Name: ב electroporation לגימי ברשתית ציק עובריים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 15 s
Description: למדו את שיטת ההזרקה הרטינלית הממוקדת והאלקטרופורציה in ovo ברשתית עוברי תרנגולת ביום עוברי 4. טכניקה זו מאפשרת חקר ביטוי גנים ושינויים מורפולוגיים בהתפתחות הרשתית ברמת התא הבודד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות למר Maaz אנוור לשימוש של המצלמה שלו HD (קנון VIXIA HFS100). עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי תרומות של NIH (EY018738), ניו ג&#39;רזי ועדת המחקר של חוט השדרה (08-3074-SCR-E-0 ו 10-3091-SCR-E-0), ובוש פרס Biomedical Research.

מאז חלקים מסוימים של פרוטוקול מתבצעות כפי שתואר קודם לכן עם שינוי מזערי קטעי וידאו אחרים יופיטר 2 וניירות 3 לא נדון אותם בפירוט כאן. 1. ביצה טיפול והכנה מחט <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצים ניתן לאחסן יין קריר בסביבות 13 מעלות צלזיוס עד שבוע 1. אם הטמפרטורה גבוהה מדי, עוברים יתחיל להתפתח באופן חריג, כאשר הטמפרטורה נמוכה גורם תמותה גבוה. ברגע שאתה מוכן דגירה להוציא את הביצים מהמקרר את היין ולהגדיר את הביצים אנכית עם סוף יותר למעלה. לשמור את הביצים בטמפרטורה בחדר לפחות 2 שעות לפני לשים אותם 37.5 ° C חממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על הביצים של 96-100 שעות שזה בערך יום עובריים 4 להשיג, כי הם עוברים על המבורגר ושלב המילטון 22 4-5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מחטים micropipette מן צינורות זכוכית משך נימי ולשבור את קצה תחת מיקרו לנתחהיקף עם פינצטה כדי לקבל עצה על פתיחה 0.1 מיקרומטר בקוטר 20 מ&quot;מ נר. מחטים עם טיפים גדולים יותר מתקשים חודרות את הממברנה בזמן vitelline טיפים קטנים מתקשים טעינה אספקת פתרון ה-DNA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את המחט 0.1 מ&quot;ל המילטון Gastight מזרק רכוב על micromanipulator. השתמש חתיכה קטנה של צינור סיליקון Masterplex לחיבור המחט במזרק. מאז החיבורים מצומצם אין צורך להוסיף שמן מינרלי לאטום את הקובץ המצורף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים 2 μl של פתרון ה-DNA פלסמיד כתב בריכוז הנע 3-6 מיקרוגרם / μl ו 0.2 μl של ירוק מהירה (0.025%) על פיסת parafilm. מהיר צבע ירוק יעזור לדמיין את הזריקה. לאט לאט, טען את מחט בתערובת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחרר את קרום vitelline מן הקרום הפנימי לסובב את הביצים בעדינות כ -180 ° ולחכות כמה דקות ואז לסובב אותו בחזרה למצב המקורי והעמיד אותו על electroporation. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את forcEPS וביצה פגז עם אתנול 70%, כדי למנוע זיהום לעובר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חור קטן על הביצה ממש מעל תא אוויר עם זוג מלקחיים בגודל AA. להיזהר לא לסדוק את קליפת הביצה. הסרה של חלקים קטנים, אחד בכל פעם כדי ליצור חלון קטן. מוציאים בזהירות את הקרום הפנימי באמצעות מלקחיים בלי לגעת קרום vitelline. </li></ol> 2. הזרקת electroporation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למנוע נזק מוחי או לב לתפקיד קונטרה מחט לרוחב החבילה העיקרית של כלי הדם הנכנסים לעין ומצביע לכיוון המקור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פירס דרך הממברנה vitelline, בלובן העין, הרשתית והומור הזגוגית על ידי דחיפה קלה פתאומית של המחט. אם המחט חודרת דרך בקצה השני של העין זה צריך להיות בסדר אלא אם כן נזק וריד דם גדול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט למשוך בחזרה את המחט בקצה הפתיחה ולמקם אותו משיק כמעט אל הקיר החיצוני של גלגל העין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Inserלא מחט לחלל תת רשתית בין בלובן העין ועל הרשתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק את ה-DNA עד שאתה יכול לדמיין את הפתרון הירוק ממלא את הצד של גלגל העין ודוחפים פנימה רשתית על ידי יצירת הבליטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הצבת המחט שלך לא נכון אז אתה תראה את פתרון ה-DNA מתפשטת בתוך הומור הזגוגי ממלא את התיכון של כדור העין. כמו כן, אם אתה פוגע ברשתית יותר מדי אז אתה רואה את פתרון ה-DNA יוצא של גלגל העין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להסיר את המחט ומיד למקם את האלקטרודות במקביל בתוך הביצה לאחר טבילה PBS. לדחוף את האלקטרודות לצלול לתוך מי השפיר באופן כל כך את העין מוזרק ממוקם בין האלקטרודות. אל תיגע בכל כלי דם גדול או את הלב עם האלקטרודות תוך שימת אותם. אלקטרודה שלילית צריך להיות בצד הזריקה, כך ה-DNA יכול להיות מועבר מן החלל רשתית תת לתוך הרשתית לכיוון האלקטרודה החיובית. אלקטרוporate הרשתית עם 5 פולסים של 15V עבור 50 MS 950 במרווחים עם טרשת נפוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים בזהירות את האלקטרודות וסוגרים את החלון של ביצה עם חתיכות של נייר דבק ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התווית היום ביצה המוזרק לפני שהחזיר אותו בחממה. בדרך כלל, זה לוקח בערך 3 עד 5 דקות כדי להשלים את התהליך electroporation כולו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביטוי של GFP ניתן לראות כבר לאחר 8 שעות electroporation. עם זאת, ייתכן לחכות עד העובר מגיע לשלב הרצוי לפני הקטיף. </li></ol> 3. נציג תוצאות במחקר שלנו, אנו משתמשים בונה פלסמיד שונים כדי ללמוד את הרגולציה של ביטוי גנים המעורבים בהתפתחות תאים ברשתית. בסרטון הזה pCAG-GFP (שליטה transfection) שימש לעקוב הזרקת electroporation מוצלח. עם זאת, בנייתן של פלסמיד עם גן הכתב (GFP, RFP וכו &#39;) ניתן להשתמש בו. למרות הביטוי GFP ניתן לראות כבר לאחר 8 שעות electroporation, אנחנו בדרך כלל מתחילים לקצור את הביצה ביום 6 (E6) ואילך. Electroporated הרשתיות נותחו מתוך העובר וניתח תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי לנתיחה לפני הטבעה ו חתך. בדרך כלל, ביטוי גנים עיתונאי ניתן לראות לפחות רבע הרשתית לאחר electroporation מוצלחת (איור 1). רקמת הרשתית transfected נותחו עוד דרך חתך להדמיה ברורה של מורפולוגיות סלולריים. אימונוהיסטוכימיה באמצעות סוג תא סמנים ספציפיים (Brn3a, Pax6 וכו &#39;) אפיון מותר הביטוי תא ספציפי GFP (איור 2). <img src="/files/ftp_upload/3792/3792fig1.jpg" align="Figure 1" /> באיור 1. Electroporation מוצלח של הביטוי העיתונאי תוצאות פלסמיד ה-GFP חיובית. עוף עובריים הרשתיות הוזרקו ו electroporated ביום עובריים 4 וקצרו ביום עובריים 6. לפחות 25% של הרשתית היה transfected בהצלחה (= צפה למעלה, ב &#39;= מבט מלמטה). קנה מידה בר = 1mm. <img src="/files/ftp_upload/3792/3792fig2.jpg" align="Figure 2" /> איור 2. אפיון של ה-GFP לבטא בתאי הרשתית באמצעות אימונוהיסטוכימיה. GFP להביע רקמות רשתית בשלב E7 היו קבועים מחולק. סעיפים אלה היו מוכתמים אז עם סמנים תאים שונים מסוימים. Brn3a שימש כדי לקבוע בתאי הגנגליון (א &#39;) תוך Pax6 שימש כדי לקבוע amacrine אופקי, ותאי הגנגליון (ב&#39;). סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר.

<ol><li>Doh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+retinal+cell+development+in+chick+embryo+by+immunohistochemistry+and+in+ovo+electroporation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22BMC.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of retinal cell development in chick embryo by immunohistochemistry and in ovo electroporation techniques.</a> BMC. Dev. Biol. 10, (2010).</li>
<li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408-e408 (2007).</li>
<li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.+1951%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn.%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951.</a> Dev. Dyn.. 195, 231-272 (1992).</li>
<li>Hamburger, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stage+series+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">The stage series of the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 195, 273-275 (1992).</li>
</ol>

כל הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדי ועדת מתקנים באוניברסיטת ראטגרס.

ממוקד הזרקת ברשתית וב electroporation לג&#39;ימי ברשתית עוברית בשלב E4 יכול ממוקדת ובתאים הרשתית וכתוצאה מכך היכולת לחזות את כל ששת סוגי התאים העיקריים רשתית ברמת תא בודד. ב electroporation לג&#39;ימי ב HH10 (~ E1.5) מיקוד שלפוחית ​​הראיה הוא מסוגל transfect תאים המתפתחים כדי ליצור את העין. עם זאת, תאים אלו יש תחלופה גבוהה מאוד בשלב זה שיטה זו אינה ספציפית בתאי הרשתית. ייתכן כי שיעור גבוה מחזור התא ומונע ביטוי יציבות מתמשכת. על ידי E4, העובר מפו...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> מופרות הפתוגן חינם (SPF) לבנים ליוורנו ביצי תרנגולת </td><td> זריחה (חוות קטסקיל, ניו יורק) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> עוף ביצה חממה </td><td> GQF ייצור, סוואנה, GA </td><td> מודל 1550 </td><td> הגדר לחות 60% ו 37.5 ° C. </td></tr><tr><td> צינורות זכוכית נימי </td><td> העולם Precision Instrument בע&quot;מ </td><td> TW150F-4 </td><td></td></tr><tr><td> 0.1 מ&quot;ל במזרק </td><td> המילטון ושות&#39; רינו, נבאדה </td><td> Gastight 1710 </td><td> מזרק 1ml לחלופין ניתן להשתמש גם </td></tr><tr><td> Masterflex סיליקון (מי חמצן) Tubing </td><td> קולמן בן הזוג </td><td> HV-96400-13 </td&gt; <td> חותכים חתיכה קטנה (1 ס&quot;מ) לחיבור מחט זכוכית המזרק </td></tr><tr><td> מלקטת </td><td> דומון </td><td> א.א. </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulator </td><td> העולם Precision Instrument בע&quot;מ </td><td> M3301-M3 </td><td></td></tr><tr><td> פלסמיד דנ&quot;א </td><td></td><td></td><td> pCAG-GFP הושאל ד&quot;ר קוני Cepko </td></tr><tr><td> מהיר גרין FCF </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F7252 </td><td> לדלל אותו 0.025% עם PBS </td></tr><tr><td> דופק גנרטור </td><td> הרווארד Apparatus, MA </td><td> BTX ECM 830 </td><td> גל מרובע הגנרטור </td></tr><tr><td> אלקטרודות </td><td> הרווארד Apparatus, MA </td><td> BTX דגם 514 </td><td> האלקטרודות שלנו לא היו קצובות, 3-5 מ&quot;מ זה מזה </td></tr><tr><td> מצלמה דיגיטלית מונוכרום </td><td> Zeiss, גרמניה </td><td>xiocam MRM </td><td></td></tr><tr><td> Dissection מיקרוסקופ פלואורסצנטי </td><td> Leica Microsystems, גרמניה </td><td> לייקה MZ16FA </td><td></td></tr><tr><td> מיקרוסקופ פלואורסצנטי זקוף </td><td> Zeiss, גרמניה </td><td> Zeiss Axio Imager A1 </td><td></td></tr></tbody></table>

ב electroporation לג&#39;ימי ברשתית צ&#39;יק עובריים

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

הרשתית עוף העוברית היא כלי מצוין ללמוד פיתוח רשתית בבעלי חוליות גבוהות יותר. בגלל גודל גדול ופיתוח חיצוני, זה יחסית קל מאוד לתפעל את הרשתית חומוס עובריים באמצעות ה-DNA רקומביננטי / טכנולוגיית RNA. Electroporation של DNA / RNA בונה לתוך הרשתית עובריים יש יתרון גדול ללמוד ויסות הגנים בגזע / אבי תאים ברשתית במהלך התפתחות הרשתית. סוג אחר של מבחני כגון assay כתב הגן, הגן על הביטוי, הגן להפיל (shRNA) וכו &#39;ניתן לבצע באמצעות טכניקה electroporation. סרט הווידאו הזה מדגים הזרקת רשתית ממוקד ב electroporation לג&#39;ימי לתוך הרשתית חומוס העוברית על המבורגר והמילטון בשלב 22-23, שזה בערך יום עובריים 4 (E4). כאן אנו מראים מהירה ונוחה בטכניקה electroporation לג&#39;ימי לפיה DNA פלסמיד המבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) כסמן מועבר ישירותחומוס עובריים שטח subretinal ואחריו פולסים חשמליים כדי להקל על קליטת ה-DNA על ידי גזע / אבי תאים ברשתית. שיטה חדשה של הזרקת electroporation רשתית ב E4 מאפשר הדמיה של כל סוגי תאים ברשתית, כולל המנוח, יליד נוירונים 1, אשר היה קשה עם השיטה המקובלת של הזרקת electroporation על E1.5 2.

המטרה הכללית של סרט זה היא להראות כיצד לבצע הזרקת רשתית ממוקד<em&gt; ב לג&#39;ימי</em&gt; Electroporation של DNA / RNA בונה לתוך הרשתית חומוס העוברית על המבורגר ושלב המילטון 22-23, שזה בערך יום עובריים 4 (E4). טכניקה זו שימושית מאוד ללמוד ביטוי גנים, ויסות הגנים, ושינוי מורפולוגי בפיתוח הרשתית חומוס.

רשתית של עוברי תרנגולות היא כלי מצוין לחקר התפתחות הרשתית בחולייתנים עליונים. בשל הגודל הרב וההתפתחות החיצונית, היא...

שלום, אני מוחמד איסלאם. אני סטודנט לתארים מתקדמים במעבדתו של ד"ר Lee במחלקה להנדסה ביו-רפואית באוניברסיטת Rutger. היום אדגים לכם כיצד לבצע הזרקה רשתית ממוקדת ואלקטרופורציה in vivo.בעובר עוף, נשתמש ברשתית של עובר עוף בשלב של יום רביעי לההתרחבות העובר, שהם כ-96 שעות לאחר ההפריה. טכניקה זו נחשבת לשיטה חדשנית לחקר התפתחות הרשתית. שיטה זו פונה באופן ספציפי לתאי אב של הרשתית, מה שמאפשר לדמיין את כל סוגי תאי הרשתית ברמה של תא בודד.ניתן ליישם זאת גם במחקרי תפקוד (gain or loss of function), שבהם ניתן להכווין גן מסוים למחקר על התפתחות נורמלית או מחלה של הרשתית. ניתן לאחסן את X במקרר יינות בטמפרטורה של כ-13 °C למשך עד שבוע. אם הטמפרטורה תהיה גבוהה מדי, העוברים יתחילו להתפתח באופן לא תקין, בעוד שטמפרטורה נמוכה יותר גורמת לתמותה גבוהה.כאשר תהיו מוכנים לדגירה, הוציאו את הביצים ממקרר היין והניחו אותן במצב אנכי, כאשר הקצה הרחב פונה כלפי מעלה. השאירו את הביצים בטמפרטורת החדר למשך שעתיים לפחות לפני הכנסתן למדגרה בטמפרטורה של 37.5 Gcel Yes. דגרו את הביצים למשך כ-96 שעות, שזהו בערך היום הרביעי להתפתחותו של העובר (Embry Day four).כדי להשיג עוברים שנמצאים בשלב 22 לפי סיווג hamburger and Hamilton, השב micropipet needles מתוך צינורות נימיות זכוכית, ושבור את הקצה תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי באמצעות פינצטה כדי לקבל פתח קצה בקוטר של כ-0.1 micrometer ושיפוע של שני מילימטרים. מחטים עם קצוות גדולים יותר מתקשות בפריצת ממברנת הוויטמינים. בעוד שקצוות קטנים יותר מקשים על טעינת והגשת תמיסת ה-DNA, חבר את המחט למזרק Hamilton gastric המותקן על מיקרו-מניפולטור.השתמשו בחתיכה קטנה של צינור סיליקון Master Plex לחיבור המחט למזרק. מכיוון שהחיבורים קשורים, אין צורך להוסיף שמן מינרלי. כדי לאטום חיבור זה, ערבבו שתי µL של תמיסת DNA של פלסמיד רפורטר בריכוז שבין 3 ל-6 µg/µL ו-0.2 µL של Fast Green על פיסת נייר; צבע ה-Fast Green יעזור להדמיות של ההזרקה. טענו לאט את המחט בתערובת כדי לשחרר את הממברנה החיונית מהממברנה הפנימית. סובבו את הביצה בעדינות בכ-180 מעלות והמתינו מספר דקות.לאחר מכן, סובב אותו בחזרה למצב המקורי והכן אותו לאלקטרופורציה. נגב את הפינצטה ואת קליפת הביצה ב-70% ethanol כדי למנוע זיהום של העובר. צור חור קטן בביצה מיד מעל תא האוויר באמצעות זוג פינצטות.הקפידו לא לסדוק את קליפת הביצה. הסירו חתיכות קטנות אחת אחת כדי ליצור חלון קטן. הסירו בזהירות את הקרומי הפנימי באמצעות ה-Forceps, תוך הימנעות מנגיעה בממברנה החיונית כדי למנוע נזק למוח או ללב.מקמו את המחט בצד הנגדי לצמא של צרור כלי הדם הראשי הנכנס לעין, כפי שמצוין על ידי החץ ומכוון לכיוון המקור. דקרו דרך הקרומים החיוניים, הסקלרה, הרשתית והגוף הזגוגית. באמצעות דחיפה פתאומית של המחט, במידה והיא חודרת דרך הקצה השני של העין, הדבר אמור להיות תקין, כל עוד לא נגרם נזק לוריד דם ראשי כלשהו.משוך לאט את המחט חזרה אל קצה הפתח והצב אותה כמעט במשיק לדופן החיצונית של גלגל העין. החדר את המחט למרווח התת-רשתי (subretinal space) שבין הסקלרה לרשתית. הזרק את ה-DNA עד שניתן יהיה לראות את התמיסה הירוקה ממלאת את צד גלגל העין ודוחפת את הרשתית פנימה על ידי יצירת בליטה.הנה דוגמה טובה נוספת להזרקה מוצלחת עם היווצרות בליטה, והיא מומחשת בדיאגרמה זו. אם מיקום המחט לא היה נכון, תבחינו שתמיסת ה-DNA מתפשטת בתוך הגוף הזגוגי וממלאת את מרכז גלגל העין. כמו כן, אם תגרמו נזק רב מדי לרשתית, תבחינו שתמיסת ה-DNA דולפת מגלגל העין.הוצא את המחט באיטיות והנח מיד את האלקטרודות במקביל בתוך הביצה. לאחר ההשריה ב-PBS, דחף את האלקטרודות כלפי מטה כדי לשקע אותן בנוזל השלי, באופן שבו העין המוזרקת תמוקם בין האלקטרודות. הימנע ממגע של האלקטרודות עם ורידי דם ראשיים או עם הלב בזמן הנחתם.יש למקם את האלקטרודות השליליות באתר ההזרקה, כך שה-DNA יוכל לעבור מהחלל הסוב-רטינלי אל הרשתית לכיוון האלקטרודה החיובית. יש לבצע אלקטרוליזה לרשתית באמצעות חמישה פולסים של 15 volt למשך 50 milliseconds במרווחים של 950 milliseconds. הסר בזהירות את האלקטרודות ואטום את חלון הביצה באמצעות חתיכות של סרט דביק שקוף; סמן את הביצה המוזרקת בתאריך ובתווית לפני החזרתה לדגרה.בדרך כלל, נדרשים כמעט שלוש עד חמש דקות להשלמת כל תהליך האלקטרופורציה. ניתן להבחין בביטוי של GFP כבר שמונה שעות לאחר האלקטרופורציה. עם זאת, ניתן להמתין עד שהעובר יגיע למצב הרצוי לפני קצירת הביצה.אני מקווה שסרטון זה היה מועיל לביצוע הניסוי שלכם. תודה לצפייה.

in-ovo-electroporation-in-embryonic-chick-retina

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

צ'יק ב electroporation אובו היא טכניקה המאפשרת מניפולציה גנטית של העובר העופות. יישומים נפוצים של טכניקה זו כוללות אנליזה פונקציונלית של גנים המשוערת אלמנטים משפר. וידאו זה מדגים electroporation neural tube אצל ה"ה 10 עוברי אפרוח. טכניקת הזרקת וטיפול נאות ביצה הם דנו.

ב Electroporations אובו של HH 10 עוברים שלב עוף

כאן אנו מציגים שתי טכניקות מניפולציה ביטוי גנים בתאי הגנגליון ברשתית Murine (RGCs) על...

ב electroporation ברחם לשעבר vivo על ביטוי גנים בתאים עכבר גנגליון רשתית

שיטה שילוב של פלסמיד דנ"א לתוך תאים ברשתית Murine לצורך ביצוע או רווח או הפסד של מחקרים...

ב electroporation vivo של הרשתית עכבר פיתוח

שיטה א 'תנאי מציאה ביטוי חלבון המטרה ברשתית דג הזברה מבוגר מתואר, הכוללת הזרקת intravitreally morpholinos antisense ו electroporating אותם לתוך הרשתית. החלבון המתקבל הוא הפיל במשך כמה ימים, אשר מאפשר בדיקת תפקידו של החלבון או התחדשות הרשתית ללא פגע.

ב electroporation vivo של Morpholinos לתוך הרשתית דג הזברה למבוגרים

כדי להעריך את תפקוד רגולציה של גנים במהלך ההתפתחות של נוירונים המוח התיכון דופאמין, אנו מתארים שיטה...

ב electroporation לג&#39;ימי של המוח התיכון צ&#39;יק לחקר תפקוד הגן בהתפתחות Neuron דופאמין

תרביות תאים עובריים חומוס רשתית מהוות כלים חשובים למחקר של ביולוגיה קולטי האור. פיתחנו טכניקת העברה יעילה של גנים המבוססת על לשעבר אוב electroporation פלסמיד של הרשתית לפני התרבות. טכניקה זו במידה ניכרת מגבירה את יעילות transfection על פרוטוקולים זמינים כרגע, מה שהופך את המניפולציה גנטית אפשרית למערכת זו.

העברה יעילה ג'ין בצ'יק הרשתיות לסלולריים יסודי לימודי תרבות: אקס-אוב גישת Electroporation

פרוטוקול זה מתאר שיטה לנתח, ניסוי לתפעל וexplants רשתית תרבות שלם מעוברי תרנגולת. תרבויות explant הן שימושיות כאשר שיעור הצלחה גבוהה, יעילות ושחזור יש צורך לבדוק את ההשפעות של פלסמידים לelectroporation ו / או חומרים מגיב, כלומר, מעכבים האנזימטית.

Explants רשתית שלם מעוף עוברים לטיפולי Electroporation וכימיים מגיב

אנו מתארים את פעולות השירות עבור תיוג פלורסנט tangentially גידול תאים על-ידי אלקטרופורציה ולאחר עבור הדמיה בצילום מואץ של התנועה תאים עם תוויות בתרבות שטוח-הר כדי להמחיש נודדות תא התנהגות tectum אופטיים לפתח הבחורה .

ויזואליזציה של נדידת תאים העוסקות ב Tectum אופטיים לפתח הבחורה

פיתחנו גישה חדשנית של אובדן תפקוד הכוללת החדרה ואינטגרציה גנומית של רצפי מיקרו-רנ"א מלאכותיים לעוברי אפרוחים באמצעות אלקטרופורציה ומערכת טרנספוזון Tol2. טכניקה זו מספקת מתודולוגיית פירוק גנים חזקה ויציבה לחקר תפקוד גנים במהלך ההתפתחות.

גישת אובדן תפקוד ברשתית הגוזל העוברי באמצעות ביטוי טרנסגני בתיווך Tol2 של מיקרו-רנ"א מלאכותי

הגוזל הוא אורגניזם מודל חסכוני, נגיש וזמין באופן נרחב למגוון מחקרים. כאן מפורטת סדרה של פרוטוקולים להבנת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס ההתפתחות וההתחדשות של האוזן הפנימית של העופות.

בשיטות אובו ואקס אובו לחקר התפתחות האוזן הפנימית של העופות

למדו את שיטת ההזרקה הרטינלית הממוקדת והאלקטרופורציה in ovo ברשתית עוברי תרנגולת ביום עוברי 4. טכניקה זו מאפשרת חקר ביטוי גנים ושינויים מורפולוגיים בהתפתחות הרשתית ברמת התא הבודד.

ב electroporation לג'ימי ברשתית צ'יק עובריים

גלה סרטונים נוספים