבוהה oscillatory בתוך עורק התרדמה המשותף 10. על ידי יישום מודל זה אפוליפופרוטאין E (ApoE) נוקאאוט בעכברים שקיבלו כולסטרול גבוה המערבי דיאטה סוג, לפתח נגעים של כלי הדם במורד הזרם מן השרוול. הפנוטיפ שלהם היא בקורלציה עם הדינמיקה האזורית תזרים 11 כפי שאושרו על ידי הדמיה vivo תהודה מגנטית (MRI) 12: הלחץ גזירה נמוכה למינרית במעלה הזרם של השרוול גורם להיווצרות פלאק נרחב של פנוטיפ פגיע יותר, ואילו oscillatory מתח הזרם גזירה של השרוול גורם טרשת עורקים יציבה 11. באותם אזורים של מתח גזירה גבוהה וזרימה למינרית גבוה בתוך השרוול,בדרך כלל אין פלאק טרשת עורקים הם נצפו. לסיכום, נוהל גזירה מתח שינוי השרוול היא גישה כירורגית אמין לייצר טרשת עורקים שונים phenotypically ב-ApoE לקוי בעכברים.

השרוול הצרת המוצגים במאמר זה נועד לגרום לטרשת עורקים בעורק התרדמה Murine משותף. בשל בצורת חרוט של לומן הפנימי שלה את האזיק מושתל יוצרת אזורים מוגדרים היטב של מתח נמוך, גזירה גבוהה oscillatory מפעילה את התפתחות טרשת עורקים של פנוטיפים דלקתיות שונות.

מקובל רחבים כי שינויים במאמץ הגזירה העורקי מעוררים את הביטוי של גנים דלקתיים בתאי אנדותל ובכך משרים...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא להשתיל משנה מאמץ גזירה סביב אחד משני העורקים הקרוטידיים המשותפים במודל עכביש של אתרוסקלרוזיס. דבר זה מושג תחילה על ידי חיתוך שני חצאים אורכיים של משנה מאמץ הגזירה מתוך תבנית של polyether ketone. לאחר מכן, צווארו של העכבר הניסויי נפתח ואחד משני העורקים הקרוטידיים המשותפים נחשף.שני חצאי מעטפת מונחים סביב שני העורקים הגרוניים השכיחים (common carotid arteries), וחצאי המעטפת מחוברי זה לזה באמצעות חוט ניתוח כדי ליצור את הלומן הפנימי הקוני של המעטפת התפקודית. לבסוף, צווארו של בעל החיים נסגר. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המראות פרמטרים משתנים של זרימה ומאמץ גזירה (shear stress), הגורמים בסופו של דבר להיווצרות של פלאקים אתרוסקלרוטיים במעלה ובמורד הזרם של המעטפת.אף ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי היווצרות של פלאקים טרשתיים, ניתן להחיל אותה גם על שאלות אחרות הנוגעות לתפקוד לקוי של האנדותל ודלקת כלי דם. המשנה של מאמץ הגזירה מורכב משני חצאים אורכיים של גליל בעל לומי (lumen) בצורת חרוט.חצאי הקליפות עשויים מפוליאתר קטון תרמופלסטי, וכל יציקה מכילה חצאי קליפות בגדלים שונים, הנעים בין 150 micrometers ל-300 micrometers. כדי להכין את משנה מאמץ הגזירה תחת מיקרוסקופ כירורגי, החזיקו את חצי קליפת השרוול בעזרת פינצטה קהה והשתמשו בסכין מנתחים חדה כדי לחתוך אותה בעדינות מהיציקה. הניחו את קדם-חצי הקליפה על משטח ישר שאינו מחליק.קבעו זאת באמצעות פינצטה קהה וגזרו בדיוק לאורך החתך שבוצע מראש. כדי להסיר את הקצה הסגור, הסירו בעדינות כל קצוות חדים שנותרו. אחסנו את חצאי מעטפת ה-cuff, מסווגים לפי גודל, ב-70% ethanol.עבור הליך השתלת השרוול. התחילו עם עכברים בני 10 שבועות עם נוק-אאוט של APOE, השוקלים לפחות 20 גרם. לבשו חלוק כירורגי, מסכה, כובע וכפפות סטריליות.עקרו את המכשירים למשך 30 שניות במכשיר עיקור בחרוש, והניחו אותם על גיליון אטום סטרילי. הרדימו את העכבר באמצעות 3% iso fluorine, ובדקו את עומק ההרדמה על ידי ביצוע צביטה בבהומה. הסירו את הפרווה בין הלסת התחתונה לעצם החזה באמצעות חומר דלטורי או באמצעות תספורת חשמלית עדינה.הנח את העכבר על פלטה כירורגית מחוממת במצב שכיבה על הגב (supine). לאחר מכן, מרח ג'ל למניעת התייבשות העיניים. אם נעשה שימוש ב-isoflurane, הנח את המכרסם בתא עם מסכה והגש 2% isoflurane.הדביקו את הרצפה ואת כפות הרגליים האחוריות וקבעו את מסכת הפנים. הכינו מראש שרוול (cuff), חצאי מעטפת (half shells) בגדלים שונים, ופיסת תפר משי 6-0 באורך 2.5 סנטימטר לחיבור חצאי המעטפת באתר חסימת העורקי הרגב (carotid occlusion). הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן השלבים המראים את נתיחות עורק הרגב במיקום המוגדר מסייעים לצמצם את המניפולציה ברקמות.בנוסף, ברצוני לציין כי מיקום והתאמה נכונים של קצה השרוול הם השלב החשוב ביותר להשגת תוצאות הניתנות לשחזור. כדי להבטיח זאת, הגדרנו מיקום אנטומי מדויק כאתר השתלה. כמו כן, התאמה נכונה של השרוול מופעלת על ידי חריץ על פני השטח החיצוני של השרוול, חצאי קליפות, המשמש כמדריך להברגה המחברת.חטאו את העור בכמות נדיבה של Betadine. השתמשו במספריים קטנים וחדים כדי לפתוח את העור ואת הפסציה שמתחתיו בצוואר, באמצעות חתך מדיאלי של ארבעה עד חמישה מילימטרים המתחיל מחלקו העליון של הסטרנום; הרחיבו את הפתח, הזיזו הצידה את בלוטת הפארוטיד הימנית והכניסו מרחיבים כדי לחשוף את אזור הניתוח. לאחר מכן, בצעו דיסקציה קהה כלפי פנים, משמאל לקנה הנשימה, במקום שבו שריר ה-sternal mastoid הימני חוצה את שריר ה-omohyoid הימני, כדי לאתר את העורק התוך-שכבתי (common carotid artery) הימני הפועם.בעזרת פינצטה זוויתית או קמורה עדינה מאוד, נבצע דיסקציה של העורק הקרוטיד המשותף הימני (right common carotid artery) על ידי הסרה עדינה של רקמת החיבור שמסביבו. נפריד את העורק הקרוטיד מהעצב הוואגוס (vagus nerve), האובייקט הלבן והסיבי הנמתח ישירות לאורך העורק הקרוטיד.מכיוון ששלב זה נחוץ כדי לחשוף את כלי הדם לחלוטין, יש להיזהר לא לפגוע בעצב הוואגוס או בענף של הווריד הג'וגולרי הפנימי הימני, הנמצא גם הוא בקשר הדוק לעורק התהומי. כדי לבחור את גודל השרוול המתאים, השוו את קוטרו של העורק התהומי החשוף לקוטר הפנימי של השרוול, חצאי הקליפות; הרוחב הגדול ביותר של לומן השרוול צריך להתאים לקוטר החיצוני של העורק התהומי. לאחר מכן, החדירו בזהירות את קצה הפינצטה מתחת לעורק התהומי.פתחו את הפינצטה. השחילו את חוט התפירה מסוג 6-0 silk תחת העורק וצרו לולאה; מקמו את החצי הראשון של השרוול מתחת לעורק התריסון, כאשר הצד בעל ההיצרון המקסימלי פונה למטה (בכיוון זרימת הדם). מקמו את החצי השני של השרוול בתוך הלולאה, מעל לעורק התריסון.הדק בעדינות את לולאת התפר וקשר את החוט. פעולה זו יוצרת את משנה מאמץ הגזירה הפונקציונלי. כדי להבטיח התאמה מדויקת של השרוול, חיוני שהתפר יעבור בדיוק בתוך החריץ שנוצר מראש על פני השטח החיצוניים של השרוול.ההיצרות הקונית של העורק צריכה להיות כעת גלויה בבירור. יש להניח את השרוול תמיד סביב אחד משני העורקי התומוס (common carotid arteries) של החיה, והצד הקונטרלטיבי משמש כביקורת. כאן, ניתן לראות את הצורה הקונית של הלומן הפנימי.צורה קונית זו חיונית לקביעת שלושה אזורים בעלי דינמיקת זרימה מובחנת. החזירו את בלוטת הפרוטיד הימנית למקומה המקורי. קרבו וסגרו את העור באמצעות כמות קטנה של תפרי proline 6-0 או בעזרת סיכות לסגירת פצעים.הזריק מנה בודדת של 5 mg/kg של carprofen תת-עורית למתן טיפול פרופילקטי לכאב, והצב את העכבר בתא חימום עד להתאוששותו. אם החיה סובלת ממצוקה למחרת, ניתן מנה שנייה של משככי כאבים. דפוסי מאמץ גזירה טיפוסיים שנוצרו על ידי הפיסוק, שחושבו ממדידות doppler, ומהירויות הזרימה התואמות המבוססות על מהירות בניגוד מופע (phase contrast velocity).דימויי MR מוצגים כאן כאשר השרוול מושתל בעכברי P OE knockout, שהוזנו בתזונה מסוג מערבית. הדינמיקה השינוית של הזרימה מעוררת שקיעת פלאקים טרשחתיים שנגרמו ממאמץ גזירה במעלה הזרם של ההיצרות הקונית. מאמץ גזירה למינרי נמוך מוביל לפיתוח מאסיבי של פלאקים טרשחתיים בעלי פנוטיפ פגיע יותר, המאופיין בליבות שומניות קרובות ללומן המרכזי המכוסות רק על ידי כיסוי סיבי דק.הלומן הפנימי החרוטי של השרוול מוביל לעלייה במהירות הזרימה. כמעט ולא נצפתה הצטברות של פלאק באזור זה, ישירות במורד נקודת צוואר הבקבוק. ההרחבה המיידית של העורק גורמת להיווצרות אזור של מערבולות ופרמטרים של זרימה תנודית, מה שמוביל לפיתוח פלאק פחות נרחב בעל פנוטיפ יציב יותר.לאחר צפייה בסרטון זה, אתם אמורים להגיע להבנה טובה לגבי האופן שבו יש למקם נכון משנה מאמץ גזירה (shear stress modifier) מסביב לעורק התוך-שטרני המשותף (common carotid artery) של עכבר.

implantation-carotid-cuff-for-triggering-shear-stress-induced

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

זה מתאר ניתוח חלקי קשירת הראש, מה שגורם תנאי הזרימה מופרע והתפתחות טרשת עורקים הבאות (בעוד שבועיים) עם כלי דם, ניאו intraplaque (ארבעה שבועות) בעורק התרדמה המשותף העכבר. כמו כן, אנו מתארים שיטה חדשה של בידוד RNA מן התרדמה אינטימה, מתן RNA הטוהר גבוהה האנדותל.

המודל של טרשת עורקים Flow-induced מופרע על העורק הראשי עכבר ידי קשירת חלקי שיטה פשוטה של ​​בידוד RNA מן התרדמה האנדותל

מודל של השתלת תומכן בעורק התרדמה עכבר מתואר. בהשוואה לשיטות אחרות דומות, הליך זה הוא מהיר מאוד, פשוט ונגיש, ומציע את האפשרות ללמוד בדרך נוחה תגובת קיר כלי דם לסטנטים משחררי תרופות שונים והמנגנונים המולקולריים של restenosis.

דגם Murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis

וידאו זה מראה שני מודלים של פיתוח פלאק בעורקי intimal עכבריים ומדגיש את ההבדלים בהיפרפלזיה myointimal וטרשת עורקת.

גרימת Myointimal היפרפלזיה נגד טרשת עורקים בעכברים: מבוא של שני מודלים חוקיים

אנו מתארים טכניקה כירורגית המייצרת פגיעה בחוט בעורק הירך של עכברים כדי לגרום להיפרפלזיה ניאו-אינטימית לשמש כמערכת בדיקה מודל לאספקה פרי-וסקולרית של תרכובות טיפוליות לעיכוב רסטנוזיס.

דגם Murine של עורק הירך חוט פגיעה בהשרשה של perivascular החדרת תרופות תיקון

מחקר זה מתאר הליך פולשני עבור אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים. בהשוואה לשיטות אחרות באמצעות פגיעה חשמלית או הקפאה, פציעה כתוצאה מכני מחקה את המצב האנושי של restenosis לאחר טיפולים revascularization והוא אידיאלי לחקר המנגנונים המולקולריים המעורבים.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

התכווצות העורקים רוחבי פולשנית (MTAC) חוסך את עיקרי התכווצות העורקים רוחבי רגיל (TAC) תוך ביטול השימוש מאוורר עם אינטובציה לקנה הנשימה. זה מוכיח להיות שיטה רצויה מאוד ללימודי תפוקה גבוהה על עומס של חדר שמאלי, בעיקר חקר תרגום.

פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים

שיטת המחט של היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדית הא-סימטרית מוצעת ליצירת מודל עכבר לפגיעה קוגניטיבית בכלי הדם ודמנציה. זה מביא לתוצאות ארוכות טווח בהשוואה למודלים שנקבעו בעבר ותואם ל-MRI חי. ייצוג חזותי המדגים את ההליך מספק הנחיות לשליטה בניתוח.

מודל עכבר לליקוי קוגניטיבי וסקולרי ודמנציה המבוסס על היצרות עורק צוואר משותף דו-צדדי אסימטרי מונחה מחט

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה כירורגית סטנדרטית לאינדוקציה של מפרצת צוואר במודל עכברי באמצעות ניתוח כירורגי יחיד.

מודל עכברי של היווצרות מפרצת קרוטיד

כאן, מוצג פרוטוקול להשתלת שתל כלי דם מהונדס רקמות בעורק הצוואר של העכבר בטכניקת השרוול, המספק מודל בעל חיים מתאים לחקירת מנגנוני התחדשות רקמות כלי הדם.

השתלת שתל כלי דם מהונדס רקמות בעורק הצוואר של העכבר בטכניקת שרוול

אנו פרט חדש קרוב אינפרא אדום (NIRF) קטטר פלואורסצנציה הדמיה 2 מימדי intravascular מולקולרית של ביולוגיה...

בשנת vivo קרוב אינפרא אדום דימות פלואורסצנטי intravascular (NIRF) מולקולרית של רובד דלקתיות, גישה multimodal כדי הדמיה של טרשת עורקים

חקור שיטה ליצירת טרשת עורקים בעכברים באמצעות שתלת חפת קונית בכלי הדם הצווארי. המודל מאפשר ניתוח השפעת מתח גזיר שונה על התפתחות הלקויות והתגובות הדלקתיות.

השרשה של קאף הראש מפעילה שאר מתח טרשת עורקים המושרה עכברים

גלה סרטונים נוספים