Name: עכבר דגם orthotopic של סרטן המעי הגס (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:21:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: למד כיצד להקים מודל אורתוטופי של סרטן המעי הגס בעכברים לחקר התקדמות הגידול ולבדיקת טיפולים חדשים. שיטה זו מחקה את הסביבה הביולוגית הטבעית ומספקת תוצאות מחקר אמינות יותר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחלקה לכירורגיה, אוניברסיטת קליפורניה, סן פרנסיסקו ריימונד שאהין, MD

I. הכנה Cell <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתאי סרטן המעי הגס גדלים בתרבות שנקטפו כאשר subconfluent. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההשעיה תא בודד הוא הכין פוספט שנאגרו מלוחים ושמרה על הקרח. </li></ol> השנייה. גידול הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר עם גידול הוקמה בעבר המעי הגס תת עורית היא מורדמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגידול הוסר תת עורית באמצעות טכניקה סטרילית מחולק 2-3 חתיכות מ&quot;מ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתיכות הגידול נשמרים פוספט שנאגרו מלוחים על הקרח. </li></ol> ג. עכבר הכנה הערה: במעבדה שלנו אנו משתמשים בשאיפה isoflurane להרדים את העכבר, לחילופין, ניתן להשתמש בזריקות הרדמה כדי להשיג את אותו אפקט <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עומק ההרדמה היא הוערכה באמצעות צביטה הבוהן. לא צריך להיות שום לסגת רפלקס עם קמצוץ הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנטיביוטיקה יכולה להינתן בשלב זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר הרדים, אשר היה מגולח בעבר, ממוקם כראוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבטן היא prepped עם פתרון בבטאדין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבטן אתר כירורגי הם עטופים בצורה סטרילית. </li></ol> IV. Laparotomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניק קטן עשוי בעור </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שרירי הבטן הקיר הוא תפס והרים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלל הבטן הוא נכנס להב יחיד של המספריים משמש לדחוף את התוך בטני תוכן משם </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החתך מורחב 2-3 ס&quot;מ </li></ol> V. חשיפה של cecum <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cecum עם כיס סיום עיוור שלו מזוהה exteriorized </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cecum הוא מבודד משאר של העכבר בעזרת מראש לחתוך, גזה סטרילית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלוחים חם משמש כדי לשמור על לחות cecum </li></ol> VI. הזרקה של תאים לתוך החומה Cecal <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> G 27 או מחט עדינה משמש להזריק נפח 50 μL של תאים לתוך הקיר cecal </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המחט מוסרת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזריקה נבדק כדי להבטיח שאין דליפה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cecum הוא חזר אל חלל הבטן </li></ol> VII. השתלה של גידול על גבי cecum הערה: בנוסף הזרקת תאים לתוך הקיר cecal, גישה חלופית היא השתלת הגידול אל cecum <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דמות של תפר 8 מושם על cecum באמצעות 6-0 או 7-0 תפר בגודל </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקיר cecal ניזוק קלות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, פיסת הגידול ממוקם </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר הוא כבול </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cecum הוא חזר אל חלל הבטן </li></ol> VIII. דופן הבטן עכבר סגירת ושחזור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקיר עכבר בטן סגור באמצעות שלושה תפרים קטע באמצעות 3-0 או 4-0 תפר בגודל </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין, אפשר להשתמש תפר פועל פשוט </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הניתוח משככי כאבים וכן בולוס נוזלים יכולה להינתן בשלב זה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר הוא מותר להתאושש מן ההרדמה. </li></ol> הערה: עם הרדמה נשאפים זה בדרך כלל לוקח 30 שניות IX. תוצאות - הגידול הראשוני ו גרורות בכבד <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_8/A.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_9/B.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_10/C.png" alt="" /> הגידול הראשוני - הראו באתרו (A) עם עדות neovascularization (ב); על צביעת H &amp; E, גידולים פולשניים מקומי (C) <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_11/D.png" alt="" /> גרורות בכבד - הראו לשעבר vivo (ד)

<ol><li>Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Surg%22%5BJournal%5D)">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Dig Surg. 22, 16-25 (2005).</li>
<li>Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+colorectal+cancer+and+its+metastases+in+rodent+models%3A+comparative+aspects+with+those+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans.</a> Comp Med. 50, 16-26 (2000).</li>
<li>Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+and+ectopic+organ+environments+differentially+influence+the+sensitivity+of+murine+colon+carcinoma+cells+to+doxorubicin+and+5-fluorouracil%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil.</a> Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).</li>
<li>Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-rectal+injection+of+tumor+cells%3A+a+novel+animal+model+of+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer.</a> Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).</li>
</ol>

למרות העכבר מודלים תת עורית גידול קל להקים לפקח, ברור כי מודל זה לא יכול לשכפל את האתר האנטומי המקורי של סרטן המעי הגס. בשל השוני microenvironment, תאים סרטן המעי הגס גדל מתחת לעור הוכחו לשנות הפנוטיפ שלהם כמעט תמיד נכשלים התקדמות גרורות 1,2. למעשה, תגובת הגידול לטיפול יכולים להשתנות באופן דרמטי, תלוי אם התאים הסרטניים מושתלים חוץ רחמי (תת עורית) לעומת המיקום orthotopic 3. מודלים העכבר orthotopic של סרטן המעי הגס, אשר תכונה תאים סרטניים הגדלים במיקום הטבעי שלהם, לשכפל מחלות אנושי...

<table><tbody><tr><td>מדיום ותרכיבים לתרבית תאים</td><td></td><td></td><td>ישתנו בהתאם לקו התאים שבו נעשה שימוש</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline</td><td>BioWhittaker</td><td>17-512F</td><td>נמכר גם על ידי מספר ספקים אחרים</td></tr><tr><td>מבחנות צנטריפוגה 15 mL, פוליפרופילן</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>פלטות 6 בארות עם מכסה</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>פינצטת Iris, ישרה, קצוות משוננים</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>15914</td><td>מומלץ להחזיק זוג מכשירים אלו</td></tr><tr><td>מספרי דיסקציה Iris, ישרים, חדים</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט (רגיל)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14109</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט (Castroviejo)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14137</td><td></td></tr><tr><td>Cidex Plus</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>7364</td><td>יש לאוטקלאב את המכשירים מדי פעם, אך ניתן לעקרם גם על ידי השריה ב-Cidex</td></tr><tr><td>חוט תפירה 6-0 או 7-0</td><td></td><td></td><td>עבור העקום (cecum); באדיבות המחלקה לכירורגיה, UCSF</td></tr><tr><td>חוט תפירה 3-0 או 4-0</td><td></td><td></td><td>עבור דופן הבטן; באדיבות המחלקה לכירורגיה, UCSF</td></tr><tr><td>מכונת הרדמה / Isoflurane</td><td>J.A. Baulch and Associates</td><td>3206</td><td>נמכר גם על ידי מספר ספקים אחרים</td></tr><tr><td>משטח חימום, חד-פעמי, 6&quot; x 6&quot;</td><td>Prism Technologies</td><td>20419</td><td></td></tr><tr><td>סרט הדבקה, כתום, 13 mm x 13 m</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901F</td><td>לקיבוע עכבר מורדם</td></tr><tr><td>מכונת גילוח Pro-Cord/Cordless Trimmer</td><td>Oster Professional Products</td><td>78997-010</td><td>לגילוח פרוות העכבר</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td>ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי</td></tr><tr><td>גזה 2 x 2, 3 שכבות</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>7635</td><td>ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי</td></tr><tr><td>שדה סטרילי, מחסום, 16&quot; x 29&quot;</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>0905</td><td>ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי</td></tr><tr><td>מקלונים עם טיפ פח), 6&quot;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-960-3Q</td><td>ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי</td></tr><tr><td>מזרק, 10 cc, עם Luer lock tip</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>מזרק, 1 cc, טוברקולין, slip tip</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>מחט 27 1/2 G</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>מחט 30 G</td><td>BD Biosciences</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

עכבר דגם orthotopic של סרטן המעי הגס

Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

המודל הגידול המסורתי תת עורי הוא פחות אידיאלי לחקר סרטן המעי הגס. מודלים העכבר orthotopic של סרטן המעי הגס, אשר תכונה תאים סרטניים הגדלים במיקום הטבעי שלהם, לשכפל מחלות אנושיות עם איכות גבוהה. שתי טכניקות שניתן להשתמש בהם כדי לבסס את המודל הזה. טכניקות שניהם דומים דורש הרדמה העכבר laparotomy לחשיפה של cecum. אחת הטכניקות כולל הזרקה של השעיה סרטן המעי הגס התא בקיר cecal. תאים סרטניים גדלים הראשון תרבות, שנקטפו כאשר subconfluent ומוכן כמו השעיה תא בודד. נפח קטן של תאים מוזרק באיטיות, כדי למנוע דליפה. השיטה האחרת כרוכה השתלה של פיסת גידול תת עורי על cecum. עכבר עם גידול הוקמה בעבר המעי הגס תת עורית היא להרדים את הגידול הוסר באמצעות טכניקה סטרילית. היצירה הגידול מחולק לחתיכות קטנות להשתלה עכבר אחר. לפני ההשתלה, הקיר cecal ניזוק קלות כדי להקל על חדירת תאים סרטניים. הזמן לפתח גידולים ראשוניים גרורות בכבד ישתנו בהתאם הטכניקה, שורת תאים, ומינים העכבר בשימוש. זה מודל העכבר orthotopic שימושי לחקר התפתחות טבעית של סרטן המעי הגס בדיקות סוכני טיפולית חדשה נגד סרטן המעי הגס.

שתי טכניקות שניתן להשתמש בהם כדי לבסס את המודל הזה: הזרקה של השעיה תא סרטני בקיר cecal או השתלה של פיסת גידול תת עורי על cecum. מודל זה שימושי לחקר התפתחות טבעית של סרטן המעי הגס בדיקות סוכני טיפולית חדשה נגד סרטן המעי הגס.

המודל המסורתי של גידול תת-עורי אינו אידיאלי עבור חקר סרטן המעי הגס והחלחולת. מודלים אורתוטופיים של סרטן המעי הגס והחלחולת בעכברים, המאופיינים ב...

שלום, שמי וויליאם סנג. אני מהמעבדה של ד"ר אדגר אנגלמן במחלקה לפתולוגיה באוניברסיטת סטנפורד. אני גם תושב להתמחות בניתוחים באוניברסיטת קליפורניה סן פרנסיסקו.היום אראה לכם כיצד להקים מודל עכברי אורתוטופי של סרטן המעי הגס והרקטום. מודל זה שימושי לחקר ההתקדמות הטבעית של סרטן המעי הגס והרקטום ולבחינת חומרים טיפוליים חדשים נגד סרטן זה. זאת בניגוד למודל הגידול התת-עורי המסורתי.מודל הגידול התת-עורי אינו אידיאלי, שכן תאי גידול הגדלים תחת העור מפתחים פנוטיפ משונה ולעיתים קרובות אינם מצליחים להתפתח ולהתפשט (מטסטזיס). למעשה, התגובה של הגידול לטיפול עשויה להשתנות במידה ניכרת בהתאם לשאלה אם תאי הגידול הושתלו במיקום תת-עורי לעומת מיקום אורתוטופי. ניתן להשתמש בשתי טכניקות להקמת מודל אורתוטופי של סרטן המעי הגס והחלחול בעכברים.טכניקה אחת כוללת הזרקה של תרחיף תאי סרטן של המעי הגס לרקמה של ה-SQL. הטכניקה השנייה כוללת השתלה של פיסת גידול תת-עורי על העקום. שתי הטכניקות דומות וכוללות את השלבים הבאים, ראשית, הכנת התאים או הגידול.שנית, הכנת העכבר, לפרוטומיה וחשיפת העקום. שלישית, הזרקת תאים או השתלת גידול, ורביעית, סגירת דופן הבטן של העכבר והתאוששות. בואו נתחיל.עבור הפרוצדורה היום, אנו משתמשים במספר מכשירים שונים. אלו הם פינצטות, מספריים, מחזיק מחטים רגיל ומחזיק מחטים מסוג Castro Viejo. ובאופן חשוב לפרוצדורה

orthotopic-mouse-model-of-colorectal-cancer

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול ליצירת מודל עכבר סרטן המעי הגס קסנוגרפט אורתוטופי הנגזר ממטופל כדי לחקור את התקדמות תאי סרטן המעי הגס בעכברים שאינם סובלים מהשמנת יתר/כשל חיסוני משולב חמור (NOD/SCID). מודל מורין זה מסייע בהבנת צמיחת הגידול הראשונית ותבנית גרורות.

יצירת מודל עכבר PDOX של סרטן המעי הגס: חקר התקדמות סרטן המעי הגס במודל מורין

סרטון זה מתאר את הטכניקה של יצירת אורגנואידים CRC המומרים על ידי חלקיקים לנטי-ויראליים של GFP המאפשרים הדמיה פלואורסצנטית. אורגנואידים אלה המסומנים ב-GFP, כאשר הם ממוקמים במודלים של בעלי חיים, מסייעים לחקור פלישה וגרורות של גידולים.

CRC Organoid Cell Labeling: שיטה ליצירת תאי אורגנואיד של סרטן המעי הגס GFP Lentivirus

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול לביסוס מודל עכבר גרורות ספונטני של קסנוגרפטים או PDX שמקורם בסרטן המעי הגס. מודלים אלה של xenograft מחקים חלקית את המאפיינים של קרצינומה אנושית ומבינים את ההיבטים הקריטיים של ממאירויות אנושיות, כולל פלישה וגרורות.

מודלים ספונטניים של גרורות בעכבר: פלטפורמה לחקר הפוטנציאל הגרורתי של תאי סרטן המעי הגס בהזרקה אורתוטופית

הסרטון מתאר את הטכניקה להזרקה עקתית של תאים סרטניים לפיתוח מודל עכבר אורתוטופי עם גידולים אחידים ביותר. לכן, מודל העכבר האורתוטופי מאפשר הדמיה מציאותית של גרורות, ומספק כלי רב ערך לחקר השינויים בפנוטיפ במהלך צמיחת הגידול והפצתו.

הזרקת תאי גידול עקבתיים: טכניקה להעברת תאים סרטניים להקמת מודל עכבר אורתוטופי לסרטן המעי הגס

מטרת פרוטוקול זה היא ליישם הדמיית תהודה מגנטית משופרת בניגודיות דינמית (DCE-MRI) עבור השתלות גידול לבלב אורתוטופי בעכברים. DCE-MRI היא שיטה לא פולשנית לניתוח מיקרו-כלי דם ברקמת מטרה, ושימושית להערכת תגובת כלי הדם בגידול לאחר טיפול חדשני.

הדמיית תהודה מגנטית משופרת ניגודיות דינמית של דגם orthotopic סרטן לבלב עכבר

היכולת של שיבוטים גרורתיים ליישב אתרים מרוחקים תלויה ביכולת ההתפשטות שלהם ו/או ביכולתם לשרוד במיקרו-סביבה המארחת ללא התפשטות משמעותית. כאן, אנו מציגים מודל של בעלי חיים המאפשר הדמיה כמותית של שני סוגי ההתיישבות בכבד על ידי שיבוטים גרורתיים.

מתקדם במודל חיה של גרורה גסה בכבד: טכניקות הדמיה ונכסים של משובטים גרורתי

אנו מתארים את הקמתם של גידולים המעי הגס אורטוטופיים באמצעות הזרקה של תאים סרטניים או אורגנואידים לתוך cecum של עכברים הבידוד הבאים של תאים סרטניים במחזור (CTCs) מן המודל הזה.

בידוד של תאים סרטניים במחזור מודל עכבר אורתופטי של סרטן המעי הגס

פרוטוקול להקמת מודל עכבר מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס על ידי זיהום adeno-cre קטע ו מעקב שלה באמצעות קולונוסקופיה ברזולוציה גבוהה מוצג.

דגם עכבר מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס ספוראדי

פרוטוקול זה מתאר את הדור של החולה הנגזר הנושא מודלים מבע על ידי פנים-ומבחינה משפטית הקניית תאים קרצינומה של תא ברמה גבוהה urothelial או פנים-rectally הזרקת תאים סרטניים המעי הגס לתוך סוכרת שמנים/חמור משולב כשל חיסוני (הנהון/SCID) עכברים לגידול הגידול הראשוני גרורות מתחת להשפעה של תאים סטרומה בצומת הלימפה, אשר מחקה את ההתקדמות של מחלות גרורתית האדם.

מטופל-נגזר אורתוטופית מודלים של תאים האדם Urothelial קרצינומה של סרטן המעי הגס ואת הגידול גרורות ספונטנית

פרוטוקול זה מתאר השתלה אורתוטופית של תאים סרטניים שמקורם בחולה בדופן הצקום של עכברים מדוכאי חיסון. המודל משחזר מחלה גרורתית מתקדמת של סרטן המעי הגס והחלחולת ומאפשר הערכה של תרופות טיפוליות חדשות בתרחיש רלוונטי קלינית של גרורות ריאה וכבד.

השתלה אורתוטופית של תאים סרטניים שמקורם בחולה בעכברים משחזרת סרטן מעי גס מתקדם

מחקר זה מתמקד באינדוקציה תת עורית in vivo של תאי סרטן המעי הגס הזוהרים במודל עכברי ובמדידת הזוהר שלאחר מכן באמצעות מערכת הדמיה. ההליך נועד לבסס מודל גידול הניתן לשחזור לניטור והערכה טיפולית בזמן אמת.

הזרקה תת עורית של תאי סרטן המעי הגס האנושיים בעכברים עירומים אתימיים להערכת יעילות אנטי-גידולית

למד כיצד להקים מודל אורתוטופי של סרטן המעי הגס בעכברים לחקר התקדמות הגידול ולבדיקת טיפולים חדשים. שיטה זו מחקה את הסביבה הביולוגית הטבעית ומספקת תוצאות מחקר אמינות יותר.

עכבר דגם orthotopic של סרטן המעי הגס

גלה סרטונים נוספים