Name: מדידה של קצב חילוף החומרים ב דרוזופילה באמצעות Respirometry (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 31 s
Description: למדו כיצד למדוד קצב חילוף חומרים ב-Drosophila melanogaster באמצעות רספירומטריה פשוטה. השיטה מאפשרת השוואה מדויקת של ייצור פחמן דו-חמצני בין קבוצות ניסוי ובקרה לזיהוי גורמים גנטיים המשפיעים על מטבוליזם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

ברצוננו להודות לאגודת מקס פלנק למימון המחקר שלנו.

<html> 1. הכנת Respirometers <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את קצה פיפטה 1,000 μl בסכין גילוח כדי לאפשר החדרה של micropipette נימי 50 μl, לנסות להשיג את קצה פיפטה ישרה ככל האפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים פיסת הקצף לתוך פיפטה ולדחוף אותו בקצה פיפטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף כמות קטנה של CO 2 סופגים ולהכיל אותו על ידי פיסת הקצף שנייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל דבק במקום שבו micropipette מוכנס לתוך קצה פיפטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר את respirometer לילה כדי לאפשר לדבק להתייבש. סכמטי של respirometer מוצג באיור 1 א. </li></ol> 2. הכנה של לשכת המדידה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את פתרון התא על ידי ערבוב מים עם eosin ביחס שיגרום לצביעה נראית לעין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים את פתרון eosin / מים לתוך התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייבל אחד הצדדים של החדר עם סולם סנטימטר. </li></ol>= &quot;Jove_title&quot;&gt; ילדה 3. הצבת זבובים לRespirometers <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תווית respirometers הבודד עם סמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי זבובים באמצעות שיטה חלופית ל-CO 2 ומקום 3-5 זבובים של הגנוטיפ הרצוי בתוך כל respirometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאטום respirometers בחוזקה בראש באמצעות שפכטל פלסטלינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר זבובים להתאושש מהרדמה כ 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן respirometer אחד בלי זבובים, אשר ישמש כשליטה באטמוספרה. </li></ol> 4. ביצוע הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתלות את respirometers בתא על ידי הצמדת בעל צינור Eppendorf 1.5 מיליליטר כי הוא פתוח בחלק העליון והחלק התחתון בחלק העליון של החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס respirometers עם קצה micropipette למטה לתוך התא המאפשר את הקצה לצלול לתוך התמיסה בצבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת זלין בין כיסוי המכסה והקאמרי כדי לספק בידוד חזק יותר מfluct הטמפרטורה והלחץuations. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את המכסה ולאפשר למערכת כדי לאזן במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את תמונה של החדר ולוודא כי רמת הנוזל בתוך כל micropipette גלויה וכך גם בקנה מידה (ראה דוגמא שמוצגת באיור 1 ב &#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 1-2 hr, לצלם תמונה נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הניסוי נגמר, להסיר את הזבובים מrespirometers ולשקול אם תרצה בכך או להעביר אותם בחזרה לבקבוקון במידת צורך נוסף. </li></ol> 5. ניתוח התוצאות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתוח רכש תמונות באמצעות תוכנת ImageJ 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוך שימוש בסולם בכל תמונה, להגדיר את קנה המידה פיקסל בתוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את המרחק (Δd) כי הנוזל נסע מנקודת התייחסות נחושה בתמונות שצולמו בתחילת (ד 1) וסופו של הניסוי (D2). דוגמא סכמטית מוצגת באיור 1 ג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את כמות מיוצר CO 2 (μl / שעה / זבוב) עם הנוסחה: </li></ol><img alt="איור 1" fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51681/51681eq1.jpg" /> R = רדיוס של צינור micropipette בסנטימטרים Δd = מרחק הנוזל עבר בmicropipette של דגימות בדיקה נמדד בסנטימטרים Δc = מרחק הנוזל עבר בmicropipette של מדגם הביקורת השלילית (בלי זבובים) n = מספר הזבובים המשמשים = H שעות

<ol><li>Van Voorhies, W. A., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+the+%26%2334%3Brate+of+living%26%2334%3B+model%3A+further+evidence+that+longevity+and+metabolic+rate+are+not+inversely+correlated+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Testing the &#34;rate of living&#34; model: further evidence that longevity and metabolic rate are not inversely correlated in Drosophila melanogaster.</a> J Appl Physiol. 97, 1915-1922 (2004).</li>
<li>Ross, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-specific+decrease+in+aerobic+efficiency+associated+with+increase+in+oxygen+free+radical+production+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Age-specific decrease in aerobic efficiency associated with increase in oxygen free radical production in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 46, 1477-1480 (2000).</li>
<li>van Voorhies, W. A., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selected+contribution%3A+long-lived+Drosophila+melanogaster.+lines+exhibit+normal+metabolic+rates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Selected contribution: long-lived Drosophila melanogaster. lines exhibit normal metabolic rates.</a> J Appl Physiol. 95, 2605-2613 (2003).</li>
<li>Hulbert, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+rate+is+not+reduced+by+dietary-restriction+or+by+lowered+insulin%2FIGF-1+signalling+and+is+not+correlated+with+individual+lifespan+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Metabolic rate is not reduced by dietary-restriction or by lowered insulin/IGF-1 signalling and is not correlated with individual lifespan in Drosophila melanogaster.</a> Experimental Gerontology. 39, 1137-1143 (2004).</li>
<li>Ueno, T., Tomita, J., Kume, S., Kume, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+modulates+metabolic+rate+and+temperature+sensitivity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Dopamine modulates metabolic rate and temperature sensitivity in Drosophila melanogaster.</a> PLoS ONE. 7, (2012).</li>
<li>Takeuchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+temperature+preferences+and+energy+homeostasis+in+dystroglycan+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Changes in temperature preferences and energy homeostasis in dystroglycan mutants.</a> Science. 323, 1740-1743 (2009).</li>
<li>Kucherenko, M. M., Marrone, A. K., Rishko, V. M., Magliarelli Hde, F., Shcherbata, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+and+muscular+dystrophy%3A+a+genetic+screen+for+dystroglycan+and+dystrophin+interactors+in+Drosophila.+identifies+cellular+stress+response+components%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Stress and muscular dystrophy: a genetic screen for dystroglycan and dystrophin interactors in Drosophila. identifies cellular stress response components.</a> Developmental Biology. 352, 228-242 (2011).</li>
<li>Marrone, A. K., Kucherenko, M. M., Wiek, R., Gopfert, M. C., Shcherbata, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperthermic+seizures+and+aberrant+cellular+homeostasis+in+Drosophila+dystrophic.+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Hyperthermic seizures and aberrant cellular homeostasis in Drosophila dystrophic. muscles.</a> Scientific Reports. 1, 47 (2011).</li>
<li>Khazaeli, A. A., Van Voorhies, W., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longevity+and+metabolism+in+Drosophila+melanogaster%3A+genetic+correlations+between+life+span+and+age-specific+metabolic+rate+in+populations+artificially+selected+for+long+life%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Longevity and metabolism in Drosophila melanogaster: genetic correlations between life span and age-specific metabolic rate in populations artificially selected for long life.</a> Genetics. 169, 231-242 (2005).</li>
<li>Elia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Energy+equivalents+of+CO2+and+their+importance+in+assessing+energy+expenditure+when+using+tracer+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Energy equivalents of CO2 and their importance in assessing energy expenditure when using tracer techniques.</a> The American Journal of Physiology. 260, (1991).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9, 676-682 (2012).</li>
<li>Bharucha, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epicurean+fly%3A+using+Drosophila+melanogaster.+to+study+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">The epicurean fly: using Drosophila melanogaster. to study metabolism.</a> Pediatric Research. 65, 132-137 (2009).</li>
<li>Rajan, A., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+flies+and+men%3A+insights+on+organismal+metabolism+from+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biology%22%5BJournal%5D)">Of flies and men: insights on organismal metabolism from fruit flies.</a> BMC Biology. 11, 38 (2013).</li>
</ol>

יש לנו מה למסור.

בפרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה זולה ואמינה למדידת 2 ייצור CO בזבובים. מצאנו כי ניסוי זה הוא קל, מהיר לביצוע ומייצר נתונים לשחזור כי הוא בהסכם עם מחקרים אחרים 1, 6, 9. הפרוטוקול המתואר כאן ניתן לשנות בקלות כדי להתאים את חומרי התקציב וזמין של כל מעבדה. הבנייה של כל respirometer הבודד ניתן להתאים כל עוד התא נשאר אטום. עם זאת, ארוך יותר, דק יותר micropipettes מציע יותר דיוק מעל קצר יותר. השימוש בתא החיצוני יכול להיות אופציונלי כל עוד אין שינויי טמפרטורה ולחץ סביבה...

המחזור של Kreb יוכימיים מייצר ATP באמצעות החמצון של אצטט נגזרים מפחמימות, שומנים, חלבונים וייצור CO 2. בדרוזופילה, O 2 קלט בקורלציה ישירה עם CO 2 פלט ומשקף את רמת חילוף החומרים 1. לכן, מדידה של CO פלט 2 בהצלחה נעשתה שימוש במחקרים הקשורים להזדקנות ואת חילוף חומרים של 2-5. הנה המעבדה שלנו שינתה הגדרות ניסיוניות תוכננו בעבר, המאפשרת מדידה של 2 CO בייצור עד שמונה עשר דגימות ללא צורך בציוד מיוחד. אחרים ויש לנו השתמשנו בעבר בשיטה זו כדי להראות הבדלים בקצב חילוף חומרים בזבובים שחסרים בחלבון ניוון השרירים קשור, Dystroglycan (DG) 6-8. O 2 המשמשים לחילוף חומרי חמצוני מומר CO 2, אשר גורש כפסולת בדרכי הנשימה. Construction של respirometers יד מתואר המאפשר לקביעת שיעור O 2 נצרכים. זבובים ממוקמים במכל אטום בחומר שסופג גורש CO 2, ביעילות לחסל אותו ממצב צבירת הגזים. השינוי בנפח גז (לחץ ירד) נמדד על ידי העקירה של נוזל בנימי זכוכית מחוברת לrespirometer הסגור. היתרון העיקרי של שיטה זו על פני אחרים הוא העלות. מחקרים קודמים נמדדו CO 2 על ידי ייצור דרוזופילה באמצעות גז מנתחי מערכות וrespirometry טכני מתקדמות 1,9. למרות הציוד המורכב יותר, הרגישות של השיטה המתוארת כאן היא דומה לערכים מדווחים (טבלה 1). בנוסף, מספר קבוצות אחרות השתמשו וריאציות של טכניקה זו על מנת לקבוע את קצב חילוף חומרים יחסית בדרוזופילה 4-6. לכן, assay זה יכול לשמש כדי ליצור reliable, נתונים לשחזור רלוונטיים לחילוף חומרי דרוזופילה ללא רכישת ציוד מיוחד אשר יכולה להיות התקנה בכל מעבדה וניתן להשתמש בם למטרות חינוכיות. באופן כללי, הטכניקות המקובלות לקבוע את חילוף החומרים של אורגניזם היא למדוד את ה-CO 2 המיוצרים, O 2 צרכו, או שניהם 3,4,9. אמנם, ניתן להניח כי שווה ערך אחד O 2 מייצר שווה ערך אחד של CO 2, היחס המדויק של CO 2 שנוצר תלוי במצע חילוף החומרים מנוצלים 10. לפיכך, על מנת לקבוע את קצב חילוף חומרים ביחידות אנרגיה בצורה מדויקת יש צורך למדוד גם O 2 ו-CO 2 צרך הפיק. בשל כך, בשיטה המתוארת כאן היא דווקא רלוונטית להשוואת הבדלים בCO 2 ייצור בין בעלי חיים ולא הערך המוחלט. הטכניקה שלנו משלבת ייצור CO 2 של בעלי חיים רבים על פני תקופה של timדואר (1-2 שעות) ולכן חוזרת ממוצעת של פעילותם של בעלי החיים. אם יש סיבה להאמין שחיות ניסוי הן פחות פעילה מאשר חיות בקרת המדידה יכולה לשקף את הרמות שונות של פעילות ולא בהכרח חילוף חומרים.

<table><tbody><tr><td>BlauBrand IntraMark 50 ומיקרו; l מיקרופיפטות</td><td>VWR</td><td>612-1413</td><td></td></tr><tr><td>סודה ליים</td><td>וואקו</td><td>CDN6847</td><td></td></tr><tr><td>Eosine&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>031M4359</td><td>ניתן להשתמש בכל צבע שיכול ליצור צבעוניות גלויה של נוזל</td></tr> תא <tr><td>פיתוח שכבה דקה Chromatorgaphy (TLC) VWR</td><td></td><td>21432-761</td><td>כל תא זכוכית שקוף שניתן לסגור עם המכסה</td></tr><tr><td>חומר הרדמה, ערכת Lull-A-Fly Flinn</td><td></td><td>FB1438</td><td></td></tr><tr><td>Power Gel Glue</td><td>Pritt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל קצות פיפט</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קצף</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>שפכטל פלסטיצ'ין</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אזמל</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

מדידה של קצב חילוף החומרים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; באמצעות respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

הפרעות מטבוליות הן בעיה שכיחה המשפיעה על בריאות אדם. לכן, הבנת המנגנונים המווסתים את חילוף חומרים היא משימה מדעית חשובה. יש גנים מחלה גורמת רבים בבני האדם homologue לטוס, מה שהופך את דרוזופילה מודל טוב ללמוד מסלולי איתות מעורבים בהתפתחות של הפרעות שונות. בנוסף, העקיבות של דרוזופילה מפשטת מסכי גנטיים כדי לסייע בזיהוי מטרות טיפוליות חדשניות שעשויים לווסת את חילוף החומרים. על מנת לבצע מסך כזה שיטה פשוטה ומהירה לזיהוי שינויים במצב מטבולים של זבובים היא הכרחית. באופן כללי, ייצור פחמן דו חמצני הוא אינדיקטור טוב של הוצאה חמצון המצע והאנרגיה מתן מידע על מצב מטבולים. בפרוטוקול זה אנו מציגים שיטה פשוטה למדידת CO 2 פלט מזבובים. טכניקה זו יכולה באופן פוטנציאלי לסייע בזיהוי של הפרעות גנטיות המשפיעות על קצב חילוף חומרים.

על מנת להראות כי השיטה היא רגישה מדדנו CO 2 ייצור מסוג בר (אורגון R) זכר עף ב18, 25, ו29 מעלות צלזיוס וזבובים שעברו מוטציה לDG. זבובים הועלו ב ° C25 ולאחר מכן עברו לטמפרטורה הניסיונית במשך 5 ימים לפני המדידה. כצפוי למיני ectothermic זה, כמות ה-CO 2 המיוצרת גדל עם טמפרטורה (איור 2). בעבר הראינו כי דיאטה ללא סוכר מפחיתה את קצב חילוף החומרים של שניהם סוג בר המוטציה Dg עפה 7. אובדן Dg מוביל לרמות חיל...

הפרעות מטבוליות הן בין אחת המחלות הנפוצות ביותר בבני אדם. אורגניזם המודל גנטי הצייתן ד melanogaster יכול לשמש כדי לזהות גנים רומן שמווסתים את חילוף חומרים. מאמר זה מתאר שיטה פשוטה יחסית המאפשרת ללמוד את קצב חילוף חומרים בזבובים על ידי מדידת ייצור CO 2 שלהם.

מדידה של קצב חילוף החומרים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; באמצעות Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

מטרתו של הליך זה היא לקבוע את שיעורי חילוף החומרים היחסיים של זבובים על ידי מדידת ייצור הפחמן הדו-חמצני שלהם. הדבר משיג תחילה על ידי הנחת הזבובים בתוך ברומטרי נשימה שהוכנו באופן מיוחד. לאחר מכן, מוכנסים ברומטרי הנשימה המכילים את הזבובים לתוך תא כרומטוגרפיה, תוך יצירת מגע עם תמיסה מימית צבעונית.עם הזמן, הנוזל נחלחל אל תוך הרספירומטר עקב ירידה בלחץ שנגרמה מהסרת פחמן דו-חמצני שנפלט מסביבת הגז לפני ואחרי. תמונות של הניסוי משמשות לחישוב כמות הפחמן הדו-חמצני שהופק, בהתבסס על ממדיו של הנייר של הנייר של קפילרת הרספירומטר. בסופו של דבר, הנתונים שיתקבלו במדידה זו יאפשרו השוואה של שיעורי חילוף החומרים היחסיים בין זבובים ניסוייים לזבובים של קבוצת הביקורת.ראשית, חתכו קצה של פ pipette של 1000 microliter בעזרת להב תער באופן ישר ככל האפשר, והכניסו את המיקרו-pipette לתוך קצה ה-pipette של 1000 microliter. לאחר מכן, הניחו חתיכת ספוג בתוך ה-pipette ודחפו אותה למטה. לאחר מכן הוסיפו כמות קטנה של soda lime ואבטחו אותה בעזרת חתיכת ספוג שנייה.מרחו דבק במקום בו המיקרו-פיפטה מוכנסת לקצה הפיפטה והניחו לדבק להתייבש במהלך הלילה. הכינו את תמיסת התא על ידי ערבוב מים עם eosin ביחס של אחת לחמש, מה שיגרום לצביעה נראית לעין. לאחר מכן, מזגו את תמיסת ה-ees והמים לתוך התא.לאחר מכן, סמנו את הצד האנכי של התא באמצעות סרגל

measurement-of-metabolic-rate-in-drosophila-using-respirometry

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מאמר זה מתאר שיטה למדידת חמצון דלק ב-Drosophila melanogaster שבה כמויות זעירות של מצעים מטבוליים ספציפיים המסומנים ברדיו מוזנות לזבובים. ה-CO2 הנשוף המסומן ברדיו שהוא מיוצר מחמצון דלק נאסף ונמדד.

מדידת ייצור פחמן דו-חמצני מן radiolabeled מצעים ב<em&gt; תסיסנית</em

בנייר זה, מתוארת שיטה למדידת צריכת החמצן באמצעות respirometry ברזולוציה גבוהה ב- thoraxes permeabilized של דרוזופילה. טכניקה זו דורשת כמות מזערית של רקמות לעומת הטכניקה בידוד מיטוכונדריאלי קלאסי, התוצאות המתקבלות רלוונטיים יותר מבחינה פיזיולוגית.

מדידה של צריכת חמצן מיטוכונדריאלי של סיבי Permeabilized דרוזופילה באמצעות כמויות מינימליות של רקמות

אנו מציגים פרוטוקול למדידת צריכת החמצן ואת acidification חוץ-תאית במוח זחל ומבוגרים melanogaster דרוזופילה . מנתח חילוף החומרים מנוצל עם פרוטוקול מותאם וממוטב. מיקרו-רקמת ריסון הינם המכריעים של פרוטוקול זה, היו עיצבת ויצרת במיוחד לשימוש שלהם ניתוח זה.

ניתוח מטבולית של melanogaster דרוזופילה Larval ושכל למבוגרים

ספירומטריה קולומטרית אידיאלית למדידת קצב חילוף החומרים של אורגניזמים קטנים. כאשר הותאם עבור Drosophila melanogaster במחקר הנוכחי, צריכת O2 שנמדדה הייתה בטווח שדווח עבור סוג בר D. melanogaster על ידי מחקרים קודמים. צריכת O2 לכל זבוב על ידי מוטנטים של ASK שהם קטנים יותר ופעילים פחות, הייתה נמוכה משמעותית מזו של ה-wildtype .

מדידת צריכת O2 בדרוזופילה מלנוגסטר באמצעות מיקרו-רספירומטריה קולומטרית

כאן אנו מציגים פרוטוקול רספירומטריה ברזולוציה גבוהה לניתוח ביו-אנרגטיקה בזבובי פירות מוטנטיים מסוג PINK1B9-null. השיטה משתמשת בפרוטוקול Substrate-Uncoupler-Inhibitor-Titration (SUIT).

ניתוח תפקוד מיטוכונדריאלי במוטנט Drosophila melanogaster PINK1B9-Null באמצעות רספירומטריה ברזולוציה גבוהה

במאמר זה וידאו, אנו מתארים שיטה חדשה המאפשרת בנייה של הדרגתיים odorant בגיאומטריות ויציב לשליטה. אנו בקצרה להמחיש כיצד הדרגתיים אלה יכולים לשמש מסך פגמים חוש הריח (תתרנות מלאה או חלקית) ו ללמוד תכונות מהותיות יותר של התנהגות chemotaxis.

ברזולוציה גבוהה מדידה של התנהגות ריח מונחה על הזחלים תסיסנית

דרוזופילה melanogaster הוא אורגניזם מודל רב עצמה לחקר הבסיס המולקולרי של ויסות אריכות ימים. פרוטוקול זה יעסוק השלבים הכרוכים ביצירת מדידה לשחזור, המבוסס על אוכלוסייה של אריכות ימים, כמו גם בעיות פוטנציאליות וכיצד להימנע מהם.

מדידה של תוחלת חיים ב<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

מדידה של קצב סינון גלומרולרי (GFR) היא תקן הזהב להערכת תפקוד כליות. כאן אנו מתארים שיטת תפוקה גבוהה המאפשרת קביעת GFR בעכברים מודעים באמצעות זריקה אחת בולוס, קביעת isothiocyanate ההעמסה (FITC)-אינולין בפלזמה וחישוב GFR ידי מודל דעיכה מעריכית שני שלבים.

שיטת תפוקה גבוהה למדידה של קצב סינון הגלומרולרי בעכברים בהכרה

כאן אנו מתארים שיטה למדידה מהירה ומדויקת של ביצועי טיסה בדרוזופילה, המאפשרים תפוקה גבוהה הקרנה.

שיטה משופרת למדידה מדויקת והמהירה של טיסה בביצועים<em&gt; דרוזופילה</em

דוח זה מתאר שיטה למדידת פעילות הזחלים של דרוזופילה באמצעות מוניטור פעילות הדרוזופילה TriKinetics. המכשיר משתמש בקרני אינפרא אדום כדי לזהות תנועות של עד 16 בעלי חיים בודדים. ניתן לנתח נתונים כדי לייצג פרמטרי תנועה כולל קצבים ומיקומי בעלי החיים בתוך תאי הבדיקה.

מדידה של הזחל פעילות ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; צג פעילות

למדו כיצד למדוד קצב חילוף חומרים ב-Drosophila melanogaster באמצעות רספירומטריה פשוטה. השיטה מאפשרת השוואה מדויקת של ייצור פחמן דו-חמצני בין קבוצות ניסוי ובקרה לזיהוי גורמים גנטיים המשפיעים על מטבוליזם.

מדידה של קצב חילוף החומרים ב

גלה סרטונים נוספים