Name: גרימת Myointimal היפרפלזיה נגד טרשת עורקים בעכברים: מבוא של שני מודלים חוקיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: למד שני מודלים חוקיים לגרימת היפרפלזיה מיאו-אינטימלית וטרשת עורקים בעכברים. השיטות כוללות קטטריזציה בלון ומניפולציה תזונתית בעכברי APOE null, המאפשרות חקר מנגנוני הצרת עורקים שונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לכריסטיאן Pahrmann לקבלת סיוע טכני. האס זכה למימון (DFG) (SCHR992/3-2 וSCHR992/4-2).

כל העבודה של בעלי החיים צריכה להתבצע על פי הנחיות טיפול בבעלי החיים רלוונטיות. לקבל את אישור מוסדי לעבודה של בעלי חיים לפני פרוטוקול התחלה. 1. Myointimal היפרפלזיה דגם () עבור דגם היפרפלזיה intimal, לרכוש C57BL/6J (מספר מניות 000,664, C57BL/6J) עכברים בגיל 8 שבועות במשקל של כ 25 גרם. עכברי בית לניסויים האלה בתנאים קונבנציונליים; להאכיל את האוכל בעכבר סטנדרטי עכברים ולספק כרצונך מים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת עכבר: להכניס את העכבר למצב הרדמה עם isoflurane (2%), תוך ניצול תא אינדוקציה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר את השיער בבטן באמצעות גוזם שיער, להניח את העכבר על גבה ולכסות את האף והפה שלה עם facemask כדי להבטיח את ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם Provo-יוד, לחטא את אזור הבטן באופן אוניברסלי, ואחריו 80% אתנול, בשני מחזורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבטיח היעדרשל רפלקסים על ידי צובט את הגפיים האחורי כדי לפקח על העומק מספק של הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את העור ושרירים לאורך alba Linea בשני שלבים כדי לחשוף את איברי הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המעיים בכפפה מלוחה לחות. עטוף את הכפפה סביב המעיים כדי לשמור אותם לחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקשב רב לסלק את רקמת שומן ציפוי מקצועית אב העורקים בבטן. לחשוף את אב העורקים infrarenal עד להסתעפות שלה, נזהר שלא לפגוע בכל כלי שיט של הסניף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית, מקום מהדק microsurgical על הפרוקסימלי, אב העורקים infrarenal לסגור את זרימת הדם. עכשיו, להחיל מהדק דיסטלי שני ליד הסתעפות של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר זרימת הדם נקטעה, לעשות חתך קטן לתוך אב העורקים קרובים למהדק הפרוקסימלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הצנתר שקצהו הבלון, אשר כבר לחות עם מי מלח 0.9%, ולהתקדם לעבר המהדק הדיסטלי של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפציעה אנדותל, לחשוף את אב העורקים באמצעות ניפוח balloon מושך בזהירות ובאיטיות את הקטטר לכיוון של המהדק הפרוקסימלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תרגיל denudation פעמיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקטטר ולסגור את חתך אב העורקים באמצעות 10-0 תפרי ריצה prolene. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פותח בזהירות את מהדק דיסטלי. במקרה של דימום באתר aortotomy, סגור את המהדק שוב, לאתר את הדימום ולמקם את התפרים קטע נוספים, במידת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם ניתן להבחין אין דימום, פתח לאט את המהדק הפרוקסימלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דופק של אב העורקים צריך להיות גלוי distally מהחתך. כעת ניתן לארגן בחזרה את המעיים באתרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את חלל בטן ניצול תמיסת מלח סטרילית מחוממת מראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את דופן הבטן מתחילה עם שכבת השרירים באמצעות תפרי 6-0 ריצה prolene. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבא להתאים את העור מתחת לשימוש ב5-0 תפרי ריצה prolene ביצוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הזמן את העכבר הוא עדיין מורדם, להחיל 4-5 מ&quot;ג / קילוגרם Carprofen באמצעות inje תת עוריתction. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת Metamizol למי השתייה (50 Metamizol מ&quot;ג ל100 מיליליטר) לשליטה בכאב ולהמשיך לפוסט 3 ימי ניתוח. לפקח על בעלי חיים בכל התאוששות. הערה: תקופת התצפית עבור דגם זה היא 28 ימים. </li></ol></li></ol> 2. טרשת עורקים דגם (B) למודל טרשת עורקים, לרכוש אפוליפופרוטאין E-לקויה (ApoE - / -) עכברים (מספר מניות 002,052, B6.129P2-Apoetm1Unc / J) בגיל 4 שבועות, ולאחר מכן האכיל ל4-6 חודשים. עכברי בית לניסויים האלה בתנאים קונבנציונליים; להאכיל את עכברי התזונה עתירה שומנים מערביות עם הגעה (הרלן מעבדות TD.88137) ולספק כרצונך מים למשך תקופה של 4 עד 6 חודשים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת עכבר: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להאכיל את ApoE - / - עכברים עם תזונה מערבית מתחילים ב 4 שבועות של גיל. מניפולציה תזונתית צריכה להתחיל ישירות בעת הגעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על דיאטה מערבית לאורך תקופת הניסוי. &lt;/ Li&gt; </ol></li></ol> 3. ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מודל היפרפלזיה Myointimal () האזור של עניין במודל זה הוא &quot;אזור הנגע&quot;. אפשרויות לניתוח כוללות מחיקת luminal, יחס I / M (יחס אינטימה / מדיה), עובי myointima מקסימאלי, אזור myointimal, מכתים Trichrome לסיסטיק, וצביעת H &amp; E לתאים חד גרעיניים (כפי שמודגם באיורים 1A-1C). על פי השאלה המדעית ניתן ליישם stainings רב אחר כמו אדום Picrosirius לקולגן, אימונוהיסטוכימיה, ושיטות confocal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מודל טרשת עורקים (ב &#39;) האזורים של עניין במודל זה הם שסתום אב העורקים, קשת אב העורקים, כמו גם את אב העורקים היורדים. אפשרויות לניתוח: מכתים סודן אדום לשומנים וTrichrome הכתמה של שסתום אב העורקים, קשת אב העורקים ואב העורקים יורדים (כפי שמודגם באיור 1D). מודל זה גם תשואות מגוון רחב של אפשרויות צביעה אחרות כמולמשל שמן האדום O לשומנים ניטראליים, אדום Picrosirius, אימונוהיסטוכימיה, ושיטות confocal. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צביעה אדומה סודן: בצע הצביעה האדומה סודאן על רקמת אב העורקים טריים שנקטפו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את 6 שעות הדיאטה לפני הקציר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג את העכבר למצב הרדמה עם isoflurane (2%), תוך ניצול תא אינדוקציה. מבטיח היעדר רפלקסים על ידי צובט את הגפיים האחורי כדי לפקח על העומק מספק של הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את החזה; לנתק את השיא של הלב וינקב דרך החדר השמאלי, ראשון עם מי מלח (3 מיליליטר), ואחריו PFA 4% (3 מיליליטר) דרך שורש אב העורקים לתקן את אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחרר את אב העורקים מהשורש ועד להסתעפות שלה. נסה להסיר את רקמת שומן ככל האפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את הלב ואת שורש אב העורקים, ולאחסן אותם בPFA 4% להיסטולוגיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להיסטולוגיה שורש אב העורקים יש לזהירות יוצב בבלוק פרפין בתנוחה זקופה כדי לאפשר החיתוך של AORשקופיות מניבת שורש טיק המציגות את כל 3 עלונים מסתמית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך קצה אחד של עץ אב העורקים ולתקן אותה על שכבת סיליקון עם סיכות בסדר. לפתוח את אב העורקים אורכים ולתקן את הרקמות של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את הרקמה עם 50% אתנול. לטבול את הרקמה עם פתרון מכתים סודן III עבור -15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף בעדינות עם 50% אתנול להסיר את סודאן III העודף. (הערה: 50% אתנול עשוי לשטוף את הצבע משם.) לשטוף עם DH 2 O, ולצלם לניתוח נוסף. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Manuel, D. G., Leung, M., Nguyen, K., Tanuseputro, P., Johansen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+cardiovascular+disease+in+Canada%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Burden of cardiovascular disease in Canada.</a> Can J Cardiol. 19, 997-1004 (2003).</li>
<li>ER, O. B., Ma, X., Simard, T., Pourdjabbar, A., Hibbert, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+neointima+formation+following+vascular+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Hematol+Disord+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of neointima formation following vascular injury.</a> Cardiovasc Hematol Disord Drug Targets. 11, 30-39 (2011).</li>
<li>Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathogenesis+of+atherosclerosis%3A+a+perspective+for+the+1990s%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The pathogenesis of atherosclerosis: a perspective for the 1990s.</a> Nature. 362, 801-809 (1993).</li>
<li>Meng, X., Zhang, F., Valji, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+guidance+for+the+creation+of+a+small+animal+model+of+aortic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Interv+Radiol%22%5BJournal%5D)">Ultrasound guidance for the creation of a small animal model of aortic injury.</a> J Vasc Interv Radiol. 22, 1193-1197 (2011).</li>
<li>Deuse, T., Koyanagi, T., Erben, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+inhibition+of+epsilon+protein+kinase+C+inhibits+vascular+restenosis+after+balloon+injury+and+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Sustained inhibition of epsilon protein kinase C inhibits vascular restenosis after balloon injury and stenting.</a> Circulation. 122, 170-178 (2010).</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Sultan, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+restenosis+development+after+mechanical+injury%3A+a+new+field+of+application+for+malononitrilamides%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of restenosis development after mechanical injury: a new field of application for malononitrilamides.</a> Cardiology. 108, 128-137 (2007).</li>
<li>Tao, M., Mauro, C. R., Yu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+murine+intimal+hyperplasia+model+founded+on+a+focal+carotid+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">A simplified murine intimal hyperplasia model founded on a focal carotid stenosis.</a> Am J Pathol. 182, 277-287 (2013).</li>
<li>Kumar, A., Lindner, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+with+neointima+formation+in+the+mouse+carotid+artery+after+cessation+of+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).</li>
<li>Hua, X., Deuse, T., Michelakis, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+internal+mammary+artery+%28IMA%29+transplantation+and+stenting%3A+a+human+model+to+study+the+development+of+in-stent+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Human internal mammary artery (IMA) transplantation and stenting: a human model to study the development of in-stent restenosis.</a> J Vis Exp. , 3663(2012).</li>
<li>Daugherty, A., Whitman, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+atherosclerosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantification of atherosclerosis in mice.</a> Methods Mol Biol. , (2003).</li>
<li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ApoE-deficient+mice+develop+lesions+of+all+phases+of+atherosclerosis+throughout+the+arterial+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb%22%5BJournal%5D)">ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree.</a> Arterioscler Thromb. 14, 133-1340 (1994).</li>
<li>Zhang, Y., Li, L., You, J., Cao, J., Fu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+7-difluoromethyl-5%2C+4%27-dimethoxygenistein+on+aorta+atherosclerosis+in+hyperlipidemia+ApoE%28-%2F-%29+mice+induced+by+a+cholesterol-rich+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">Effect of 7-difluoromethyl-5, 4'-dimethoxygenistein on aorta atherosclerosis in hyperlipidemia ApoE(-/-) mice induced by a cholesterol-rich diet.</a> Drug Des Devel Ther. 7, 233-242 (2013).</li>
<li>Rudolph, T. K., Rudolph, V., Edreira, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitro-fatty+acids+reduce+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Nitro-fatty acids reduce atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 30, 938-9345 (2010).</li>
<li>Rondelet, B., Kerbaul, F., Motte, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bosentan+for+the+prevention+of+overcirculation-induced+experimental+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Bosentan for the prevention of overcirculation-induced experimental pulmonary arterial hypertension.</a> Circulation. 107, 1329-1335 (2003).</li>
<li>Zeibig, S., Li, Z., Wagner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+oxLDL+binding+protein+Fc-CD68+on+plaque+extension+and+vulnerability+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of the oxLDL binding protein Fc-CD68 on plaque extension and vulnerability in atherosclerosis.</a> Circ Res. 108, 695-703 (2011).</li>
<li>Painter, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myointimal+hyperplasia%3A+pathogenesis+and+implications.+2.+Animal+injury+models+and+mechanical+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+organs%22%5BJournal%5D)">Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors.</a> Artificial organs. 15, 103-118 (1991).</li>
<li>Nitschke, Y., Weissen-Plenz, G., Terkeltaub, R., Rutsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Npp1+promotes+atherosclerosis+in+ApoE+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cellular+and+molecular%22%5BJournal%5D)">Npp1 promotes atherosclerosis in ApoE knockout mice.</a> Journal of cellular and molecular. 15, 2273-2283 (2011).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

למרות ששני המחלות גורמות לסימפטומים דומים אצל המטופל, את מנגנוני התפתחות פלאק ולכן הגישות הטיפוליות הם שונים מאוד 2. בצורות שונות של היצרות העורק הממצאים הקליניים בחולים, כמו גם את מסגרת הזמן של התפתחות רובד תלויה במנגנון הבסיסי. בהתאם לממצאים הקליניים בחולה, שיטות שונות של ניתוח מדגם חייבת להתבצע 5,15. יש צורך להתאים את הניתוח לממצאים האופייניים במחלה כי הוא חיקה על ידי המודל שנבחר 14....

במדינות מתועשות מחלת לב איסכמית נשארה גורם מוביל לתמותת 1. הגורמים להיצרות של עורקים הכליליים הם מגוונים וכוללים היפרפלזיה myointimal כמו גם טרשת עורקים, עם revascularization נותר אסטרטגית הטיפול הנפוצה ביותר 2. מודלים מחקר שלהבחין בין המסלולים מכניסטית של היפרפלזיה intimal וטרשת עורקת באופן ברור הם חיוניים כדי לחקור את pathobiological ותהליכי pathophysiological בפיתוח פלאק בעורקים. בסרטון הזה שני דגמי עכבר שונים המשמשים ללימודים או ההתפתחות של היפרפלזיה myointimal או טרשת עורקים הם הציגו. היפרפלזיה Myointimal הוא הניח ליצירת באמצעות פרדיגמה &quot;תגובה לפציעה&quot; שתוארה במקור לטרשת עורקת 3. ההפרעה מכאנית של שכבת האנדותל מובילה לשיפוץ אינטנסיבי משופר על ידי אפקטים אוטוקריני. ישנם כמה diמודלים של בעלי החיים fferent הנפוצים ללמוד היפרפלזיה myointimal. חלק מהקבוצות משתמשות בהתקני מתכת באב העורקים העולה של חולדות 4. מודל denudation אב העורקים בוצע עם צנתר בלון הוא גם בשימוש נפוץ בחולדות מעבדה 5,6. מודל היפרפלזיה intimal שבוצע בעכברי מעבדה 7 מיישם קשירה של עורק הצוואר וגורם לנגעי myointimal 8. במעבדה שלנו, מודל denudation אב העורקים בבטן - כדי ללמוד את ההתפתחות של היפרפלזיה myointimal - כמו גם דגם restenosis סטנט האנושי 9 משמשים בדרך כלל. וידאו זה מדגיש כי בחירת מודל החיה הניסיונית הנכון היא קריטית עבור מחקרים מכניסטית או pathophysiologic של היצרות העורק. מודלים היפרפלזיה Myointimal יש להבחין בין מודלים טרשת עורקים. באפשרות השנייה, (ApoE - / -) E-חסר אפוליפופרוטאין עכברים בשילוב עם תזונה מערבית משמשים בדרך כלל כדי לגרום atherosclנגעים ארוטיים 10,11,12,13. דוגמאות לאינדוקציה של שני סוגים אלה של מחלה בעכברי myointimal מוצגות כאן, יחד עם אפשרויות מותאמות מודל שונים לנתח היצרות כלי 14.

<table><tbody><tr><td>מרק תיוגליקולט 3%</td> <td>אבקת</td> <td>פלוקה</td><td>70157</td></tr><tr><td>PFA 4%</td> <td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>#157135S</td><td>20%</td></tr> <tr><td>סודאן III תמיסת צביעה</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>S4131</td><td>עכבר אבקה</td></tr><tr><td>C57BL / 6J</td><td>מעבדות ג'קסון</td><td>מלאי # עכבר 0006664</td><td></td></tr><tr><td>ApoE -/-</td><td>מלאי מעבדות ג'קסון</td><td>#002052</td><td></td></tr><tr><td>Western Diet</td><td>Harlan Laboratories</td><td>TD.88137</td><td></td></tr><tr><td>קוצץ שיער</td><td>WAHL</td><td>8786-451A ARCO SE</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott</td><td></td><td>Isoflurane</td></tr><tr><td>מהדק מיקרוכירורגי</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td>Micro-Serrefine -</td></tr><tr><td>מוליך מהדק</td> 4 מ"מ <td>Fine Science Tools</td><td>18056-14</td><td></td></tr><tr><td>קטטר</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 תפר פרולן</td><td>Ethicon</td><td>788G</td><td></td></tr><tr><td>6-0 תפר פרולן</td><td>Ethicon</td><td>8709H</td><td></td></tr><tr><td>5-0 תפר פרולן</td><td>Ethicon</td><td>EH7229H</td><td></td></tr><tr><td>רימאדיל</td><td>פייזר</td><td></td><td>קרפרופן</td></tr><tr><td>Metacam 1.5 מ"ג/מ"ל</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td></td><td>Metamizol</td></tr></tbody></table>

גרימת myointimal היפרפלזיה נגד טרשת עורקים בעכברים: מבוא של שני מודלים חוקיים

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

במודלים של מכרסמים מעבדה שונים vivo לאינדוקציה של היצרות של עורק הוקמו כדי לחקות מחלות הכוללות היווצרות הפלאק בעורקים והיצרות, כפי שנצפה לדוגמא במחלת לב איסכמית. שני דגמים מאוד לשחזור עכבר - שניהם וכתוצאה מכך היצרות של עורק אבל בכל בסיס מסלול של פיתוח שונה - הם הציגו כאן. המודלים מייצגים את שתי סיבות השכיחות ביותר של היצרות של עורק; כלומר מודל אחד עכבר עבור כל היפרפלזיה myointimal, טרשת עורקים מוצגים. כדי לגרום להיפרפלזיה myointimal, פגיעת קטטר בלון של אב העורקים בבטן מבוצעת. להתפתחות של רובד טרשתי, ApoE - משמש מודל העכבר בשילוב עם דיאטת שומן מערבית - /. אפשרויות מותאמות מודל אחרים למדידה וההערכה של התוצאות בשם ותיארו בכתב היד הזה. ההקדמה והשוואה בין שני מודלים אלה מספק informatיון למדענים לבחור את מודל היצרות של עורק המתאים בהתאם לשאלה המדעית שאלה.

איור 1 מציג אפשרויות ניתוח שונות ומצב מחלה הנגרם לשני הדגמים. עבור דגם היפרפלזיה intimal, הניתוח של חתכי נציג בTrichrome מכתים מוצג. מחתכים אלה, תוצאות כמו יחסיי / מ &#39;, עובי שלט מרבי, עובי intimal מרבי בלומן, מחיקת luminal באחוזים, כמו גם שטח שלט ניתן למדוד ומחושבות. כדי להעריך את התוצאה של מודל טרשת עורקים, ניתן להשתמש בכל השיטות בשם הנ&quot;ל. בנוסף, באזור הלוחית כמוני באב העורקים בבטן, בהי...

וידאו זה מראה שני מודלים של פיתוח פלאק בעורקי intimal עכבריים ומדגיש את ההבדלים בהיפרפלזיה myointimal וטרשת עורקת.

גרימת Myointimal היפרפלזיה נגד טרשת עורקים בעכברים: מבוא של שני מודלים חוקיים

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא להציג שני מודלים חייתיים תקפים המובילים להיצרות של אבי העורקים (aorta) באמצעות מנגנונים שונים. המודל הראשון הוא צנתור בבלון של אבי העורקים כדי ליצור התפתחות של היפרפלזיה מיואינטימלית (myo intimal hyperplasia). ראשית, חושפת ונסגרת באמצעות תפסנית אבי העורקים הבטנית התת-כלייתית (infrarenal abdominal aorta).לאחר מכן פותחים את האורטה באמצעות חתך רוחבי ומכניסים את קטטר הבלון. לאחר מכן מקלפים את האנדותל של האורטה באמצעות הקטטר מנופח ומסיימים את הניתוח. המודל השני הוא מניפולציה תזונתית של עכברים טרנסגניים מסוג APOE null ליצירת פלאקים אתרוסקלרוטיים.עכברים אלו מחזיקים בתנאים סטנדרטיים ומוזנים בתזונה מערבית עשירה בשומנים במשך ארבעה עד שישה חודשים. בסופו של דבר, ניתוח היסטולוגי של היפרפלזיה מיו-אינטימלית שהושרה בניתוח ושל מודל הגבלת תזונה מראה שהם מובילים להיצרות לומנלית שונה. היום נציג בפניכם שני מודלים שונים להשראת היצרות לומנלית: מודל עכברים המשתמש בקטטר בלון להשראת פגיעה בכלי דם, ומודל של טרשת עורקים.שימוש בעכברים טרנסגניים בתזונה מערבית, מודל קטטר הבלון יכול לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הסטנוזיס. מודל עכברים טרנסגניים הומוזיגוטים של מוטציית upper E משמש לחקר הפתופיזיולוגיה של טרשת עורקים. עבור מודל ההיפרפלזיה האינטימלית, השג עכברים מסוג C 57 black six J השוקלים כ-25 גרם.יש לתחזק אותם בתנאים רגילים עם תזונה רגילה. לאחר הרדמת העכבר באמצעות 2% isof fluorine, יש לגזום את שיער הבטן ולהחדיר carprofen בזריקה תת-עורית לצורך אלגזיה. לאחר מכן, יש לחטא את העור לסירוגין עם Provo iodine ו-80% ethanol בשני מחזורים.כעת בדקו את היעדרו של רפלקסים באמצעות צביטה בבוהן. התחילו את הניתוח על ידי הפרדת העור והשריר לאורך ה-linea alba. לאחר מכן, עטפו את המעיים בכפפה שהורטבה בסלין, ואז בזהירות, הסירו את רקמת השומן כדי לחשוף את האורטה הבטנית.כעת חשפו את האורטה התת-כלייתית (infrarenal aorta) עד להסתעפותה. יש להיזהר לא לפגוע בכלי דם מסתעפים. כעת סגרו את האורטה באמצעות תפסן (clamp).ראשית, הנח תפס מיקרו-כירורגי על העורק האורטה האינפרא-רנלי הפרוקסימלי כדי לחסום את זרימת הדם. שנית, הנח תפס דיסטלי שני בסמוך למתשעפות האורטה. כאשר זרימת הדם נפסקת, בצע חתך קטן באורטה קרוב לתפס הפרוקסימלי.הכנס את הקטטר לכיוון התסמיך הדיסטלי של האורטה כדי ליצור פגיעה אנדותללית. בצע דנודציה של האורטה על ידי ניפוח בלון הקטטר ומשיכה זהירה ואיטית של הקטטר לכיוון התסמיך הפרוקסימלי. חזור על תמרון זה פעמיים, לסך הכל שלושה ניפוחים של האורטה.כעת הוצא את הקטטר וסגור את החתך באביון באמצעות תפרים רציפים של 10 au proline. כאשר התפרים במקומם, פתח בזהירות את התפס הדיסטלי; אם יש דימום באתר האוטוטומיה של ה-AOR, סגור שוב את התפס, אתר את מקור הדימום ועצור אותו באמצעות תפרים נפרדים נוספים.כאשר אין דימום, פתח לאט את התסמיך הפרוקסימלי. דופק אאורטלי אמור להיות נראה כדיסטאלית לחתך. כעת סדר את המעיים ב-C two.בשלב הבא, סגרו את דופן הבטן החל משכבת השריר באמצעות שש תפרי רצף מסוג OTT proline. לאחר מכן, סגרו את העור באמצעות חמישה תפרי OTT והעבירו את העכבר בחזרה לכלובו. במהלך שלושת הימים הראשונים לאחר הניתוח, הוסיפו metrazole למי השתייה לצורך שיכוך כאבים.יש לעקוב אחר בעל החיים לאורך תקופת ההחלמה, הנמשכת כ-28 ימים. עבור מודל טרשת העורקים, השג עכברים בני ארבעה שבועות עם חסר ב-POE. השכן עכברים אלו בתנאים סטנדרטיים עם תזונה מערבית עשירה בליפידים למשך ארבעה עד שישה חודשים.יש להקפיד על תזונה זו לאורך כל הניסוי. שש שעות לפני קצירת האורטה, יש להפסיק את הגישה למזון. לאחר מכן, הכין את העכבר לניתוח כפי שמתואר בסעיף הקודם.התחילו את הניתוח בפתיחת בית החזה. לאחר מכן, חתכו את שיאו (apex) של הלב ובצעו פרפוזיה תחת לחץ עדין של 3 mL של 4% Paraformaldehyde דרך שורש האאורטה כדי לקבע אותה. לאחר מכן, שחררו את האאורטה מהשורש ועד למפגש הפיצול (bifurcation) שלה.נסו להסיר כמה שיותר מהרקמה השומנית. לאחר מכן, חתכו את קשת האבהרי (aortic arch) ושמרו אותה ב-4% paraformaldehyde. כעת העבירו את הלב ואת עץ האבהרי לצלוחית מצופה סיליקון המכילה PBS.חתכו קצה אחד של עץ האביונים (aortic tree) וקבעו אותו לשכבת הסיליקון בעזרת סיכות עדינות. פתחו את האביון לאורכו ואפשרו לרקמת האביון להשקיע ב-PBS בטמפרטורת החדר למשך מספר דקות. לאחר מכן, שטפו את הרקמה פעם אחת ב-50% ethanol והטבילו אותה באמבט של Sudan.שלוש, תמיסת צביעה למשך כ-15 דקות. לאחר הצביעה, שטפו במהירות את הרקמה ב-50% ethanol למשך מספר שניות כדי להסיר רק את עודפי ה-Sudan. שטיפה יתרה תסיר יותר מדי צבע; שטפו מיד את הרקמה במים מזוקקים והמשיכו להדמיה. עבור מודל ההיפרפלזיה של האינטימה והמדיה (myo intimal hyperplasia), נגזרו אאורטות של עכברים לאחר הסרה של שכבת האינטימה (denuded), נטמנו בפרפין ונצבעו ב-chrome. יחסי ה-Im חושבו מנתחי צביעת ה-tri chrome על ידי מדידת עובי האינטימה והמדיה.באמצעות ניתוח ממוחשב ולאחריו חישוב היחס, נמדד עובי הפלאק המקסימלי כעובי האינטימה המקסימלי בחלל הלומן באמצעות morpho tree ממוחשב. אחוז החסימה של הלומן חושב כיחס בין הלומן הפנימי החדש ללומן הקודם. שטח הפלאק חושב על ידי חיסור הלומן הפנימי החדש מהלומן הקודם.אותם ניתוחים בוצעו על חתכים רוחביים צבועים ב-tri chrome של מודל האתרולרוזיס במסתם האאורטלי, בקשת האאורטה ובאאורטה היורדת עבור מודל האתרולרוזיס בלבד. האאורטה היורדת נפתחה לאורכה ונצבעה ב-Sudan red. שטח הפלאק והשטח הכולל של האאורטה נמדדו בעזרת מחשב לצורך ניתוח של שני המודלים.ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון היסטופתולוגיה ומיקרוסקופיה אימונופלואורסצנטית קונפוקאלית, כדי לענות על שאלות הנוגעות לאובלציה לומנלית, מורפולוגיה ותאיות. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

inducing-myointimal-hyperplasia-versus-atherosclerosis-mice-an

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מתארים פרוטוקולים לarteriosclerois שוחדנו העכבר (GA) דגמים אשר כרוך חציצה של מגזר כלי עכבר לנמען של אותו הזן המולד. על ידי backcrossing שינויים גנטיים נוספים לתורם הכלי, המודל יכול להעריך את ההשפעה של גנים ספציפיים על GA.

מודלים עכבר לטרשת עורקים שתל

אנו מתארים הליכים לכימות ואפיון נגעים טרשת עורקים במודלים של עכברים באמצעות חתך מדויק של סינוס אבי העורקים ואבי העורקים העולה בשילוב עם ניתוח היסטוכימי ואימונוהיסטוכימי.

ניתוח כמותי ואפיון של נגעים טרשת עורקים בסינוס אבי העורקים של העכברים

מודלים של בעלי החיים הוכיחו להיות כלי רב ערך בהגדרת מנגנונים ספציפיים מארח ופתוגן שתורמים להתפתחות של דלקת כרונית. כאן אנו מתארים מודל עכבר של זיהום אוראלי עם הפתוגן האנושי Porphyromonas gingivalis ומתודולוגיות פרט כדי להעריך את ההתקדמות של דלקת באתרים מקומיים ומערכתיים.

מודל של עכברים של דלקת כרונית הנגרם על ידי פתוגן באתרים מקומיים ומערכתיים

מודל פציעת חוט עורק הירך העכבר של היצרות הוא מאתגר מבחינה טכנית. בפרוטוקול זה אנו מציגים את הפרטים הטכניים מפתח חיוניים לביצוע בהצלחה פציעת חוט כדי לגרום neointima העקבי למחקרים של היצרות.

דגם Murine של עורקי היצרות: היבטים טכניים של עצם הירך חוט פגיעה

מחקר זה מתאר הליך פולשני עבור אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים. בהשוואה לשיטות אחרות באמצעות פגיעה חשמלית או הקפאה, פציעה כתוצאה מכני מחקה את המצב האנושי של restenosis לאחר טיפולים revascularization והוא אידיאלי לחקר המנגנונים המולקולריים המעורבים.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal (MH) לאחר פציעה בלון אבי העורקים.

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר

מודלים murine של טרשת עורקים הם כלים שימושיים כדי לחקור מסלולים פתוגניים ברמה מולקולרית, אבל דורשים קוונפיקציה סטנדרטית של פיתוח נגעים. פרוטוקול זה מתאר שיטה ממוטבת כדי לקבוע את גודל הנגעים בכלי העורקים העיקריים, כולל שורש אבי העורקים, קשת אבי העורקים, ועורק ברככתית.

קוונפיקציה של טרשת עורקים בעכברים

מאמר זה מדגים גישה כירורגית יעילה ליצירת איסכמיה חריפה בעכברים עם חתך קטן. גישה זו יכולה להיות מיושמת על ידי רוב קבוצות המחקר ללא כל שדרוגי מעבדה.

מודל כירורגי מותאם של איסכמיה בגפיים אחוריות ב- ApoE-/- עכברים באמצעות חתך מיניאטורי

כאן אנו מציגים מודל עכברי לאנסטומוזיס של עורק הירך, המציע לחוקרים מודל בעל ערך לבעלי חיים לחקר והדמיה של היצרות אנסטומוטית של כלי הדם. התפתחות זו חיונית לקידום הבנתנו את הפתופיזיולוגיה העומדת בבסיס מצב זה ולהקלה על מחקר מדויק ויעיל יותר במחלות כלי דם.

פיתוח מודל עכברי להיצרות אנסטומטית בעורק הירך

השרוול הצרת המוצגים במאמר זה נועד לגרום לטרשת עורקים בעורק התרדמה Murine משותף. בשל בצורת חרוט של לומן הפנימי שלה את האזיק מושתל יוצרת אזורים מוגדרים היטב של מתח נמוך, גזירה גבוהה oscillatory מפעילה את התפתחות טרשת עורקים של פנוטיפים דלקתיות שונות.

השרשה של קאף הראש מפעילה שאר מתח טרשת עורקים המושרה עכברים

למד שני מודלים חוקיים לגרימת היפרפלזיה מיאו-אינטימלית וטרשת עורקים בעכברים. השיטות כוללות קטטריזציה בלון ומניפולציה תזונתית בעכברי APOE null, המאפשרות חקר מנגנוני הצרת עורקים שונים.

גרימת Myointimal היפרפלזיה נגד טרשת עורקים בעכברים: מבוא של שני מודלים חוקיים

גלה סרטונים נוספים