Name: אפנון סביבתי של מספר המוח התיכון דופמין נוירונים בעכברים בוגרים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: למד כיצד אפנון סביבתי משפיע על מספר נוירונים דופמינרגיים במוח התיכון בעכברים בוגרים. שיטה זו מאפשרת חקר פלסטיות מוחית ושינויים התנהגותיים תחת תנאי מגורים מבוקרים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענק פרויקט המועצה הלאומית לבריאות ומחקר רפואי של אוסטרליה (NHMRC) 1022839. AJH הוא עמית עתיד של מועצת המחקר האוסטרלית (ARC) FT3 (FT100100835). מכון פלורי למדעי המוח ובריאות הנפש מכיר בתמיכה ממענק התמיכה בתשתיות תפעוליות של ממשלת ויקטוריה.

הערה: כל הליכי הניסוי על בעלי חיים אושרו על ידי מכון Florey של ועדת בריאות בעלי החיים Neuroscience ונפש אתיקה ולהתאים לבריאות הלאומית של אוסטרליה ומועצה למחקר רפואי שפורסמה קוד של תרגול לטיפול ולשימוש בבעלי חיים למטרות מדעיות (7 מהדורה ה, 2004). 1. מניפולציות סביבתיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיוך מגדרי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ב(&gt; 8 שבוע ישן), גבר באותו גיל בגרות מיני ונקבות עכברים. הערה: אנו משתמשים בדרך כלל עכברי C57BL / 6, אבל יש לי אותו התוצאות באמצעות עכברים שוויצריים בפרוטוקול זה. אנחנו בדרך כלל להשתמש n = 8 זכרים וn = 8 נקבות לכל ניסוי, מחולק ל= 2 זוגות של גברים וגבריים n (n = 4 זכרים), n = 2 זוגות נקבה-נקבה (n = 4 נשים), וn = 4 זוגות של גברים ונשים (n = 4 זכרים ונקבות n = 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם ההגעה למתקן החזקת בעלי חיים, הקבוצה-בית העכברים לפי מגדר ל&gt; 3 ימים להתאקלם. פה וthrougHout הזיווג בין המינים, לשמור על גירויים סביבתיים חיצוניים (טמפרטורת סביבה לדוגמא, אור: מחזור כהה, מזון, מים, טיפול וניקוי) קבועה או להפיץ באופן שווה לכל העכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן אקראי להקצות לכל עכבר לזוג גברי-גברי, זוג נקבה-נקבה, או זוג של זכר ונקבה. מניחים כל זוג לכלוב נקי בבידוד (2 עכברים / כלוב) גישה כרצונך מודעת מזון ומים עם, ופשוט לשכן אותם בדרך זו ברציפות במשך 7 ימים. הערה: בעלי חיים שגרתיים בסדר בתקופה זו, אך חייב להיות מופץ באופן שווה לכל העכברים. תשמור על עצמך כדי להימנע מזיווג של המלטת זכר ונקבה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העשרה סביבתית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ב(&gt; 8 שבוע ישן) עכברי זכר או נקבה מגיעה לבגרות מינית, באותו גיל. הערה: אנו משתמשים בדרך כלל n = 18 עכברים לכל ניסוי, מחולקים לקבוצת n = 6 / טיפול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם ההגעה למתקן החזקת בעלי החיים לשמור אותם שוכנו בתקן זהה-שוכנו קבוצה (SH) (לדוגמא: </em&gt; ראה בהמשך) תנאים בשלב זה ל&gt; 3 ימים להתאקלם. כאן ובכל רחבי הניסוי, לשמור על גירויים סביבתיים חיצוניים (טמפרטורת סביבה לדוגמא, אור: מחזור כהה, מזון, מים, טיפול וניקוי) קבועה או להפיץ באופן שווה לכל העכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל העשרה סביבתית, באופן אקראי להקצות לכל עכבר לאחת מהקבוצות 3: SH; גלגל ריצה (RW), או בסביבה מועשרת (EE) ולמקם את כל קבוצה של עכברים לכלוב נקי זהה גישה כרצונך מודעת מזון ומים עם יחד. הערה: הנה, כלובים גדולים מחזיק חולדה לכל הקבוצות, מדידת 27 סנטימטרים רוחב, 42 סנטימטרים ארוכים, ו -16 סנטימטרים העומק הייתה בשימוש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנוסף, מספק התנאים הבאים סביבתיים לכל קבוצה: SH הכולל המלטה בלבד (כדורי נייר או נסורת) על הרצפה; גלגלי SH הכולל RW בתוספת 2 ריצה; EE הכולל RW בתוספת צעצועים (חבלים, סולמות, מנהרות, ואובייקטים כגון לחמניות מגבת נייר ריקות וחתיכות של נייר טישו) שבה לשעבר<html> plore, לשחק, לטפס, להסתיר, וקן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשכן אותם בדרך זו ברציפות במשך 14 ימים. הערה: בעלי חיים שגרתיים בסדר בתקופה זו, אך חייב להיות מופץ באופן שווה לכל העכברים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברי נושא EE ל&#39;סופר-העשרה &#39;נוספת (SE) על ידי הצבת אותם יחד לכלוב גדול יותר המכיל צעצועים חדשניים ל1hour, 5days / שבוע / יום (אותה שעה בכל יום). הערה: הנה, אמבטיה פלסטיק 46 סנטימטרים רוחב, 69 סנטימטרים ארוכים, ו -40 סנטימטרים עומק הייתה בשימוש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על חידוש על ידי הצגת קבוצה שונה של צעצועים בכל מפגש. צעצועים נקיים שיש מחדש הציגו לעכברים עם מים וסבון ו- 80% אתנול להסיר ריחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות כל פגישת SE, להחזיר את העכברים לכלוב EE. SH ידית והעכברים RW זהה עכברי SE (פרט לSE עצמו) בתקופה זו (למשל להסיר ולהחזיר כל SH ועכבר RW ולכלוב שלה). </li></ol></li></ol></li></ol>התחת = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. אוסמוטי משאבה ומוח עירוי צינורית שתלים לעירוי תרופות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במשאבות סטרילי האוסמוטי וערכות עירוי מוח, אשר זמינות באופן מסחרי. היום לפני ההשתלה, באמצעות טכניקת aseptic, ראש השתלים ידי מילוי כל משאבה, חיבור צינור וצינורית עם פתרון סמים או כלי רכב סטרילי (כפי שמתואר בהוראות המצורפות למשאבות). לחבר אותם יחד ודגירה בתמיסת מלח סטרילית לילה בשעה 37 ° C. דגירה שתלי סמים ומלא כלי רכב בנפרד, כדי למנוע זיהום צולב. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח. הערה: בהתאם למדינה של הנסיין, היתרי ניסויים בבעלי חיים מיוחדים או קצבאות נדרשות להמשיך סוגים כאלה של ניתוח וניסויים שלאחר ניתוח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את כל הציוד כירורגי ולהעסיק טכניקת ספטית לאורך כל דרך. הרדימי עכבר (למשל באמצעות isofluorane 1-2% באוויר) ולמקם אותו בstereheadframe otaxic. בדוק את עומק ההרדמה לאורך כל ההליך ולנהל הרדמה נוספת במידת צורך (למשל העדר נסיגת איבר לקמצוץ כפה רעיל מעיד על הרדמה נאותה). מוגנות להבטיח את העיניים מהתייבשות על ידי משחה עין חומר סיכה, ושטמפרטורת הגוף של העכבר נשארה נורמלית לאורך כל ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קו האמצע דרך העור החל מבין העיניים וגימור 2 סנטימטר אחורי עד לקצה האחורי של הגולגולת. בוטה לנתח את העור מfascia הבסיסי במורד הגב של העכבר כדי ליצור &quot;כיס&quot; גדול מספיק כדי להתאים את המשאבה וצינור חיבור פעם הצינורית מושתלת (צינור החיבור לא צריך להיות כפוף עם השלמה) בנוחות תת-עורי. לגרד לנקות את fascia מרחבי היבט הגב של הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בר שיניים קוטר כ 1.5 מ&quot;מ, לתחקר מטה לתוך הגולגולת בstereotaxic המתאים מרכז until שכבה דקה וגמישה של עצמות שרידים. פיל שכבה זו משם באמצעות מלקחיים עדינים (זה ימנע נזק למאטר בסיס הדורה ומוח עם בר השיניים). להבטיח את הגולגולת הוא ניקה מכל שברי העצם ודם, וכי אין דימום נוסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם הצינורית שנערכה על ידי בעל צינורית, למקם את המשאבה וצינור חיבור ל&#39;הכיס &#39;תת-עורי מעל גבו של העכבר. בשלב הבא, עמדת הקצה של הצינורית בקואורדינטות stereotaxic המתאימות ועל פני השטח של המוח. בזהירות להוריד את הצינורית לתוך המוח אבל להפסיק כ 1 מ&quot;מ קצר של העומק הנדרש. הערה: העומק שנותר יהיה משא ומתן הבא של יישום השכבה הראשונה של אקריליק שיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שוב את פני השטח של הגולגולת הוא נקי ויבש, ואז להכין נפח קטן של אקריליק שיניים ולהשתמש בקיסם כדי להחליק אותו על האזור כולו החשוף של גולגולת, ובכלל זה לבר-החור דרך הגולגולת סביב הצינורית דואר. לפני אקריליק מתקשה, להוריד את הצינורית להטות את העומק שנותר ליעד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן עוד נפח קטן של אקריליק שיניים ושכבה זו מעל הראשון, כמו גם על תמיכת הפלסטיק הלבנה לצינורית, כדי לתקן את הצינורית במקום. חזור עם שכבות נוספות של אקריליק על פי צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע אקריליק יש קשוח, להסיר בזהירות את בעל צינורית ומנותק הכרטיסייה הלבנה הפלסטיק נשלפת צינורית באמצעות סכין אזמל מחומם עם להבה בוטאן. לבסוף, תפר את העור נסגר מעל כל השתל. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טיפול לאחר ניתוח של בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה אנטיספטית לשוליים העור, ולנהל אנטי דלקתי לעכבר (למשל Meloxicam, 3 מ&quot;ג / קילוגרם sc). הסר את העכבר מהמסגרת, למקם אותו מתחת לפנס חום, ולהתבונן עד שהוא חוזר להכרה. אל תחזור עכבר שעבר ניתוח לחברה של בעלי חיים אחרים, עד שהתאושש לחלוטין. הערה: Expיכולות להיות יזם מניפולציות erimental כגון זיווג בין המינים והעשרת סביבה או חידשו היום לאחר ניתוח בבית המוקדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על משקל גופם, התנהגות כללית ומראה יומיומי. פנק את סימני הזיהום (למשל נפיחות, אדמומיות, מוגלה) סביב חתכים ניתוחיים במשחה אנטיספטית אקטואלית. לטפל בכל מחלה סימנים, כאב, מתח או אי נוחות (למשל אובדן&gt; 10% ממשקל גוף, הנסיגה חברתית, חוסר הטיפוח, &quot;מתפיח&quot;, תפקוד לקוי של תנועה, פרכוסים) עם משככי כאבים ו / או אנטיביוטיקה מערכתיים בהתאם לצורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים אם&gt; 15% ירידה במשקל או תסמינים של מחלה, כאב, מתח או אי נוחות הן לא-ההשבה בתוך השבוע של טיפול מתקנת 1. </li></ol></li></ol> רקמות הכנת 3. מוח, אימונוהיסטוכימיים עיבוד, וstereology <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זלוף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לאחר מניפולציות / סמים סביבתיים, להכין את המוח למחקר. <br/&gt; הערה: בניסויים שדווחו כאן מספר TH SNC + נוירונים נמדד והושווה בכל אחת מקבוצות הטיפול השונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית לנהל מנת יתר של חומר הרדמה כדי להרוג את העכברים (למשל 100 מ&quot;ג / קילוגרם ip נתרן pentobarbitone). ברגע שהרדים אבל לפני הלב מפסיק לפעום, להניח את העכבר על גבה ולקשור או להצמיד את שני forelimbs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל לחתוך את העור שמעל בית החזה ואז לחתוך דרך השריר, ממש מתחת לכלוב הצלעות לתוך חלל הבטן. הנח מהדק על תהליך xiphoid של בית החזה ולהרים את החזה למעלה מן הכבד חושף את הסרעפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך דרך הסרעפת ודרך הצלעות רוחבית בשני הצדדים באמצעות מספריים גדולים עד בית החזה יכול להיות מקופל לאחור על הראש כדי לחשוף את הריאות ולב. בעזרת מספריים בסדר לעשות חתך קטן בעלייה הימנית כנקודת יציאה לדם ופתרונות perfused, ואז לחתוך דרך הבסיס של ventri השמאלCLE ולמקם את צינורית דרך החדר השמאלי, אטריום השמאל, ולתוך אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצמד את הצינורית במקום ולאחר מכן לשאוב (37 ° C) החם heparinized ו -0.1 מלוח M פוספט שנאגרו פיסיולוגי (PBS) דרך כלי הדם עד פתרון יציאת העלייה הימנית הוא חופשי לחלוטין של דם. בשלב הבא, לשאוב (4 ° C) פתרון מקבע קר (paraformaldehyde כגון 4% בPBS) דרך כלי הדם, עד שכל העכבר הוא קבוע גם. הסר את המוח ואת המקום בPBS עם סוכרוז 30% במשך 2-3 ימים עד כיורים המוח. הערה: סוגים אחרים של הכנת רקמה עשויים להיות מיושמים בהתאם למומחיות במעבדה המקבילה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת cryosections צפה חינם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך קטעי סדרתי דרך אזורי המוח של עניין ולאסוף אלה בPBS. הערה: אנחנו חותכים 40 מיקרומטר חלקים עבים באמצעות cryostat. סוגים אחרים של חתך ברקמה עשויים להיות מיושמים בהתאם למומחיות בcorrespondiהמעבדה ng. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אימונוהיסטוכימיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע אימונוהיסטוכימיה סטנדרטית לחלבונים של עניין. דגירה סעיפים 5% בסרום נורמלי עז ושל 0.3% X-100 טריטון בPBS בטמפרטורת חדר למשך 30 דקות, ולאחר מכן immunoreact עם אנטי-TH ארנב polyclonal (1: 400) בשעה 4 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות, אנטי biotinylated אז polyclonal עז -rabbit (1: 1000) בטמפרטורת חדר למשך שעה 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, דגירה בavidin-peroxidase (1: 500) בטמפרטורת חדר למשך 1 שעות, ולאחר מכן בcobalt- וdiamino-benzidine-התעצם ניקל (0.5 מ&quot;ג / מיליליטר) בטמפרטורת חדר למשך 18-20 דקות; ל3-5 דקות האחרונות של הדגירה diamino-benzidine להוסיף מי חמצן (0.01%) כדי לזרז ממטרים כרומגן. לשטוף חלקים שלוש פעמים לכל 10min בPBS לפני, אחרי, ובין כל אחד מהשלבים לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר הסעיפים בשקופיות מיקרוסקופ gelatinized, אוויר היבש אותם, אז כתם Nissl (אדום ניטראלי), ליבש באלכוהול, (X-3B) ברור, וcoverslip. </li></ol></li><li&gt; stereology <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את המספר הכולל של TH + וTH- SNC (וVTA וLC) נוירונים בשיטות stereological משוחדות. ודא שstereologist עיוור לטיפול שקיבל. תכלול גליה על בסיס קוטר סומה &lt;מיקרומטר 5 ולספור רק את תאים עם גרעין גלוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את SNC (וVTA וLC) על ידי המקומות המרחבי של תאי TH + וציוני דרך / גבולות אנטומיים לפי אטלס המוח של Paxinos ווטסון 7. רוזן TH + תאים בתוך מסגרת ספירה (55 x 55 מיקרומטר = 3025 מיקרומטר 2) במרווחי זמן קבוע מראש רגילים (x = 140 מיקרומטר, y = 140 מיקרומטר לSNC; x = 100 מיקרומטר, y = 100 מיקרומטר לVTA וLC) לאורך כל גרעין בכל חלק רביעי. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Aumann, T., Horne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-dependent+regulation+of+the+dopamine+phenotype+in+substantia+nigra+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Activity-dependent regulation of the dopamine phenotype in substantia nigra neurons.</a> Journal of neurochemistry. 121, 497-515 (2012).</li>
<li>Sauer, H., Oertel, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+degeneration+of+nigrostriatal+dopamine+neurons+following+intrastriatal+terminal+lesions+with+6-hydroxydopamine%3A+a+combined+retrograde+tracing+and+immunocytochemical+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Progressive degeneration of nigrostriatal dopamine neurons following intrastriatal terminal lesions with 6-hydroxydopamine: a combined retrograde tracing and immunocytochemical study in the rat.</a> Neuroscience. 59, 401-415 (1994).</li>
<li>Stanic, D., Finkelstein, D. I., Bourke, D. W., Drago, J., Horne, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timecourse+of+striatal+re-innervation+following+lesions+of+dopaminergic+SNpc+neurons+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Timecourse of striatal re-innervation following lesions of dopaminergic SNpc neurons of the rat.</a> The European journal of neuroscience. 18, 1175-1188 (2003).</li>
<li>Aumann, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+activity+regulates+expression+of+tyrosine+hydroxylase+in+adult+mouse+substantia+nigra+pars+compacta+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Neuronal activity regulates expression of tyrosine hydroxylase in adult mouse substantia nigra pars compacta neurons.</a> Journal of neurochemistry. 116, 646-658 (2011).</li>
<li>Aumann, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SK+channel+function+regulates+the+dopamine+phenotype+of+neurons+in+the+substantia+nigra+pars+compacta%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">SK channel function regulates the dopamine phenotype of neurons in the substantia nigra pars compacta.</a> Experimental neurology. 213, 419-430 (2008).</li>
<li>Aumann, T. D., Tomas, D., Horne, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+and+behavioral+modulation+of+the+number+of+substantia+nigra+dopamine+neurons+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Environmental and behavioral modulation of the number of substantia nigra dopamine neurons in adult mice.</a> Brain and behavior. 3, 617-625 (2013).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The mouse brain in stereotaxic coordinates</a>. , 2nd, Academic Press. (2001).</li>
<li>Schultz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+dopamine+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Behavioral dopamine signals.</a> Trends in neurosciences. 30, 203-210 (2007).</li>
<li>Sun, P., Smith, A. S., Lei, K., Liu, Y., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+bonds+in+male+prairie+vole%3A+long-term+effects+on+emotional+and+social+behavior%2C+physiology%2C+and+neurochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Breaking bonds in male prairie vole: long-term effects on emotional and social behavior, physiology, and neurochemistry.</a> Behavioural brain research. 265, 22-31 (2014).</li>
<li>Aponso, P. M., Faull, R. L., Connor, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+progenitor+cell+proliferation+and+astrogenesis+in+the+partial+progressive+6-hydroxydopamine+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Increased progenitor cell proliferation and astrogenesis in the partial progressive 6-hydroxydopamine model of Parkinson's disease.</a> Neuroscience. 151, 1142-1153 (2008).</li>
<li>Frielingsdorf, H., Schwarz, K., Brundin, P., Mohapel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((No+evidence+for+new+dopaminergic+neurons+in+the+adult+mammalian+substantia+nigra%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">No evidence for new dopaminergic neurons in the adult mammalian substantia nigra.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 10177-10182 (2004).</li>
<li>Lie, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adult+substantia+nigra+contains+progenitor+cells+with+neurogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The adult substantia nigra contains progenitor cells with neurogenic potential.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 6639-6649 (2002).</li>
<li>Chen, Y., Ai, Y., Slevin, J. R., Maley, B. E., Gash, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+proliferation+in+the+adult+hippocampus+and+substantia+nigra+induced+by+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">Progenitor proliferation in the adult hippocampus and substantia nigra induced by glial cell line-derived neurotrophic factor.</a> Experimental neurology. 196, 87-95 (2005).</li>
<li>Yoshimi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possibility+for+neurogenesis+in+substantia+nigra+of+parkinsonian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Possibility for neurogenesis in substantia nigra of parkinsonian brain.</a> Ann Neurol. 58, 31-40 (2005).</li>
<li>Shan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+de+novo+neurogenesis+and+dopaminergic+neurogenesis+in+the+substantia+nigra+of+1-methyl-4-phenyl-1%2C2%2C3%2C6-tetrahydropyridine-induced+Parkinson%27s+disease-like+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced de novo neurogenesis and dopaminergic neurogenesis in the substantia nigra of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-induced Parkinson's disease-like mice.</a> Stem Cells. 24, 1280-1287 (2006).</li>
<li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+neurogenesis+in+the+adult+mammalian+substantia+nigra%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Evidence for neurogenesis in the adult mammalian substantia nigra.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 7925-7930 (2003).</li>
<li>Baker, H., Kawano, T., Margolis, F. L., Joh, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transneuronal+regulation+of+tyrosine+hydroxylase+expression+in+olfactory+bulb+of+mouse+and+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Transneuronal regulation of tyrosine hydroxylase expression in olfactory bulb of mouse and rat.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 3, 69-78 (1983).</li>
<li>Black, I. B., Chikaraishi, D. M., Lewis, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-synaptic+increase+in+RNA+coding+for+tyrosine+hydroxylase+in+a+rat+sympathetic+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Trans-synaptic increase in RNA coding for tyrosine hydroxylase in a rat sympathetic ganglion.</a> Brain research. 339, 151-153 (1985).</li>
<li>Zigmond, R. E., Chalazonitis, A., Joh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preganglionic+nerve+stimulation+increases+the+amount+of+tyrosine+hydroxylase+in+the+rat+superior+cervical+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Preganglionic nerve stimulation increases the amount of tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion.</a> Neuroscience letters. 20, 61-65 (1980).</li>
<li>Biguet, N. F., Rittenhouse, A. R., Mallet, J., Zigmond, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preganglionic+nerve+stimulation+increases+mRNA+levels+for+tyrosine+hydroxylase+in+the+rat+superior+cervical+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Preganglionic nerve stimulation increases mRNA levels for tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion.</a> Neuroscience letters. 104, 189-194 (1989).</li>
<li>Richard, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+tyrosine+hydroxylase+gene+expression+in+rat+brain+and+adrenals+by+exposure+to+cold%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience+research%22%5BJournal%5D)">Modulation of tyrosine hydroxylase gene expression in rat brain and adrenals by exposure to cold.</a> Journal of neuroscience research. 20, 32-37 (1988).</li>
<li>Schalling, M., Stieg, P. E., Lindquist, C., Goldstein, M., Hokfelt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+increase+in+enzyme+and+peptide+mRNA+in+sympathetic+ganglia+after+electrical+stimulation+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Rapid increase in enzyme and peptide mRNA in sympathetic ganglia after electrical stimulation in humans.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 86, 4302-4305 (1989).</li>
<li>Liaw, J. J., He, J. R., Barraclough, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+changes+in+tyrosine+hydroxylase+mRNA+levels+in+A1%2C+A2+and+locus+ceruleus+neurons+following+electrical+stimulation+of+A1+noradrenergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research.+Molecular+brain+research%22%5BJournal%5D)">Temporal changes in tyrosine hydroxylase mRNA levels in A1, A2 and locus ceruleus neurons following electrical stimulation of A1 noradrenergic neurons.</a> Brain research. Molecular brain research. 13, 171-174 (1992).</li>
<li>Watabe-Uchida, M., Zhu, L., Ogawa, S. K., Vamanrao, A., Uchida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-brain+mapping+of+direct+inputs+to+midbrain+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Whole-brain mapping of direct inputs to midbrain dopamine neurons.</a> Neuron. 74, 858-873 (2012).</li>
<li>Tepper, J. M., Lee, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABAergic+control+of+substantia+nigra+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+brain+research%22%5BJournal%5D)">GABAergic control of substantia nigra dopaminergic neurons.</a> Progress in brain research. 160, 189-208 (2007).</li>
<li>Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+enrichment+and+brain+repair%3A+harnessing+the+therapeutic+effects+of+cognitive+stimulation+and+physical+activity+to+enhance+experience-dependent+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropathology+and+applied+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Environmental enrichment and brain repair: harnessing the therapeutic effects of cognitive stimulation and physical activity to enhance experience-dependent plasticity.</a> Neuropathology and applied neurobiology. 40, 13-25 (2014).</li>
<li>Nithianantharajah, J., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriched+environments%2C+experience-dependent+plasticity+and+disorders+of+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enriched environments, experience-dependent plasticity and disorders of the nervous system.</a> Nature reviews. Neuroscience. 7, 697-709 (2006).</li>
<li>Chmiel, D. J., Noonan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preference+of+laboratory+rats+for+potentially+enriching+stimulus+objects%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animals%22%5BJournal%5D)">Preference of laboratory rats for potentially enriching stimulus objects.</a> Laboratory animals. 30, 97-101 (1996).</li>
<li>Hanmer, L. A., Riddell, P. M., Williams, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+a+runway+paradigm+to+assess+the+relative+strength+of+rats%27+motivations+for+enrichment+objects%5BTitle%5D)+AND+%22Behavior+research+methods%22%5BJournal%5D)">Using a runway paradigm to assess the relative strength of rats' motivations for enrichment objects.</a> Behavior research methods. 42, 517-524 (2010).</li>
<li>Burrows, E. L., McOmish, C. E., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene-environment+interactions+and+construct+validity+in+preclinical+models+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+neuro-psychopharmacology+%26+biological+psychiatry%22%5BJournal%5D)">Gene-environment interactions and construct validity in preclinical models of psychiatric disorders.</a> Progress in neuro-psychopharmacology & biological psychiatry. 35, 1376-1382 (2011).</li>
<li>Van de Weerd, H. A., Van Loo, P. L. P., Van Zutphen, L. F. M., Koolhaas, J. M., Baumans, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strength+of+preference+for+nesting+material+as+environmental+enrichment+for+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Animal+Behaviour+Science%22%5BJournal%5D)">Strength of preference for nesting material as environmental enrichment for laboratory mice.</a> Applied Animal Behaviour Science. 55, 369-382 (1998).</li>
<li>Rampon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+environmental+enrichment+on+gene+expression+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Effects of environmental enrichment on gene expression in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12880-12884 (2000).</li>
<li>Eckert, M. J., Abraham, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+environmental+enrichment+exposure+on+synaptic+transmission+and+plasticity+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Current+topics+in+behavioral+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Effects of environmental enrichment exposure on synaptic transmission and plasticity in the hippocampus.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 15, 165-187 (2013).</li>
<li>Sztainberg, Y., Chen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+environmental+enrichment+model+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">An environmental enrichment model for mice.</a> Nature protocols. 5, 1535-1539 (2010).</li>
<li>Sale, A., Berardi, N., Maffei, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+and+brain+plasticity%3A+towards+an+endogenous+pharmacotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+reviews%22%5BJournal%5D)">Environment and brain plasticity: towards an endogenous pharmacotherapy.</a> Physiological reviews. 94, 189-234 (2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

מניפולציות סביבתיות המוטיבציה מאחורי העיצוב של מניפולציות אלה סביבתיים (זיווג בין המינים והעשרה סביבתית) הייתה לקבוע האם הסביבה, ו / או התנהגות תתבקש על ידי הסביבה, קשורה לשינויים במספר תאי עצב DA המוח התיכון. הדגש היה אפוא במתן סביבות ומגרים התנהגויות שעשויות לעסוק איתות DA המוח התיכון. זיווג אלה כללו עם המין השני, והעשרה סביבתית הכוללת גישה ולקן פועל גלגלים, חבלים, סולמות, מנהרות, ואובייקטים לחקור, לשח...

הוא חשב DArgic איתות על ידי תאי עצב באזור הגחון tegmental (VTA) וcompacta סעיפי nigra substantia (SNC) של המוח התיכון להיות חשוב להתנהגויות קוגניטיביות, רגשיות ומוטורי מוטיבציה גמול. עם זאת, איתות DA המוח התיכון יותר מדי או מעט מדי גורמת לתסמינים רבים השבתה במגוון רחב של הפרעות נוירולוגיות (למשל מחלת פרקינסון, קשב וריכוז והפרעת היפראקטיביות, סכיזופרניה, והתמכרות לסמים). תרופות שתגדלנה או יקטינו DA האיתות להקל על תסמינים אלה, אולם הם גם מייצרים תופעות לוואי מיוחסות לאיתות dysregulated והשפעות חוץ-היעד. יעילות תרופה גם יורדת לאורך זמן בשל תגובות מפצות של המוח. האתגר לכן הוא להחזיר איתות DA המוח התיכון נורמלית באופן יותר ממוקד ופיזיולוגי, וגישה מועדפת היא על ידי הגדלת או הפחתת מספר תאי עצב DA המוח התיכון. ראיות הולכות ומצטברות במשך sevהעשורים eral שהביטוי של גנים וחלבונים מעורבים בחילוף חומרים וDA סחר וקטכולאמינים אחרים בתאים בוגרים הוא לשינוי (שנסקרו ב1). במוח תיכון, מספר immunopositive hydroxylase טירוזין (TH +, אנזים שער הגבלה בסינתזת DA) נוירונים ירידות לאחר מכן מגדילה הבא ממשל עצבי 2,3, בעוד שמספר TH immunonegative (TH-) נוירונים מציג את הדפוס ההפוך (כלומר עליות לאחר מכן יורד 3). זה עולה בקנה אחד עם אובדן ולאחר מכן לקבל של &#39;פנוטיפ DA &quot;על ידי חלק מתאים. מספר הנוירונים TH + וTH- SNC גם הוכח לשנות כיוונים שווים אך הפוכים לאחר טיפולים שונים המשנים את הפעילות החשמלית של תאים אלה 4,5. לדוגמא, עירוי של הקטנות-המוליכות, אשלגן מופעל סידן (SK) apamin אנטגוניסט ערוץ למוח תיכון 2 שבועות מקטין את מספר TH + ועליות (באותו הסכום) נוmber של TH- SNC נוירונים 4,5. בניגוד לכך, עירוי של SK אגוניסט ערוץ 1-EBIO מגדיל את מספר TH + ויורד (באותו הסכום) מספר הנוירונים TH- SNC 4,5. שינויים דומים נראו הבא מגוון טיפולי מיקוד פעילות עצבית SNC, כוללים כמה שממוקדים תשומות מביא 4. תקנה זו לכאורה של מספר הנוירונים SNC DArgic על ידי פעילות עצבית וקלט מביא מעלה את האפשרות שהסביבה או ההתנהגות יכולה להשפיע על מספר הנוירונים SNC. יש אכן עכברים בוגרים שנחשפו לסביבות שונות TH פחות או יותר המוח התיכון (SNC וVTA) + נוירונים, ולפחות חלק משינויים הנגרם סביבה אלה בוטלו על ידי מצור מקביל של קלט הסינפטי במוח תיכון 6. המטרות של תקשורת זו הן: (1) לספק פרטים נוספים על כיצד ליישם המניפולציות הסביבתיות שלנו וחליטות בסמים; ו- (2) ולמסור נתונים נוספים התומכים לטענה שלנו שהדוארnvironment מסדיר את מספר תאי עצב DA המוח התיכון, באמצעות קלט מביא.

<table><tbody><tr><td>Isofluorane</td><td>Baxter Healthcare Pty Ltd, בקסטר דרייב, NSW 2146, אוסטרליה</td><td>AHN3640</td><td></td></tr><tr><td>ALZET משאבה אוסמוטית 1002</td><td>DURECT Corporation, PO Box 530 קופרטינו, CA 95015-0530</td><td>0004317</td><td></td></tr><tr><td>ערכת עירוי מוח ALZET 1</td><td>DURECT Corporation, PO Box 530 קופרטינו, CA 95015-0530</td><td>0004760</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק צינורית ALZET 1</td><td>DURECT Corporation, PO Box 530 קופרטינו, קליפורניה 95015-0530</td><td>0008860</td><td></td></tr><tr><td>Vertex Monomer ריפוי עצמי (ממס אקרילי דנטל)</td><td>Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, הולנד</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Vertex Self Curing (אבקת אקריליק דנטלית)</td><td>Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, הולנד</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>METACAM (Meloxicam)</td><td>Troy Laboratories, 98 long Street, smithfield NSW 2164 אוסטרליה</td><td>L10100</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פנטוברביטון</td><td>Lethabarb, Virbac, Milperra, NSW, אוסטרליה</td><td>571177</td><td></td></tr><tr><td>סרום עיזים רגיל</td><td>chemicon-temecula, CA</td><td>S26-Litre</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Merck Millipore Headquarters&nbsp;, 290 Concord road, Billerica, MA 01821</td><td>1.08603.1000</td><td></td></tr><tr><td>ארנב פוליקלונלי אנטי-טירוזין הידרוקסילאז</td><td>Merck Millipore Headquarters&nbsp;, 290 Concord road, Billerica, MA 01821</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>Polyclonal biotinylated עז אנטי-ארנב</td><td>Dako Australia Pty. Ltd., Suite 4, Level 4, 56 Berry street, North Sydney, NSW, Australia 2060</td><td>EO432</td><td></td></tr><tr><td>Avidin peroxidase</td><td>Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU</td><td>A3151-1mg</td><td></td></tr><tr><td>Diamino-benzidine</td><td>Sigma-aldrich, קאסל היל, NSW 1765 AU</td><td>D-5637</td><td></td></tr><tr><td>חוקר סטריאו</td><td>MicroBrightField Bioscience, 185 Allen Brook Lane, Suite 101, Williston, VT 05495</td><td>n/a</td><td></td></tr></tbody></table>

אפנון סביבתי של מספר המוח התיכון דופמין נוירונים בעכברים בוגרים

Environmental Modulations of the Number of Midbrain Dopamine Neurons in Adult Mice

שינויים ארוכי טווח במוח או &#39;הגמישות מוחית&#39; עומדים בבסיס התנהגות מסתגלת ותיקון המוח הבא מחלה או פציעה. יתר על כן, יחסי גומלין עם הסביבה שלנו יכולים לגרום לגמישות מוחית. יותר ויותר, מחקר מנסה לזהות אילו סביבות לעורר גמישות מוחית מועילה לטיפול במוח והפרעות התנהגות. שתי מניפולציות סביבתיות מתוארות בי להגדיל או להקטין את מספר immunopositive hydroxylase טירוזין (TH +, אנזים שער הגבלה בדופמין סינתזה (DA)) תאי עצב במוח התיכון העכבר הבוגר. הראשון כולל גברים זיווג ונקבות עכברים יחד ברציפות במשך השבוע 1, אשר מגדיל TH + נוירונים המוח התיכון בכ -12% בגברים, אך יורד TH + נוירונים המוח התיכון בכ -12% בנשים. השנייה כוללת עכברי דיור ברציפות במשך 2 שבועות ב&#39;סביבות מועשרים &quot;(EE) המכילות גלגלי ריצה, צעצועים, חבלים, חומר קינון, וכו &#39;, שבו אניncreases TH + נוירונים המוח התיכון בכ -14% בגברים. בנוסף, פרוטוקול מתואר במקביל יציקת תרופות ישירות לתוך המוח התיכון במניפולציות הסביבתיות אלה כדי לסייע בזיהוי מנגנוני פלסטיות מוח לסביבה מושרה. לדוגמא, EE-גיוס של יותר TH + נוירונים המוח התיכון הוא בוטל על ידי מצור מקביל של קלט סינפטי על נוירונים המוח התיכון. יחד, נתונים אלה מצביעים על כך שמידע על הסביבה מועבר באמצעות קלט סינפטי לנוירונים המוח התיכון כדי לעבור או לבטל ביטוי של גני &#39;DA&#39;. כך, גירוי סביבתי מתאים, או תרופת מיקוד של המנגנונים העומדים בבסיס, עשויה להיות מועילה לטיפול בהפרעות במוח והתנהגות הקשורים לחוסר איזון בDA המוח התיכון (למשל מחלת פרקינסון, קשב וריכוז והפרעת היפראקטיביות, סכיזופרניה, והתמכרות לסמים).

עכברים בוגרים נתון למניפולציות הסביבתיות אלה שינו מספרים של המוח התיכון (SNC וVTA), אבל לא LC, TH + נוירונים, וEE בתוספת עירוי המוח התיכון במקביל של שני picrotoxin או bicuculline (GABA יריבים הקולטן) מבטל EE-גיוס של יותר SNC TH + נוירונים. נתונים אלו פורסמו בעבר ב- 6. הנתונים הנוכחיים לוקטו בניסויים לשכפל בוצעו כחלק ממחקר שהקודם, אך עדיין לא פורסמו במקום אחר. באופן ספציפי, יש לי עכברי זכרים בוגרים שהות...

פרוטוקול זה מתאר שתי מניפולציות סביבתיות שונות ופרוטוקול עירוי מוחי במקביל לחקר שינויים מוחיים המושרים על ידי הסביבה העומדים בבסיס התנהגות הסתגלות ותיקון מוח בעכברים בוגרים.

Long-lasting changes in the brain or &#8216;brain plasticity&#8217; underlie adaptive behavior and brain repair following disease or injury. Furthermore, ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לספק מצבים סביבתיים מבוקרים המעוררים פלסטיות מוחית ושינויים התנהגותיים בעכברים. דבר זה מושג על ידי השכנת עכברים בזוגות של זכר ונקבה לעומת זוגות בקרה של זכר-זכר ונקבה-נקבה, כדי לבחון את ההשפעות של הצמדה מגדרית ממושכת על המוח; לחלופין, ניתן להשכין עכברים יחד בכלובים המלאים בחפצים שונים לחקר ולמשחק לעומת כלובים סטנדרטיים, כדי לבחון את ההשפעות של העשרה סביבתית על המוח. ניתן להוסיף טיפולים נוספים, כגון מתן תרופות, לגירויים סביבתיים אלו כדי לסייע בזיהוי המנגנונים העומדים מאחורי השינויים המוחיים וההתנהגותיים שנצפו.התוצאות מראות כי העשירות הסביבתיות והטיפולים הללו משרים שינויים במספר הנוירונים הדופמינרגים במוח האמצעי, התלויים בתמסורת סינפטית GABAergic במוח האמצעי. העשרה סביבתית היא פרדיגמה המגבירה את הגירוי הסומטוסנסורי, המוטורי והקוגניטיבי עבור עכברים. באמצעות גישה זו, מחקרים הראו פלסטיות עצבית מוגברת וכן שיפורים בלמידה ובזיכרון במודלים רבים של מחלות.ההשלכות של טכניקה זו נשמעות על הבנת מנגנונים של פלסטיות המוח בבגרות הנגרמת מהשפעות סביבתיות. דבר זה רלוונטי לטיפול במחלות רבות של המוח והנפש. הרעיון לשיטה זו עלה לראשונה כאשר הבחנו כי מספר נוירוני הדופמין במוח האמצעי משתנה בתגובה להפרעה בפעילות הנוירונלית של המוח האמצעי המונעת מקלטים סינפטיים.הדגמה חזותית של משאבת האוסמוזה ושל קנולת ההזרקה למוח עשויה להיות קריטית, כיוון שהלימוד של פרוצדורות אלו יכול להיות קשה למדי. תיאורים כתובים עבור הצמדה לפי מין. שפיצו בבתים קבוצות של עכברים זכרים ונקבות בוגרים מבחינה מינית ובעלי גיל תואם לפי מינם, תוך הימנעות מהצמדה של בני אותה שגרייה; מקמו באופן אקראי כל עכבר בזוג של זכר-זכר, זוג של נקבה-נקבה או זוג של זכר-נקבה בכלוב נקי בבידוד, עם גישה חופשית למזון ומים, בשלב זה ובמהלך כל תהליך ההצמדה לפי מין.שמרו על כל הגירויים הסביבתיים המיותרים קבועים או מופצים באופן שווה בין כל העכברים, והחזיקו את בעלי החיים באופן רציף במשך שבעה ימים. לצורך העשרה סביבתית, שבצו באופן אקראי עכברים זכרים או נקבות בוגרים מבחינה מינית ובגיל תואם לאחת משלוש קבוצות: דיור סטנדרטי, גלגל ריצה או סביבה מועשרת, למשך שלושה ימים לפחות. המשיכו להחזיק אותם כך.עם גישה חופשית למזון ולמים למשך 14 ימים. במהלך העשראה סביבתית, הכלוב הסטנדרטי צריך להכיל רק מצע. כלוב גלגל הריצה צריך להכיל מצע בתוספת שני גלגלי ריצה, והכלוב עם העשראה סביבתית צריך להכיל מצע, שני גלגלי ריצה וצעצועים.העבירו את העכברים בעשירה סביבתית להעשרה-על נוספת על ידי הצבתם יחד בכלוב גדול יותר המכיל צעצועים חדשים למשך שעה אחת ביום. באותה שעה בכל יום, חמישה ימים בשבוע, החזירו את העכברים לכלוב העשירה הסביבתית שלהם. לאחר כל מפגש, שמרו על אלמנט החידוש על ידי הצגת סט שונה של צעצועים בכל פעם.ניקוי כל הצעצועים שיוצגו לעכברים באמצעות מי סבון ו-80% ethanol. כדי להסיר כל ריח, יש להעביר את קבוצות הבית הסטנדרטיות ואת קבוצות גלגל הריצה באותו אופן למשך פרק זמן דומה מדי יום, אך ללא הוספת חומרי העשרה-על ביום שלפני ההשתלה. תוך שימוש בטכניקה אסיפטית, מלאו כל משאבה אוסמוטית סטרילית, צינור חיבור וקנולה בתמיסת תרופה או תמיסת נשאי (vehicle) סטרילית בהתאם להוראות היצרן.לאחר מכן, חברו את החלקים יחד והדגירו אותם למשך הלילה בתמיסת סליין סטרילית בטמפרטורה של 37 °C ביום הניתוח. לאחר אישור הסדציה באמצעות צביטה בין האצבעות, מרחו משחת עיניים על בעל החיים והניחו אותו במצב שכיבה (supine) על פד חימום. לאחר מכן, תוך שימוש בטכניקה אספטית, בצעו חתך קו אמצע דרך העור, החל משני סנטימטרים posterior לקצה האחורי של הגולגולת, ועד למספר בין העיניים; בצעו דיסקציה קהה של העור מהפציה שמתחתיו לאורך גב העכבר, כדי ליצור כיס תת-עורי הגדול מספיק כדי להכניס בנוחות את המשאבה ואת צינור החיבור.לאחר מכן, גרדו את הפסציה כדי לנקות את ההיבט הדורסלי של הגולגולת, והשתמשו במקדח דנטלי בעל קוטר של כ-1.5 millimeter כדי לקדוח אל תוך הגולגולת בקואורדינטות הסטריאוטקסיות המתאימות עד שתישאר שכבת עצם דקה וגמישה; קלפו שכבה זו באמצעות פינצטה עדינה. ברגע שהגולגולת נקייה מדם ומשברי עצם ואין דימום נוסף, השתמשו במחזיק קנולה כדי להניח את המשאבה ואת צינור החיבור לתוך הכיס שנוצר זה עתה. כעת, מקמו את קצה הקנולה בקואורדינטות הסטריאוטקסיות המתאימות על פני השטח של המוח, ולאחר מכן הורידו בזהירות את הצינור לתוך המוח, עד למרחק של millimeter אחד מעל העומק הנדרש.ודאו שפני הגולגולת נקיים ויבשים שוב, ולאחר מכן השתמשו בקיסם כדי להחליק אקריליק דנטלי שהוכן טרי על פני כל השטח החשוף של הגולגולת, כולל לתוך חור הקידוח מסביב לקנולה, לפני שהאקריליק מתקשה. הורידו את קצה הקנולה לעומק הנותר אל היעד. כאשר הקנולה במקומה, מרחו בזהירות שכבה שנייה של אקריליק דנטלי שהוכן טרי על הגולגולת, וכן על תמיכת הפלסטיק הלבנה של הקנולה, כדי לקבע את הקנולה במקומה.לאחר שהאקריליק התקשה, הסר בזהירות את מחזיק הקנולה והשתמש בלהב סקלפל מחומם כדי להמיס את לשונית הפלסטיק של הקנולה. לאחר מכן, תפר את העור מעל השתל כולו. מרח משחה אנטיספטית על שולי העור וניתן לבעל החיים תרופה נוגדת דלקת.לבסוף, הוצאו את העכבר מהמסגרת. הניחו אותו תחת מנורת חימום ועקבו אחר בעל החיים עד להחלמתו המלאה. לעכברים זכרים בוגרים שהוצמדו לעכברות בוגרות למשך שבעה ימים יש כ-12% יותר נוירונים באזור ה-SNC החיובי במוח האמצעי מאשר לזכרים שהוצמדו לזכרים.לעומת זאת, לנקבות שזווגו עם זכרים יש כ-12% פחות נוירוני SNC חיוביים ל-TH מאשר לנקבות שזווגו עם נקבות. מספר נוירוני ה-SNC והאזור הוונטרלי הטגמנטלי (ventral tegmental area) החיוביים ל-TH גדל גם בעכברי זכרים בוגרים שהוכפפו לזיווג בסביבה מועשרת בתוספת העשרה-על (super enrichment) למשך 14 ימים. בבעלי חיים שקיבלו סביבה מועשרת בתוספת העשרה-על עם עירוי של חומר בקרה (vehicle), נצפו כ-14% יותר נוירוני SNC חיוביים ל-TH.לעומת זאת, בעלי חיים המגורים בתנאים סטנדרטיים שקיבלו עירוי של חומר נשאי (vehicle), אשר הועברו לדיור מועשר סביבתית בתוספת העשרה-על (super enrichment) יחד עם עירוי של אנטגוניסט לקולטן gabaa, אינם מראים עלייה זו. בעת ביצוע מניפולציות סביבתיות, חשוב לזכור לצמצם למינימום כל הפרעה לבעלי החיים, כגון שמירה על רעש מינימלי והימנעות מהחלפות כלובים. לעיתים קרובות, בעת הקמת סביבה מועשרת, קריטי לכלול חומרי קינון מגוונים ולשמור על מיקום קינון קבוע כדי למזער את רמות הלחץ של בעלי החיים.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכישו הבנה טובה באופן שבו ניתן להשפיע על סביבתם של עכברים בוגרים כדי לחולל שינויים במוח ובהתנהגות. זכרו כי בעת עבודה עם התרופות, אלו עלולות להיות מסוכנות ביותר, ולכן הקפידו תמיד ללבוש ביגוד מגן בעת הכנת המשאבות האוסמוטיות.

environmental-modulations-number-midbrain-dopamine-neurons-adult

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

ראשי ניתק הדופמין במוח התיכון בתרביות תאים מאפשרים ללמוד את המאפיינים presynaptic של נוירונים דופמין. הם יכולים לשמש כדי לפקח בזמן אמת שחרור הדופמין קינטיקה של חלבונים / רמות ה-mRNA של הרגולטורים של exocytosis דופמין. כאן, אנו מראים לך איך לייצר מן התרבויות הללו בילודים מכרסמים.

ראשי ניתק דופמין במוח התיכון Cell תרבויות מן ילודים מכרסמים

פרוטוקול לביצוע חד צדדיים 6-OHDA נגעים של צרור המוח הקדמי המדיאלי בעכברים מתואר. שיטה זו יש שיעור תמותה נמוך (13.3%) עם 89% מבעלי החיים ששרדו מראה&gt; אובדן 95% של דופמין striatal ו 90.63 ± -4.02% הטיה לכיוון הסיבוב ipsiversive בצד של הנגע.

פיתוח מודל חד צדדי, lesioned מאוס 6-OHDA של מחלת פרקינסון

דופאמין הוא מוסדר בבירור בגרעין המוח התיכון, אשר מכילים תאים הגופות דנדריטים של נוירונים דופאמין. כאן נתאר את הגישה לנתיחה ו מדגם הטיפול על מנת למקסם את התוצאות, ולכן מסקנות ותובנות, על ויסות הדופמין בגרעין המוח התיכון של nigra substantia (SN) ואזור tegmental הגחוני (VTA) במכרסמים.

פרופיל מקיף של הסדרת substantia nigra הדופמין ואזור Tegmental הגחון

בהפרעות ומחל פרקינסון תנועה באופן כללי, מבחני התנהגות רגישים ואמינים הם חיוניים לבדיקה הרפוי פוטנציאלי חדשה. כאן, אנו מתארים לניהול סוללה של בדיקות הסנסורית לעכברים שרגישים לדרגות שונות של פגיעה במערכת nigrostriatal ושימושית למחקרים פרה.

הערכת התפקוד הסנסורית בעכברי מודל של מחלת פרקינסון

שיטות למניפולציה והניתוח של neurogenesis בהיפוקמפוס המבוגר NF-κB תלוי מתוארות. פרוטוקול מפורט מוצג לבדיקה משוננת gyrus תלוי התנהגותי (שמכונה במבוך ההפרדה בארנס דפוס המרחבי) לחקירת תוצאה קוגניטיבית בעכברים. טכניקה זו צריכה גם לעזור לאפשר חקירות בהגדרות ניסיוניות אחרות.

שיטות לאפנון וניתוח של Neurogenesis מבוגרים NF-κB תלוי

ליפוקסיג'נאז (LOX) isozymes יכול לייצר מוצרים שעשויים להגדיל או להקטין נוירואינפלמציה ו ניוון עצבי. מחקר אינטראקציה גנטית-סביבה יכול לזהות LOX השפעות ספציפיות isozyme. באמצעות 1-מתיל-4-פניל-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) מודל של נזק nigrostriatal בשני קווים מהונדסים LOX isozyme לקוי מאפשר להשוות את התרומה של איזוזימים LOX על שלמות דופאמין ודלקת.

מודלים לאינטראקציה בין סביבת גנים כדי לחשוף מנגנוני רגישות במחלת פרקינסון

נוירונים דופמינרגיים ממלאים תפקיד ויסות חיוני במוח. אובדן שלהם קשור למחלת פרקינסון. בסרטון זה, אנו מראים כיצד ליצור תרביות ראשוניות של נוירונים דופמינרגיים מרכזיים ממזנספלון של עכברים עובריים. תרבויות כאלה שימושיות לחקר הפגיעות הקיצונית של נוירונים אלה ללחצים שונים.

יסודי תרבות של עכבר דופאמין נוירונים

הגורמים לניוון של נוירונים דופמינרגיים במוח התיכון במהלך מחלת פרקינסון אינם מובנים במלואם. מערכות תרבית תאיות מספקות כלי חיוני לחקר התכונות הנוירופיזיולוגיות של נוירונים אלה. כאן אנו מציגים פרוטוקול אופטימלי, שניתן להשתמש בו למודלים במבחנה של ניוון עצבי.

בידוד, תרבות והטווח ארוך תחזוקה של יסודיים mesencephalic דופאמין נוירונים ממוח עוברי מכרסם

ספיגת דופמין synaptosomal ו כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים ניתוח מייצגים ניסוי כלים לחקור דופמין הומאוסטזיס בעכברים על-ידי הערכת את הפונקציה של המשגר דופמין, רמות הדופמין ברקמת striatal, בהתאמה. כאן אנו מציגים פרוטוקולים למדוד דופמין רקמות תוכן, להעריך את הפונקציונליות של המשגר דופמין.

הערכה של דופאמין הומאוסטזיס בעכברים באמצעות ניתוח ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית, דופמין Synaptosomal ספיגת

עבודה זו מציג עבור הערכת stereological לא משוחדת של מספרים דופאמינרגיים וכולינרגיים פרוטוקול צעד אחר צעד העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד (קרי, מיקרוסקופ אור, טבלה אובייקט ממונע (x, y, z המטוס), ותוכנה הציבור לניתוח תמונה דיגיטלית.

הערכה stereological של דופאמין נוירון במספר העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד אופטי Fractionator

פיתחנו מודל לחץ חברתי מואץ עבור עכברי C57BL/6 מתבגרים, הפועל הן אצל זכרים והן אצל נקבות ומאפשר חשיפה במהלך תקופות התבגרות בדידות. חשיפה למודל זה גורמת להימנעות חברתית, אך רק בתת-קבוצה של עכברים זכרים ונקבות מובסים.

מודל לחץ תבוסה חברתית עבור עכברים מתבגרים C57BL/6 זכרים ונקבות

למד כיצד אפנון סביבתי משפיע על מספר נוירונים דופמינרגיים במוח התיכון בעכברים בוגרים. שיטה זו מאפשרת חקר פלסטיות מוחית ושינויים התנהגותיים תחת תנאי מגורים מבוקרים.

אפנון סביבתי של מספר המוח התיכון דופמין נוירונים בעכברים בוגרים

גלה סרטונים נוספים