תיאור חזותי של Dissection של מערכת כלי הדם המוחית ומשטח קרום המוח הקשורים ודמה עין המקלעת ממוח חולדה

המטרה הכוללת של הליך זה היא לנתח ביעילות ובמהירות את חלקי הקליפה והארכנואידים של קרומי המוח וכלי הדם העורקיים הנלווים, לכסות את פני השטח של קליפת המוח הקדמית והמוח האמצעי, התלמוס והקאלי, כמו גם לקצור את מקלעת הכורואיד מהחדרים הצדדיים. זה מושג תחילה על ידי הסרת בלוטת האצטרובל והפרדת קרומי המוח ועצי העורקים למוח הקדמי. שנית, העורקים והעורקים על פני השטח בקליפת המוח מוסרים בזהירות, החל ממעגל הגחון של וויליס, ולאחר מכן ממשיכים למשטחי קליפת המוח הגביים כך שהקליפה והממברנות הארכנואידיות הנותרות נשארות מחוברות לכלי הדם, תוך הקפדה למזער את הקציר של רקמות פני השטח הסמוכות בקליפת המוח.

לאחר מכן, קליפת המוח וסיבי הקומיסורה מנותחים הרחק מהמחיצה וההיפוקמפוס, וחושפים את החדרים הצדדיים כדי לאפשר את קצירת מקלעת הכורואיד. לבסוף, ההיפוקמפוס מוסר, וחושף את התלמוס והקלי של המוח האמצעי. לאחר מכן מנותחים קרומי המוח וכלי הדם הנלווים מעל אזור זה.

בסופו של דבר, ניתן לקבוע את השלמות והספציפיות של קרומי המוח המנותחים וכלי הדם העורקיים הנלווים, כמו גם מקלעת הכורואיד, על ידי השוואת פרופילי ביטוי הגנים של כל אחד מהאזורים הללו. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח במחקר הקשור לכלי הדם התומכים בתפקוד המוח. הוא כולל קווי דמיון והשוואות והבדלים בתפקוד מקלעת הכורואיד בהשוואה לקרומי המוח וכלי הדם העורקיים הקשורים אליו ביחס לזרימת הדם, תפקוד CSF, עלבונות נוירוטוקסיים וטראומה מוחית.

כדי להתחיל בפרוטוקול זה, הניחו מוחות שזה עתה הוצאו מחולדות מיד לאחר שהן הורדמו לתמיסת מלח קרה כקרח למשך חמש דקות. חשוב לאפשר למוח להתקרר למשך פרק זמן זה לפני הניתוח, כך שניתן יהיה להפריד את ארבעת קרומי המוח וכלי הדם העורקיים הקשורים אליהם או MAV מפני השטח של קליפת המוח. לאחר מכן, הניחו את המוח בתחתית צלחת פטרי מזכוכית המונחת על קרח עם סנטימטר אחד של קרח, קר, תמיסת מלח רגילה או 0.1 נתרן פוספט מולארי ב-pH של 7.4.

כל הנתיחה צריכה להיעשות עם המוח, בעיקר שקוע במי מלח. כדי להתחיל בדיסקציה, הניחו את הצד הגבי של המוח כלפי מעלה בצלחת הפטרי ואתרו את בלוטת האצטרובל, שנמצאת באזור הגחון המקושקש ביותר בין שתי ההמיספרות. רק רוסטרל למוח הקטן וממש מתחת, או על פני קרומי המוח.

מעל הקולי. הסר את בלוטת האצטרובל באמצעות שני מלקחיים קטנים עם קצה כפוף. שימו לב שבלוטת האצטרובל היא בצבע ורוד כמו קליפת המוח, אך לעתים קרובות היא מוקפת בשאריות של שאריות דם וכלי דם מהסרת המוח.

לאחר מכן, הפוך את המוח הפוך בצלחת הפטרי. לאחר מכן הפרד את עורק החוליות והעורקים וקרומי המוח הקטנים יותר המכסים את הפונים מקרומי המוח וכלי הדם של המוח הקדמי. לאחר מכן, התחל בהסרת ה- MAV.

חשוב להתחיל דרך הגחון בתהליך הדיסקציה עם העורקים העיקריים של מעגל וויליס, עורקי המוח האמצעיים והעורקים הקדמיים. לאחר מכן, החל מאחת משתי ההמיספרות, השתמש במלקחיים קטנים עם קצה כפוף כדי לנתק את העורק המתקשר האחורי ממש מאחור לצומת הצוואר הפנימי, ובכך להפריד בין עצי העורקים הקדמיים והאחוריים יותר של המוח הקדמי. לאחר מכן חזור על אותו תהליך עבור חצי הכדור הנגדי.

כעת, אוחזים ב-MCA ובעורק הקדמי עם המלקחיים, מושכים בעדינות לכיוון הגב הקדמי כך שה-MAV המכסה את קליפת המוח הקדמית הגחונית מורם מעל ומסביב לדרכי הריח. זה מסיר חלק גדול מה-MAV המכסה את קליפת המוח הקדמית. סובב את המוח בזווית של 45 עד 90 מעלות לצלחת הפטרי כך שניתן יהיה לשחרר את האזורים הקדמיים יותר של ה-MAV המקיפים את אזורי קליפת המוח הצדדית, לאחוז ב-MCA ובעורקים הקשורים ולמשוך בעדינות גב לאורך קליפת המוח.

במידת הצורך, ניתן להשתמש בקצות המלקחיים כדי להרים ולשחרר את העורקים העיקריים מקליפת המוח במהלך הדיסקציה. כעת, הסר את האזורים הצדדיים האחוריים יותר של ה-MAV. שימו לב שעדיף לעבור מחצי כדור אחד לשני במהלך תהליך קציר זה כדי להבטיח שה-MAV יישאר קר ורווי לחות גם להחליף חצאי כדור אם נתקלים בהתנגדות כלשהי בשחרור ה-MAV מקליפת המוח.

לבסוף, כדי להסיר את האזורים הגביים ביותר של ה-MAV המקיפים את הקורטקס הסומטוסנסורי והמוטורי הראשוני, סובב את הצד הגבי של המוח כלפי מעלה כדי לשחרר את החלק הזה מהמוח, השתמש בקצות המלקחיים לאורך הסינוס הסגיטלי. חלק זה של ה-MAV שנקטף יכול להישמר באופן זמני במי מלח קרים כקרח עד שיהיה צורך בבדיקה וניתוח, או להקפיא לעיבוד מאוחר יותר. לעתים קרובות ה-MAV המכסה את האזורים האחוריים ביותר של קליפת המוח נשאר מחובר.

הסרתו מוצגת בחלק הבא של סרטון זה. כדי להסיר את מקלעת הכורואיד במיקום הראשון, הצד הגבי של המוח כלפי מעלה והחזק אותו במקומו עם המלקחיים הגדולים יותר. לאחר מכן דחף את המלקחיים הקטנים יותר כלפי מטה דרך קו האמצע בין ההמיספרות והשתמש בקצוות כדי לנקב דרך קליפת המוח והקורפוס קלוסום לחלק העליון של קו האמצע של ההיפוקמפוס.

לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי למשוך את קליפת המוח עם קלוסום הרחק מההיפוקמפוס הגבי והמחיצה תוך חשיפת רוב החדר הצדדי. ניתן לאתר ולזהות את מקלעת הכורואיד על ידי הקו האדום הגלי התוחם את העורק הראשי העובר לאורכו. השתמש בשני קצוות המלקחיים כדי לחטט את הדפנות הצדדיות של החדר השלישי ולהגדיל אותו בקצהו המפונק ביותר.

לאחר מכן בעזרת המלקחיים הקטנים, משוך את הקצה הזה של מקלעת הכורואיד לחופשי. לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי להגדיל את האזור הקדמי מאוד בין המחיצה לאזור הפוטמן הזנבי ולמשוך את מקלעת הכורואיד לחופשי גם בקצה זה. בצע גם את אותו הליך בחצי הכדור הנגדי כדי להשיג את מקלעת הכורואיד השנייה שנותרה.

שוב, רקמה זו יכולה להישמר באופן זמני בקרח, קר, מלוח או קפוא לעיבוד מאוחר יותר. כדי להסיר את ה-MAV הנותר המכסה את אזורי ה-coddle האחוריים ביותר של קליפת המוח, ראשית, הסר את כל ההיפוקמפוס משתי ההמיספרות וחושף את ה-MAV מעל התלמוס והקוליקולי. שימו לב שהסרתו של חלק זה של ה-MAV תהיה הרבה פחות קשה מהסרתו מקליפת המוח עבור ה-MAV הנותר.

על ידי אחיזת כלי הדם הגדולים יותר המכסה את החלק הקדמי של התלמוס ומשיכה עדינה בקלילות, כלי דם זה מחובר לרשת הקוקוריקולרית העל-קולרית ומספק דם להיפוקמפוס הגבי ולרשת התלמוס הגבי. משוך משם בקלילות ובסופו של דבר רשת הסופרה תשתחרר ואז ניתן יהיה להגיע לחלקים האחרונים של מעגל העורקים המפונקים. בשלב זה, יש לנקוט בזהירות רבה יותר כדי להסיר את כל ה-MAV שנותר על פני קליפת המוח הראשונית, השמיעתית והחזותית הגרגירית.

יש להסיר את כל ה-MAV האחורי של קליפת המוח האחורית שנקטף עם קטע MAV תלמי וקאלי השני הזה ולהוסיף אותו לקטע ה-MAV הראשון בקליפת המוח שנותח אם יש לנתח אותם בנפרד. לאחר מכן, כדי להשוות פרופילי ביטוי גנים בין קליפת המוח הקודקודית של הסטריאטום לאזורי MAV בתנאי בקרה, ניתן לבצע ניתוח ביטוי גנים באמצעות Agilent 0 1 4 8 7 9 גנום חולדה שלמה, ארבעה על 44, 060 מערכי אוליגונוקלאוטידים של MER. פרטים נוספים על עיבוד, סריקה ואחסון נתונים ראשוני ניתן למצוא ב-Thomas et al.

כאשר הדיסקציה מבוצעת כהלכה. רקמות ה-MAV המתקבלות צריכות להיות בשתי ישויות שלמות במשקל של כ-35 עד 45 מיליגרם בסך הכל. ה-MAV שנותח בתחילה המקיף את רוב קליפת המוח אמור לשקול כ-25 מיליגרם, וזה המכסה את התלמוס, הקלי וקליפת המוח העורפית צריך לשקול כ-15 מיליגרם.

הרקמה צריכה להיות בצבע ורדרד מעט משאריות הדם בכלי הדם. מקלעת הכורואיד הדו-צדדית שנקטפה צריכה להיות בשתי דגימות רקמה שלמות, כל אחת במשקל של מיליגרם עד שניים כפי שניתן לראות כאן. כאן אנו רואים השוואה של פרופילי ביטוי גנים בקליפת המוח הקודקודית של הסטריאטום ו-MAV בתנאי בקרה.

התרשים העליון מראה את הביטוי בסטריאטום בהשוואה לקליפת המוח הקודקודית. בעוד שהתרשים התחתון מראה ביטוי ב-MAV בהשוואה לקליפת המוח הקודקודית, ניתן לראות כי הסטריאטום וקליפת המוח הקודקודית קשורים זה לזה הרבה יותר מאשר ה-MAV. כאן אנו רואים את ביטוי הגנים הדיפרנציאלי ב-MAV בתגובה להיפרתרמיה בהשוואה לביקורת, בתגובה לאמפטמין בהשוואה לביקורת ובהיפרתרמיה לעומת אמפטמין.

לבסוף, כאן אנו רואים גנים עם ביטוי גדול מפי 15 ב-MAV בהשוואה לקליפת המוח הקודקודית והסטריאטום המאופיינים בתפקוד. רבים מהגנים הללו קשורים למערכת כלי הדם ו/או למערכת החיסון. גנים אחרים עם שינויים גדולים מאוד בקפל הם חלבוני מטריצה חוץ-תאיים, טרנספורטרים מוקפצים ומטבוליזם של שומנים וחומצה רטינואית.

בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להתאזר בסבלנות בעת ניתוח ה-MAV. חשוב גם שהמוח יישאר שקוע בתמיסת מלח איזוטונית או במי מלח עם פוספט במהלך כל הדיסקציה. כמו כן, הוא ממליץ לתרגל את החלק של ה-MAV על ארבע או חמש חולדות לפני השגת רקמות להפקת נתונים ניסיוניים.